绵羊毛囊特异表达基因KRTAP13.1，KRTAP3.3上游调控序列的克隆及鉴定
发布时间：2021-03-17 21:37
羊毛产业是我国畜牧业的重要产业之一,产毛性能的遗传改良对提高养羊业的经济效益有重要的意义,目前转基因技术的发展和应用为产毛性能的改良提供了新的途径。皮肤毛囊的发育直接影响着羊毛的产量和品质,因此克隆鉴定可驱动外源基因在绵羊毛囊中特异表达的毛囊组织特异型启动子,是利用转基因技术改良羊毛纤维品质的基础。因此,本研究以绵羊毛囊中特异表达的角蛋白和角蛋白关联蛋白为候选基因,克隆绵羊毛囊特异表达基因上游调控序列,目的是为利用转基因技术改良绵羊产毛性能提供基因表达调控元件。本研究采集了藏绵羊毛囊,皮肤（包含毛囊）,心脏,肝脏,脾脏,肺,肾,瘤胃,皱胃,直肠,十二指肠,淋巴,脂肪,肌肉,睾丸,卵巢组织,利用PCR和q-PCR技术,筛选出绵羊毛囊特异表达基因,克隆其上游调控序列,同时通过RNA原位杂交的方法对其在绵羊毛囊中的表达位置进行检测,得到如下结果：1)绵羊皮肤（包含毛囊）特异表达基因的筛选。根据NCBI Unigene的电子表达谱提供的绵羊皮肤（包含毛囊）特异表达候选基因的信息,通过RT-PCR对这些候选基因验证,得到一些绵羊皮肤,毛囊特异表达候选基因KRTAP6.1,KRTAP3.3,KRT...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表（Abbreviations）
1 前言
1.1 研究问题由来
1.2 毛囊及毛囊生物学
1.2.1 毛囊的发生
1.2.2 毛囊的形态结构
1.2.3 毛囊的类型
1.2.4 毛囊的周期性生长
1.3 毛发纤维的结构特性和成分
1.3.1 角蛋白
1.3.2 角蛋白关联蛋白
1.4 特异表达启动子的研究现状
1.4.1 启动子的结构和分类
1.4.2 启动子的研究方法
1.5 研究目的和意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 组织样品
2.1.2 菌株和质粒
2.2 方法
2.2.1 本研究的技术路线
2.2.2 RT-PCR法鉴定候选基因表达模式
2.2.2.1 绵羊毛囊RNA抽提
2.2.2.2 绵羊各组织RNA抽提
2.2.2.3 cDNA的获得
2.2.2.4 候选基因表达模式的鉴定
2.2.3 通过q-PCR的方法对绵羊毛囊特异表达基因的进行鉴定
2.2.4 绵羊KRTAP13.1,KRTAP3.3基因上游调控序列的克隆
2.2.5 KRTAP13.1P-ZSGreenl-1表达载体构建
2.2.6 绵羊KRTAP13.1基因原位杂交定位分析
2.2.6.1 绵羊皮肤切片制作
2.2.6.2 RNA原位杂交
3 结果
3.1 藏绵羊各组织RNA提取结果
3.2 15个绵羊皮肤和毛囊特异表达基因组织表达谱鉴定结果
3.3 10个绵羊毛囊特异表达候选基因q-PCR鉴定结果
3.4 绵羊KRTAP13.1,KRTAP3.3基因上游调控序列的克隆
3.5 KRTAP13.1基因启动子表达载体的构建及转基因小鼠的制作
3.6 绵羊KRTAP13.1基因原位杂交结果
3.7. 绵羊与其它物种KRTAP13.1基因编码区核苷酸序列的比较结果
3.8 绵羊KRTAP13.1蛋白进化分析
3.9 绵羊KRTAP13.1蛋白的二级结构分析
3.10 绵羊KRTAP13.1蛋白氨基酸组成分析
4 讨论
4.1 转基因动物育种技术对提高羊毛品质的重要作用
4.2 关于绵羊毛囊特异表达基因的筛选方法
4.3 关于启动子表达载体的构建
4.4 绵羊KRTAP13.1基因在毛囊中特异表达
4.5 报告基因的选择
5 小结
5.1 本研究的主要结论和成果
5.2 本研究的创新点和特色
5.3 本研究的不足和下一步工作建议
参考文献
附录：在读期间发表论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]影响羊毛品质的因素及控制措施[J]. 张敏,王乐,郑文新. 草食家畜. 2010(03)
[2]CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对黄色荧光蛋白表达调控作用的研究[J]. 李继东,丁林军,何生虎. 江西农业大学学报. 2009(06)
[3]绵羊毛发角蛋白结合蛋白启动子的克隆与活性分析[J]. 王春生,安铁洙,白秀娟,任洪林,柳增善. 中国兽医学报. 2008(02)
[4]转基因动物技术与动物育种[J]. 鲁绍雄,连林生. 云南畜牧兽医. 2002(03)
本文编号：3087752
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表（Abbreviations）
1 前言
1.1 研究问题由来
1.2 毛囊及毛囊生物学
1.2.1 毛囊的发生
1.2.2 毛囊的形态结构
1.2.3 毛囊的类型
1.2.4 毛囊的周期性生长
1.3 毛发纤维的结构特性和成分
1.3.1 角蛋白
1.3.2 角蛋白关联蛋白
1.4 特异表达启动子的研究现状
1.4.1 启动子的结构和分类
1.4.2 启动子的研究方法
1.5 研究目的和意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 组织样品
2.1.2 菌株和质粒
2.2 方法
2.2.1 本研究的技术路线
2.2.2 RT-PCR法鉴定候选基因表达模式
2.2.2.1 绵羊毛囊RNA抽提
2.2.2.2 绵羊各组织RNA抽提
2.2.2.3 cDNA的获得
2.2.2.4 候选基因表达模式的鉴定
2.2.3 通过q-PCR的方法对绵羊毛囊特异表达基因的进行鉴定
2.2.4 绵羊KRTAP13.1,KRTAP3.3基因上游调控序列的克隆
2.2.5 KRTAP13.1P-ZSGreenl-1表达载体构建
2.2.6 绵羊KRTAP13.1基因原位杂交定位分析
2.2.6.1 绵羊皮肤切片制作
2.2.6.2 RNA原位杂交
3 结果
3.1 藏绵羊各组织RNA提取结果
3.2 15个绵羊皮肤和毛囊特异表达基因组织表达谱鉴定结果
3.3 10个绵羊毛囊特异表达候选基因q-PCR鉴定结果
3.4 绵羊KRTAP13.1,KRTAP3.3基因上游调控序列的克隆
3.5 KRTAP13.1基因启动子表达载体的构建及转基因小鼠的制作
3.6 绵羊KRTAP13.1基因原位杂交结果
3.7. 绵羊与其它物种KRTAP13.1基因编码区核苷酸序列的比较结果
3.8 绵羊KRTAP13.1蛋白进化分析
3.9 绵羊KRTAP13.1蛋白的二级结构分析
3.10 绵羊KRTAP13.1蛋白氨基酸组成分析
4 讨论
4.1 转基因动物育种技术对提高羊毛品质的重要作用
4.2 关于绵羊毛囊特异表达基因的筛选方法
4.3 关于启动子表达载体的构建
4.4 绵羊KRTAP13.1基因在毛囊中特异表达
4.5 报告基因的选择
5 小结
5.1 本研究的主要结论和成果
5.2 本研究的创新点和特色
5.3 本研究的不足和下一步工作建议
参考文献
附录：在读期间发表论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]影响羊毛品质的因素及控制措施[J]. 张敏,王乐,郑文新. 草食家畜. 2010(03)
[2]CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对黄色荧光蛋白表达调控作用的研究[J]. 李继东,丁林军,何生虎. 江西农业大学学报. 2009(06)
[3]绵羊毛发角蛋白结合蛋白启动子的克隆与活性分析[J]. 王春生,安铁洙,白秀娟,任洪林,柳增善. 中国兽医学报. 2008(02)
[4]转基因动物技术与动物育种[J]. 鲁绍雄,连林生. 云南畜牧兽医. 2002(03)
本文编号：3087752
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3087752.html
