猪脑心肌炎HB10株的3C蛋白酶对Ⅰ型干扰素信号通路的影响
发布时间：2021-03-22 19:01
脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus, EMCV）为单股正链RNA病毒,属微RNA病毒科、心病毒属的成员,是猪脑心肌炎的病原体,同时也是一种传播广泛的自然疫源性人畜共患病病原。目前,我国猪场已经发现该病毒的感染,但是对其流行情况并不是十分明确,因此并没有很好的追踪和预防的方法。EMCV 3C蛋白酶具有一个半胱氨酸亲核作用的活性位点,它几乎参与了EMCV病毒蛋白后期所有的水解过程,其原核表达产物3C蛋白具有良好的免疫原性。本文对EMCVHB10分离株的3C基因进行克隆,构建了原核表达载体,并获得了原核表达的3C蛋白,制备了EMCV 3C蛋白的单克隆抗体,为该病毒的流行病学和分子诊断奠定了基础。有研究表明,EMCV感染可以诱导模式识别受体（RIG-I）的降解,细胞也可以通过另外一种识别RNA的受体（MDA5）来感应EMCV的侵袭,从而激活Ⅰ型干扰素信号通路及抑制病毒的增殖。但是也有研究表明,EMCV 3C蛋白是可以抑制IFNP信号通路的激活。基于这样的研究争议,EMCVHB10株对Ⅰ型干扰素的影响是有必要深入探究。首先EMCVHB10接种BHK-21细胞,接毒...
【文章来源】：长江大学湖北省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
I型干扰素介导的通路模式图
?第２窜猜脑心肌炎服］０?：化’蛋ｎ的单妃隆抗体的制备???Ｌａｎｅ?Ｍ：?Ｐｒｅ－ｓｔｒａｉｎｅｄ?Ｐｒｏｋｉｎ?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｌａ打ｅ?Ｉ；?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐＥＴ－２８ａ－３Ｃ?ｓｔｒａｉｎ?ｎｏｎｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＩＰＴＧ；??Ｌａｎｅ?２：?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐＥＴ－２８ａ－３Ｃ?ｓｔｒａｉｎ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＩＰＴＧ；??
２．?３．?３．１?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析３Ｃ单克隆抗体的特异性??用Ｍ饼为０．１的ＥＭＣＶ感染ＢＨＫ－２１细胞，感染１２?ｈ后用时ｚｏｌ对细胞进行??裂解，通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析，检测ＥＭＣＶ３Ｃ的表达情况，结果如图２－６所示，??使用２Ａ单克隆抗体能特异性的检测到２Ａ蛋白。??ＥＭＣＶ?■?＋??扣邸－補＞仁３Ｃ??１０邸’：??图２－６?ＥＭＣＶ?３Ｃ单克隆抗体的特昇性的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ鉴定??Ｆｉｇ．２－６?Ｗｅｓｌ：ｅｍ?ｂｌｏｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＥＭＣＶ?３Ｃ?ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ?ａｎｔ化ｏｄｙ?ｓｐｅｄｆｉｃｉｔｙ??２．?３．?３．?２间接免疫黄光分析％单克隆抗体特异性??ＢＨＫ－２１细胞被ＭＯＩ为０．１的ＥＭＣＶ感染，并且用ＰＣＡＧＧＳ－ＨＡ－３Ｃ转染ＨＥＫ??２９３?Ｉ细胞，２４?ｈ后对细胞进行处理，通过间接免疫羡光（ＩＦＡ）观察显示，在??ＰＣＡＧＧＳ－ＨＡ－３Ｃ转染ＨＥ２９３?Ｔ细胞和接毒的ＢＨＫ－２１细胞中都能观察到特异性的??巧光
【参考文献】：
期刊论文
[1]TLRs与RLRs介导的细胞抗病毒反应信号转导及其调节机制[J]. 张煜,钟波,杨艳,舒红兵. 细胞生物学杂志. 2009(04)
[2]猪脑心肌炎病毒抗体间接ELISA方法的建立及应用[J]. 董艳娇,黄金海,王晶钰,赵勇,李琳. 中国动物检疫. 2008(07)
[3]猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定[J]. 盖新娜,杨汉春,郭鑫,吕艳丽,王芳,陈艳红,查振林. 畜牧兽医学报. 2007(01)
[4]规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查[J]. 张家龙,盖新娜,马良,陈艳红,查振林,郭鑫,杨汉春. 中国兽医杂志. 2007(01)
博士论文
[1]TRIM32调控病毒诱导的Ⅰ型干扰素表达的分子机制[D]. 张静.武汉大学 2013
[2]乙型肝炎病毒多聚酶蛋白拮抗Ⅰ型干扰素通路的机制研究[D]. 陈捷亮.复旦大学 2013
[3]猪脑心肌炎病毒病原学及诊断方法的研究[D]. 施开创.中国农业科学院 2012
硕士论文
[1]miRNA-93调控I型干扰素通路的作用机制及其体内效应的研究[D]. 郭猛.第二军医大学 2013
[2]猪脑心肌炎病毒的分离鉴定及RT-LAMP快速检测方法的建立[D]. 张岭岭.河北农业大学 2011
[3]猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB和3ABC基因的表达与3AB单克隆抗体的制备[D]. 沈芳.南京农业大学 2008
[4]乙型肝炎病毒对Ⅰ型干扰素受体表达的影响[D]. 任苏平.浙江大学 2003
本文编号：3094324
【文章来源】：长江大学湖北省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
I型干扰素介导的通路模式图
?第２窜猜脑心肌炎服］０?：化’蛋ｎ的单妃隆抗体的制备???Ｌａｎｅ?Ｍ：?Ｐｒｅ－ｓｔｒａｉｎｅｄ?Ｐｒｏｋｉｎ?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｌａ打ｅ?Ｉ；?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐＥＴ－２８ａ－３Ｃ?ｓｔｒａｉｎ?ｎｏｎｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＩＰＴＧ；??Ｌａｎｅ?２：?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐＥＴ－２８ａ－３Ｃ?ｓｔｒａｉｎ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＩＰＴＧ；??
２．?３．?３．１?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析３Ｃ单克隆抗体的特异性??用Ｍ饼为０．１的ＥＭＣＶ感染ＢＨＫ－２１细胞，感染１２?ｈ后用时ｚｏｌ对细胞进行??裂解，通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析，检测ＥＭＣＶ３Ｃ的表达情况，结果如图２－６所示，??使用２Ａ单克隆抗体能特异性的检测到２Ａ蛋白。??ＥＭＣＶ?■?＋??扣邸－補＞仁３Ｃ??１０邸’：??图２－６?ＥＭＣＶ?３Ｃ单克隆抗体的特昇性的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ鉴定??Ｆｉｇ．２－６?Ｗｅｓｌ：ｅｍ?ｂｌｏｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＥＭＣＶ?３Ｃ?ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ?ａｎｔ化ｏｄｙ?ｓｐｅｄｆｉｃｉｔｙ??２．?３．?３．?２间接免疫黄光分析％单克隆抗体特异性??ＢＨＫ－２１细胞被ＭＯＩ为０．１的ＥＭＣＶ感染，并且用ＰＣＡＧＧＳ－ＨＡ－３Ｃ转染ＨＥＫ??２９３?Ｉ细胞，２４?ｈ后对细胞进行处理，通过间接免疫羡光（ＩＦＡ）观察显示，在??ＰＣＡＧＧＳ－ＨＡ－３Ｃ转染ＨＥ２９３?Ｔ细胞和接毒的ＢＨＫ－２１细胞中都能观察到特异性的??巧光
【参考文献】：
期刊论文
[1]TLRs与RLRs介导的细胞抗病毒反应信号转导及其调节机制[J]. 张煜,钟波,杨艳,舒红兵. 细胞生物学杂志. 2009(04)
[2]猪脑心肌炎病毒抗体间接ELISA方法的建立及应用[J]. 董艳娇,黄金海,王晶钰,赵勇,李琳. 中国动物检疫. 2008(07)
[3]猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定[J]. 盖新娜,杨汉春,郭鑫,吕艳丽,王芳,陈艳红,查振林. 畜牧兽医学报. 2007(01)
[4]规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查[J]. 张家龙,盖新娜,马良,陈艳红,查振林,郭鑫,杨汉春. 中国兽医杂志. 2007(01)
博士论文
[1]TRIM32调控病毒诱导的Ⅰ型干扰素表达的分子机制[D]. 张静.武汉大学 2013
[2]乙型肝炎病毒多聚酶蛋白拮抗Ⅰ型干扰素通路的机制研究[D]. 陈捷亮.复旦大学 2013
[3]猪脑心肌炎病毒病原学及诊断方法的研究[D]. 施开创.中国农业科学院 2012
硕士论文
[1]miRNA-93调控I型干扰素通路的作用机制及其体内效应的研究[D]. 郭猛.第二军医大学 2013
[2]猪脑心肌炎病毒的分离鉴定及RT-LAMP快速检测方法的建立[D]. 张岭岭.河北农业大学 2011
[3]猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB和3ABC基因的表达与3AB单克隆抗体的制备[D]. 沈芳.南京农业大学 2008
[4]乙型肝炎病毒对Ⅰ型干扰素受体表达的影响[D]. 任苏平.浙江大学 2003
本文编号：3094324
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3094324.html
