鸡Toll样受体4参与APS调节雏鸡肠道免疫功能的研究
发布时间：2021-04-01 09:15
本试验从黄芪多糖（APS）调节雏鸡肠道免疫功能入手,研究chTLR4及其信号转导通路在此过程中的作用。首先,用Trizol法提取雏鸡胸腺中总RNA,反转录成cDNA,根据GenBank上已公开发表的chTLR4基因序列,选择含有抗原位点较多的区域设计特异性引物,克隆出chTLR4包括胞内区、胞外区、跨膜区的部分片段,大小为1332bp,并构建重组原核质粒pET30a-chTLR4,经过诱导,表达出约为58.5KD大小的重组蛋白,利用纯化后的重组蛋白成功制备出了兔抗chTLR4多克隆抗体,经过间接ELISA、Western-blot和间接免疫荧光方法鉴定所制备的兔抗chTLR4多克隆抗体,其具有良好的反应性及特异性。之后,将7日龄雏鸡随机分为4组,即APS高剂量组（A组）、APS中剂量组（B组）、APS低剂量组（C组）和空白对照组（D组）。其中,A、B、C组雏鸡于7日龄以灌服方式分别给予高、中、低剂量APS,1次/d,连续5d,在首次给药后1、3、5、7d,取雏鸡十二指肠肠液以及十二指肠、空肠、回肠、法氏囊,采用实时荧光定量PCR、免疫酶组织化学法及间接ELISA技术对雏鸡肠道chTLR...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
1.1 黄芪多糖研究进展
1.2 雏鸡肠道黏膜免疫研究进展
1.3 TLR4研究进展
1.4 研究目的和意义
2 材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 黄芪多糖
2.1.2 实验动物
2.1.3 工程菌及质粒
2.1.4 主要生物学试剂、化学试剂
2.1.5 主要仪器与设备
2.1.6 主要试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 chTLR4多克隆抗体的制备
2.2.2 chTLR4参与APS调节雏鸡肠道免疫功能
2.3 数据统计与分析
3 结果
3.1 chTLR4基因的克隆、鉴定及体外诱导表达
3.1.1 雏鸡胸腺总RNA的提取
3.1.2 chTLR4抗原位点预测及跨膜区分析
3.1.3 chTLR4基因的扩增
3.1.4 重组菌PCR鉴定
3.1.5 重组原核质粒双酶切鉴定
3.1.6 重组原核质粒测序
3.1.7 重组原核质粒体外诱导表达
3.2 兔抗chTLR4多克隆抗体的制备及检测
3.2.1 重组蛋白的纯化
3.2.2 间接ELISA方法检测兔抗chTLR4多克隆抗体效价
3.2.3 Western-blot检测多克隆抗体特异性
3.2.4 重组真核质粒的构建
3.3 雏鸡肠道chTLR4表达的动态变化检测
3.3.1 雏鸡十二指肠及法氏囊中chTLR4 mRNA表达动态变化
3.3.2 雏鸡十二指肠、空肠、回肠、法氏囊中chTLR4蛋白表达动态变化
3.4 雏鸡肠道chTLR4信号转导通路相关信号分子mRNA表达动态变化
3.5 雏鸡肠道细胞因子chTNF-α、chIFN-β mRNA表达变化
3.6 雏鸡肠道sIgA含量动态变化
3.7 雏鸡肠道sIgA表达的动态变化
4 讨论
4.1 兔抗chTLR4多抗的制备
4.2 黄芪多糖与雏鸡肠道免疫
4.3 chTLR4信号转导通路参与黄芪多糖调节雏鸡肠道免疫
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪多糖调节免疫应激雏鸡免疫功能研究[J]. 贾震虎. 陕西农业科学. 2011(06)
[2]chTLR4及其信号通路在脂多糖致鸡淋巴细胞中的作用[J]. 张维平,郭维宵,刘海云,张学慧,杨振国. 中国畜牧兽医. 2011(03)
[3]黄芪多糖对脂多糖刺激仔猪小肠组胺的影响[J]. 欧德渊,姚红艳,刘世会,李秀富,李静. 动物医学进展. 2009(11)
[4]黄芪多糖对脾虚小鼠消化吸收功能的影响[J]. 罗燕,谷新利,惠文巧,邵永斌. 黑龙江畜牧兽医. 2009(17)
[5]黄芪多糖对肠道免疫功能影响的研究进展[J]. 韩立丽,王建发,王凤龙,韦旭斌. 中国畜牧兽医. 2009(08)
[6]黄芪多糖对鸡体液免疫增强作用[J]. 张训海,王德云,胡元亮,孙峻岭. 中国兽医学报. 2009(03)
[7]硫酸化黄芪多糖对IBD疫苗接种雏鸡免疫水平的影响[J]. 施志玉,黄小燕,李大鹏,孙瑾,鞠演,胡元亮. 畜牧与兽医. 2009(02)
[8]黄芪多糖对肉仔鸡免疫功能的影响[J]. 司昌德,闵亚宏. 中国预防兽医学报. 2008(12)
[9]黄芪多糖佐剂对鸡禽流感-新城疫重组二联苗免疫效果的影响[J]. 罗燕,邵永斌,谷新利,李星艳. 中兽医医药杂志. 2008(05)
[10]自制黄芪多糖对鸡免疫功能的影响[J]. 吕信,林春驿,朱冬花,兰富豪. 中国免疫学杂志. 2008(05)
博士论文
[1]金欣口服液及白藜芦醇对RSV活化诱导的TLR3及其信号通路的调控作用[D]. 李佳曦.南京中医药大学 2012
[2]黄芪多糖的制备及其对巨噬细胞和树突状细胞免疫功能的影响[D]. 赵鲁杭.浙江大学 2011
[3]植物多糖的制备及对肉仔鸡免疫功能影响的研究[D]. 陈洪亮.中国农业科学院 2002
硕士论文
[1]TLR4在鸡小肠内的分布规律研究[D]. 刘银雪.华中农业大学 2012
[2]鸡TLR4信号通路与肠炎沙门氏菌感染关系的研究[D]. 宋咏梅.中国农业科学院 2010
[3]黄芪多糖对肉仔鸡免疫性能和生产性能影响的研究[D]. 王俊丽.扬州大学 2010
[4]chTLR4及其信号通路在LPS致鸡急性呼吸道损伤中的作用[D]. 刘海云.吉林大学 2009
[5]鸡白痢沙门氏菌致病性及MyD88-依赖途径信号分子表达的研究[D]. 李鹏.河南农业大学 2009
[6]鸡传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白的克隆与表达[D]. 朱彩霞.山东农业大学 2009
[7]黄芪多糖增强疫苗免疫效力及机理研究[D]. 高艳艳.中国农业科学院 2006
[8]黄芪多糖粗提物对肉仔鸡生长及代谢调控的研究[D]. 吕美.河南农业大学 2005
[9]黄芪提取物对鸡生长发育及免疫功能的影响[D]. 李诺.中国农业大学 2004
本文编号：3113083
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
1.1 黄芪多糖研究进展
1.2 雏鸡肠道黏膜免疫研究进展
1.3 TLR4研究进展
1.4 研究目的和意义
2 材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 黄芪多糖
2.1.2 实验动物
2.1.3 工程菌及质粒
2.1.4 主要生物学试剂、化学试剂
2.1.5 主要仪器与设备
2.1.6 主要试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 chTLR4多克隆抗体的制备
2.2.2 chTLR4参与APS调节雏鸡肠道免疫功能
2.3 数据统计与分析
3 结果
3.1 chTLR4基因的克隆、鉴定及体外诱导表达
3.1.1 雏鸡胸腺总RNA的提取
3.1.2 chTLR4抗原位点预测及跨膜区分析
3.1.3 chTLR4基因的扩增
3.1.4 重组菌PCR鉴定
3.1.5 重组原核质粒双酶切鉴定
3.1.6 重组原核质粒测序
3.1.7 重组原核质粒体外诱导表达
3.2 兔抗chTLR4多克隆抗体的制备及检测
3.2.1 重组蛋白的纯化
3.2.2 间接ELISA方法检测兔抗chTLR4多克隆抗体效价
3.2.3 Western-blot检测多克隆抗体特异性
3.2.4 重组真核质粒的构建
3.3 雏鸡肠道chTLR4表达的动态变化检测
3.3.1 雏鸡十二指肠及法氏囊中chTLR4 mRNA表达动态变化
3.3.2 雏鸡十二指肠、空肠、回肠、法氏囊中chTLR4蛋白表达动态变化
3.4 雏鸡肠道chTLR4信号转导通路相关信号分子mRNA表达动态变化
3.5 雏鸡肠道细胞因子chTNF-α、chIFN-β mRNA表达变化
3.6 雏鸡肠道sIgA含量动态变化
3.7 雏鸡肠道sIgA表达的动态变化
4 讨论
4.1 兔抗chTLR4多抗的制备
4.2 黄芪多糖与雏鸡肠道免疫
4.3 chTLR4信号转导通路参与黄芪多糖调节雏鸡肠道免疫
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪多糖调节免疫应激雏鸡免疫功能研究[J]. 贾震虎. 陕西农业科学. 2011(06)
[2]chTLR4及其信号通路在脂多糖致鸡淋巴细胞中的作用[J]. 张维平,郭维宵,刘海云,张学慧,杨振国. 中国畜牧兽医. 2011(03)
[3]黄芪多糖对脂多糖刺激仔猪小肠组胺的影响[J]. 欧德渊,姚红艳,刘世会,李秀富,李静. 动物医学进展. 2009(11)
[4]黄芪多糖对脾虚小鼠消化吸收功能的影响[J]. 罗燕,谷新利,惠文巧,邵永斌. 黑龙江畜牧兽医. 2009(17)
[5]黄芪多糖对肠道免疫功能影响的研究进展[J]. 韩立丽,王建发,王凤龙,韦旭斌. 中国畜牧兽医. 2009(08)
[6]黄芪多糖对鸡体液免疫增强作用[J]. 张训海,王德云,胡元亮,孙峻岭. 中国兽医学报. 2009(03)
[7]硫酸化黄芪多糖对IBD疫苗接种雏鸡免疫水平的影响[J]. 施志玉,黄小燕,李大鹏,孙瑾,鞠演,胡元亮. 畜牧与兽医. 2009(02)
[8]黄芪多糖对肉仔鸡免疫功能的影响[J]. 司昌德,闵亚宏. 中国预防兽医学报. 2008(12)
[9]黄芪多糖佐剂对鸡禽流感-新城疫重组二联苗免疫效果的影响[J]. 罗燕,邵永斌,谷新利,李星艳. 中兽医医药杂志. 2008(05)
[10]自制黄芪多糖对鸡免疫功能的影响[J]. 吕信,林春驿,朱冬花,兰富豪. 中国免疫学杂志. 2008(05)
博士论文
[1]金欣口服液及白藜芦醇对RSV活化诱导的TLR3及其信号通路的调控作用[D]. 李佳曦.南京中医药大学 2012
[2]黄芪多糖的制备及其对巨噬细胞和树突状细胞免疫功能的影响[D]. 赵鲁杭.浙江大学 2011
[3]植物多糖的制备及对肉仔鸡免疫功能影响的研究[D]. 陈洪亮.中国农业科学院 2002
硕士论文
[1]TLR4在鸡小肠内的分布规律研究[D]. 刘银雪.华中农业大学 2012
[2]鸡TLR4信号通路与肠炎沙门氏菌感染关系的研究[D]. 宋咏梅.中国农业科学院 2010
[3]黄芪多糖对肉仔鸡免疫性能和生产性能影响的研究[D]. 王俊丽.扬州大学 2010
[4]chTLR4及其信号通路在LPS致鸡急性呼吸道损伤中的作用[D]. 刘海云.吉林大学 2009
[5]鸡白痢沙门氏菌致病性及MyD88-依赖途径信号分子表达的研究[D]. 李鹏.河南农业大学 2009
[6]鸡传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白的克隆与表达[D]. 朱彩霞.山东农业大学 2009
[7]黄芪多糖增强疫苗免疫效力及机理研究[D]. 高艳艳.中国农业科学院 2006
[8]黄芪多糖粗提物对肉仔鸡生长及代谢调控的研究[D]. 吕美.河南农业大学 2005
[9]黄芪提取物对鸡生长发育及免疫功能的影响[D]. 李诺.中国农业大学 2004
本文编号：3113083
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