Ⅰ.两种伪狂犬病病毒诊断检测方法的建立 Ⅱ.影响猪瘟病毒复制的lncRNAs的筛选

发布时间：2021-04-05 04:01

　　伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染引起的家畜和野生动物的烈性传染病。从2011年底开始,我国多个省份免疫过Bartha-K61弱毒疫苗的猪场相继爆发伪狂犬病,研究表明,此次疫情由PRV变异株引起。本研究建立了一种三重荧光定量PCR检测方法,基于三种标记不同荧光信号的TaqMan探针,该方法可以鉴别检测PRV经典株、变异株和Bartha-K61疫苗株。该方法对TJ株、SC株和Bartha-K61的检测限分别为50、50和5拷贝。应用三重荧光定量PCR方法和病毒分离方法对234个样品进行检测,结果显示,两种方法的符合率分别为100%（经典株）、99.2%（变异株）和100%（Bartha-K61疫苗株）。以上结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性,可以应用于PRV毒株的区别检测。本研究还建立了一种交叉引物扩增—试纸条联用法（CPA-strip）用于检测PRV野毒。应用建立的检测方法对PRV变异株进行检测,最低检测限为200个拷贝。特异性检测结果显示,该方法与一些常见的猪病病毒无交叉反应性。对293个临床样品进行检... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：79 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．３功能性ＩｎｃＲＮＡｓ与靶ｍＲＮＡ的位置关系??Ｆｉｇ．?１．３?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ?ｌｏｎｇ?ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ?ＲＮＡ?（ＩｎｃＲＮＡｓ）?ａｎｄ?ｔａｒｇｅｔ??ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｄｉｎｇ?ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ?ＲＮＡ?（ｍＲＮＡ）．??

ｆａｃｔｏｒ?２）相互作用后，形成转录复合体，诱导ＩＳＧｓ的表达。研宄同样??发现，ｈｎＲＮＰＵ?（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎＵ）能够结合并??稳定ｌｎｃＲＮＡ＃３２，并帮助ｌｎｃＲＮＡ＃３２行使其功能（图１．４）。??ＩＳＧｓ是宿主抵抗病毒的重要防线，但是其表达调控机制尚不完全清??楚。通过归纳和总结目前己知的研宄成果，我们确信ＩｎｃＲＮＡｓ是调控??ＩＳＧｓ表达的重要一环。ＩｎｃＲＮＡｓ调控ＩＳＧｓ作用机制的解析，同样为揭??示病毒和宿主之间的相互作用提供基础。??１２??

时区分检测ＰＲＶ变异株和经典株，方案５可同时鉴别检测三种ＰＲＶ毒??株，同时ＣＴ值最低，敏感性最高（表２．４）。因此，将方案５种的引??物和探针应用于后续试验中（图２．１和图２．２）。??表２．４引物和探针的选择。??Ｔａｂｌｅ?２．４?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｉｍｅｒｓ?ａｎｄ?ｐｒｏｂｅｓ．??Ｇｒｏｕｐ?１?Ｇｒｏｕｐ?２?Ｇｒｏｕｐ?３?Ｇｒｏｕｐ?４?Ｇｒｏｕｐ?５?Ｇｒｏｕｐ?６??ＦＡＭ?（ＣＴ?ｖａｌｕｅ）?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?３３．８?３５．２??ＨＥＸ?（ＣＴ?ｖａｌｕｅ）?３２．４?３３．５?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?３２．０?３５．３??Ｃｙ５?（ＣＴ?ｖａｌｕｅ）?２２．１?２１．５?２１．３?２２．２?２２．８?２８．９??ＰＲＶ－Ｆ２?Ｃｙ５－ＰＲＶ－Ｂａｒ??Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１?，?＞?＜?■?■??／?，?、、＇、?ＰＲＶ－Ｒ２、、、、、??／?、、＇、、?＇＇??ＰＲＶ?ｃｌａｓｓｉｃａｌ?ｏｒ?／

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3119097