猪星状病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用

发布时间：2021-04-17 03:03

　　为了建立特异、灵敏及快速的猪星状病毒3型（PAstV3）检测方法并应用于临床检测,根据GenBank登录的PAstV 3序列,在ORF1b保守区设计特异性引物和TaqMan探针;经过反应体系和反应条件优化,对建立的实时荧光定量RT-PCR方法进行敏感性、特异性测定,并初步应用于临床粪便样品的检测。结果显示,该方法标准曲线线性关系良好,R2值达到0.997 1;与多种常见的猪病病毒均无交叉反应,特异性良好。与常规PCR相比,该检测方法敏感性是常规PCR方法的100倍,敏感性较高,批内、批间重复性试验的变异系数均小于2.0%,重复性良好。使用该方法对临床收集的30份疑似PAstV3粪便样本进行检测,阳性率为40%,检出率高于常规PCR方法。上述结果表明,该方法的建立为PAstV3的诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。 

【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(11)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

PAst V3 Taq Man PCR扩增曲线（A）和标准曲线（B)

利用常规PCR方法和荧光定量PCR方法对10倍稀释的标准质粒进行检测，结果显示，两种方法检测最低拷贝数分别为1.4×103copies/L（图4A）和1.4×101copies/L（图4B）。结果表明，本研究建立的q PCR方法比常规PCR方法的灵敏度高100倍。图3 特异性试验

用5种浓度的质粒标准品（1.4×103～1.4×107copies/L）分别进行批内和批间的重复性试验。结果显示，批内和批间重复性试验的变异系数均小于2.0%（表2），表明该方法具有良好的重复性与稳定性。2.7 临床样品的检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]广西猪星状病毒分子流行病学调查[J]. 兰家暖,刘磊,郭旋,张民秀,卢冰霞,黄福标,覃熊慧,张宁,黄伟坚.  中国预防兽医学报. 2012(08)



本文编号：3142684