Notch信号通路调控HP-PRRSV感染诱导的炎性反应机制

发布时间：2021-04-22 07:38

　　高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV）是一种重要的病原,在临床上引起猪的繁殖障碍以及呼吸道疾病,给我国的养猪业带来了巨大的损失。在肺部,HP-PRRSV通过感染猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophages,PAMs）导致肺部疾病,主要表现为间质性肺炎。需要指出的是,HP-PRRSV感染诱导的炎性反应是导致间质性肺炎的根本原因。尽管现如今,已有的研究在揭示HP-PRRSV诱导炎性反应方面取得了一些进展,但是,具体的机制仍需要进一步研究。Notch信号通路作为一种进化过程中保守的信号通路,通过影响细胞的分化、增生、存活等在宿主发育中起着必要的作用。除了在调控细胞命运中起着关键的作用,Notch信号通路在免疫系统中也发挥着重要的作用。其中,在巨噬细胞细胞激活方面,已有的研究显示TLR信号通路影响Notch信号通路中受体和配体的表达,继而通过Notch信号通路调控炎性因子的分泌以及巨噬细胞的激活。另外,NF-κB信号... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 猪繁殖与呼吸综合征
        1.1.1 概述
        1.1.2 临床症状
        1.1.3 病理变化
        1.1.4 流行病学
        1.1.5 疾病防控
    1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒
        1.2.1 概述
        1.2.2 病毒基因组
        1.2.3 致病机制
    1.3 Notch信号通路
        1.3.1 概述
        1.3.2 经典Notch信号通路的活化
        1.3.3 非经典Notch信号通路
        1.3.4 Notch信号激活的下游基因
        1.3.5 Notch信号通路功能
        1.3.6 Notch信号通路在病毒感染中的作用
    1.4 研究目的及意义
第二章 HP-PRRSV感染通过激活Notch信号通路调控炎性因子的产生
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物，细胞和病毒
        2.1.2 主要仪器与试剂
    2.2 方法
        2.2.1 PAMs细胞的分离
        2.2.2 PAMs细胞的冻存
        2.2.3 HP-PRRSV的增殖
        2.2.4 病毒含量测定
        2.2.5 PAMs细胞铺板及HP-PRRSV接种
        2.2.6 γ-分泌酶抑制剂DAPT的使用
        2.2.7 si RNA基因沉默
        2.2.8 PAMs细胞总RNA提取
        2.2.9 PAMs细胞RNA反转录
        2.2.10 荧光定量PCR
        2.2.11 酶联免疫吸附实验
    2.3 结果
        2.3.1 HP-PRRSV感染激活Notch信号通路
        2.3.2 Notch信号通路抑制剂减弱HP-PRRSV感染引起的炎性反应
        2.3.3 沉默RBP-J可减弱HP-PRRSV感染引起的炎性反应
    2.4 讨论
第三章 Jagged1-Notch信号通路调控HP-PRRSV感染诱导的炎性反应
    3.1 材料
        3.1.1 细胞，病毒
        3.1.2 主要仪器与试剂
    3.2 方法
        3.2.1 猪Jagged1基因克隆
        3.2.2 猪Flag14-Jagged1真核表达载体构建
        3.2.3 猪Flag14-Jagged1质粒提取
        3.2.4 质粒转染 293T细胞
        3.2.5 蛋白提取
        3.2.6 BCA法测定蛋白浓度
        3.2.7 Western blot
        3.2.8 si RNA基因沉默
        3.2.9 PAMs细胞总RNA提取
        3.2.10 PAMs细胞RNA反转录
        3.2.11 荧光定量PCR
        3.2.12 酶联免疫吸附实验
    3.3 结果
        3.3.1 猪Jagged1基因克隆
        3.3.2 猪Flag14-Jagged1载体构建
        3.3.3 Flag14-Jagged1转染后的表达情况
        3.3.4 HP-PRRSV感染上调猪Jagged1蛋白表达
        3.3.5 沉默Jagged1可抑制HP-PRRSV感染诱导的炎性反应
        3.3.6 沉默Jagged1表达对Notch靶基因的影响
    3.4 讨论
第四章 HP-PRRSV感染上调Jagged1表达的机制研究
    4.1 材料
        4.1.1 细胞，病毒
        4.1.2 主要仪器与试剂
    4.2 方法
        4.2.1 各类抑制剂使用方法
        4.2.2 PAMs细胞总RNA提取
        4.2.3 PAMs细胞RNA反转录
        4.2.4 荧光定量PCR
    4.3 结果
        4.3.1 HP-PRRSV通过NF-κB信号通路诱导Jagged1表达
        4.3.2 HP-PRRSV通过MAPK信号通路诱导Jagged1表达
        4.3.3 HP-PRRSV通过Notch信号通路诱导Jagged1表达
    4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3153402