多种猪源性外来病液相芯片检测方法的建立

发布时间：2021-04-24 09:47

　　猪源性外来病能够通过国际间贸易交流、野生动物携带及昆虫媒介传入我国,一旦传入将会给我国养猪业带来严重的损失,甚至是公共卫生问题。本研究以非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）、尼帕病毒（Nipahvirus,NiV）、水疱性口 炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）、塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus,SW）以及口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）5 种猪源性病毒为研究对象,设计特异性扩增引物,利用多重PCR扩增得到带有修饰的扩增产物,然后与微球杂交、孵育,并验证方法的敏感性和特异性,以期构建多种猪源性外来病的液相芯片检测体系。主要研究结果如下:1.多种猪源性外来病单重PCR体系的建立建立的ASFV、NiV、VSV、SW和FMDV的单重PCR检测方法,敏感性结果最低检测量分别为 39.0copies/μ L、4.6copies/μ L、29.9copies/μ L、36.8copies/μ L和20.9copies/μ L;特异性结果为每种病毒的单重PCR... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 五种猪病及病毒概况
        1.1.1 非洲猪瘟
        1.1.2 尼帕病毒病
        1.1.3 水疱性口炎
        1.1.4 塞尼卡谷病毒病
        1.1.5 口蹄疫
    1.2 液相芯片
        1.2.1 液相芯片原理
        1.2.2 液相芯片技术的特点
    1.3 液相芯片技术的应用
        1.3.1 猪病方面应用
        1.3.2 禽病方面应用
        1.3.3 反刍动物疫病方面
        1.3.4 实验动物疫病方面
        1.3.5 人兽共患病方面
    1.4 研究目的与意义
2 多种猪源性外来病病毒单一PCR检测方法的初步建立
    2.1 实验材料及设备
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器设备
        2.1.3 病毒和毒株
        2.1.4 培养基及相关的制备
        2.1.5 引物的设计、合成与筛选
        2.1.6 疫苗核酸的提取及反转录
    2.2 方法
        2.2.1 构建质粒
            2.2.1.1 重组质粒的转化
            2.2.1.2 重组质粒的提取
            2.2.1.3 重组质粒浓度的测定及拷贝数换算
        2.2.2 引物的筛选及单重PCR体系的建立
        2.2.3 单重PCR反应敏感性实验
        2.2.4 单重PCR反应特异性实验
    2.3 结果
        2.3.1 拷贝数计算
        2.3.2 引物的初步筛选
        2.3.3 单重PCR反应灵敏性结果
        2.3.4 单重PCR反应特异性结果
    2.4 小结与讨论
3 多种猪源性外来病病毒多重PCR检测方法的建立
    3.1 多重PCR检测体系的建立
        3.1.1 多重PCR退火温度的优化
        3.1.2 多重PCR方法敏感性实验
        3.1.3 多重PCR方法特异性实验
        3.1.4 多重PCR方法重复性实验
    3.2 结果
        3.2.1 多重PCR退火温度的优化
        3.2.2 多重PCR方法的灵敏性实验结果
        3.2.3 多重PCR方法的特异性实验结果
        3.2.4 多重PCR方法的稳定性实验结果
    3.3 小结与讨论
4 多种猪源性外来病液相芯片检测方法的建立
    4.1 实验材料及设备
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验仪器及设备
        4.1.3 病毒与毒株
        4.1.4 TAG的选择与修饰引物合成
    4.2 方法
        4.2.1 微球杂交缓冲液的制备及体系建立
            4.2.1.1 微球工作液的制备
            4.2.1.2 SAPE报告液的制备
            4.2.1.3 微球杂交体系的建立
TM液相芯片检测平台初始化">        4.2.2 Luminex 200^TM液相芯片检测平台初始化
        4.2.3 PCR产物与微球杂交
        4.2.4 液相芯片杂交结果的判定
        4.2.5 液相芯片杂交条件的优化
            4.2.5.1 液相芯片杂交时间的优化
            4.2.5.2 液相芯片杂交温度的优化
        4.2.6 液相芯片检测方法敏感性实验
        4.2.7 液相芯片检测方法特异性实验
        4.2.8 液相芯片检测方法稳定性实验
        4.2.9 临床样品检测
    4.3 结果
        4.3.1 液相芯片杂交时间优化实验结果
        4.3.2 液相芯片杂交温度优化实验结果
        4.3.3 液相芯片敏感性实验结果
        4.3.4 液相芯片特异性实验结果
        4.3.5 液相芯片稳定性实验结果
        4.3.6 临床样品检测
    4.4 小结与讨论
5 结论
致谢
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3157145