猪白介素-21的表达、功能研究及其单克隆抗体的制备

发布时间：2021-04-28 04:07

　　白细胞介素21（Interleukin-21,IL-21）是1种具有广泛免疫调节作用的新型细胞因子,在固有免疫和适应性免疫应答中都发挥着重要的作用。目前,对人IL-21和鼠IL-21的研究已相当多,而对于猪IL-21的研究却鲜有报道。为了进行猪IL-21相关功能机制研究,本研究构建了真核表达载体pcDNA3.1/IL-21-Fc,将该重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,利用protein A亲和层析法纯化转染上清中的目的蛋白,通过Western blot、ELISA鉴定纯化的目的蛋白的纯度和活性,并对猪IL-21的生物学功能进行了一定的探索。结果显示,猪IL-21-Fc融合蛋白成功在培养上清中分泌表达;通过纯化获得了分子量约为44 kDa的猪IL-21-Fc融合蛋白;功能研究表明,猪IL-21能够与CD40L协同呈剂量依懒性地刺激猪外周血淋巴细胞（peripheral blood lymphocytes,PBMC）分泌IgG,并能诱导猪PBMC表达IL-22。单克隆抗体作为蛋白功能研究中蛋白检测的重要工具,当前市场上尚未有抗猪IL-21单克隆抗体,从而阻碍了猪IL-21的研究进展。本... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 白介素21(IL-21)
        1.1.1 IL-21基因
        1.1.2 IL-21受体(IL-21R)及IL-21/IL-21R信号
        1.1.3 IL-21的生物学作用
        1.1.4 IL-21与疾病
    1.2 猪IL-21研究进展
    1.3 单克隆抗体技术
    1.4 研究目的和意义
第二章 猪IL-21的真核表达与功能研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞,载体
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 真核表达质粒pcDNA3.1/IL-21-Fc的构建
        2.2.2 重组猪IL-21蛋白的表达与纯化
        2.2.3 猪IL-21融合蛋白的生物学活性研究
    2.3 实验结果
        2.3.1 重组质粒pcDNA3.1(-)/IL-21-Fc的构建
        2.3.2 猪IL-21-Fc融合蛋白的表达
        2.3.3 重组IL-21的纯化与鉴定
        2.3.4 猪IL-21的功能研究
    2.4 讨论
第三章 猪IL-21单克隆抗体的制备与鉴定
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞,载体,实验动物
        3.1.2 主要试剂及培养基
        3.1.3 主要仪器及耗材
    3.2 实验方法
        3.2.1 猪IL-21抗原的制备
        3.2.2 鼠抗猪IL-21单克隆抗体的制备
        3.2.3 单克隆抗体腹水的制备、纯化与效价测定
        3.2.4 鼠抗猪IL-21单克隆抗体的鉴定
        3.2.5 数据分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 重组猪IL-21蛋白的原核表达、纯化
        3.3.2 抗猪IL-21单克隆抗体的筛选和亚类鉴定
        3.3.3 单克隆抗体腹水的效价测定及纯化
        3.3.4 单克隆抗体可变区的扩增与进化树分析
        3.3.5 Western blot鉴定
        3.3.6 IFA鉴定
        3.3.7 单克隆抗体的流式分析
        3.3.8 单克隆抗体的相对亲合常数测定
    3.4 讨论
第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3164768