LKB1/AMPK信号通路相关基因在家兔肠炎模型中的表达差异研究
发布时间：2021-04-28 04:09
LKB1/AMPK信号通路广泛参与机体细胞的增殖、分化和凋亡等生理活动,调控能量代谢等生命活动。而LKB1基因作为AMPK上游关键基因之一,其突变或者失活会引起AMPK信号通路变化,由此导致人类胃肠道疾病发生。因此，本试验旨在研究LKB1/AMPK信号通路内信号因子在家兔非特异性肠炎中的表达差异和作用机制,从而为家兔非特异性肠炎治疗和预防提供理论依据。试验前期克隆LKB1基因并通过构建低纤维日粮诱导家免非特异性肠炎模型,采用RT-qPCR法检测LKB1、AMPK （PRKAA2）、mTOR和NF-κβ基因在健康正常组（30只）和低纤维诱导肠炎组（60只）中7个组织（十二指肠、圆小囊、空肠、回肠、结肠、肝脏和脾脏）的mRNA表达量。试验后期通过培养家兔结肠上皮细胞（CEC）以及利用LPS构建家兔CEC炎症模型，采用RNAi技术干扰炎症细胞中LKB1基因的表达,然后通过RT-qPCR法检测LKB1、PRKAA2、NUAK1、mTOR、NF-κβ、IL-1A、TNF-α、PGC-1α和ATG13基因在不同炎症细胞组中mRNA表达量,由此分析LKB1/AMPK信号通路在家兔非特异性肠炎中的作用...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
学术名词简表
1 文献综述
1.1 肠炎发生分子机制研究
1.2 LKB1基因的发现及其分子结构
1.3 LKB1基因的调节方式
1.4 LKB1基因功能
1.4.1 对T细胞发育影响
1.4.2 促进成肌细胞分化
1.4.3 可变剪切体LKB1s与精细胞形成
1.4.4 LKB1对细胞极性调节
1.4.5 LKB1与癌症发生关系
1.5 LKB1基因相关信号通路
1.5.1 LKB1/AMPK信号通路与能量代谢
1.5.2 AMPK/SIRT1/NF-κβ信号通路介导炎症反应
1.5.3 LKB1/AMPK/mTOR信号通路与癌症发生
1.6 本研究的目的和意义
1.6.1 试验目的
1.6.2 试验研究的主要内容
1.7 本研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 仪器与试剂
2.3 试验方法
2.3.1 各组织总RNA的提取
2.3.2 总RNA质量检测
2.3.3 反转录合成cDNA
2.3.4 克隆LKB1基因
2.3.5 组织定量表达分析
2.4 细胞试验
2.4.1 细胞传代
2.4.2 冷冻和复苏细胞
2.4.3 细胞计数
2.4.4 siRNA序列及相关基因引物信息
2.4.5 筛选siRNA分子及检测炎症细胞中各基因表达水平
3 试验结果
3.1 LKB1基因克隆及序列分析
3.1.1 RNA质量的检测
3.1.2 LKB1基因克隆结果
3.1.3 测序及生物信息学分析结果
3.2 检测肠炎模型组各组织基因表达
3.3 细胞试验结果
3.3.1 CEC细胞培养及观察
3.3.2 细胞生长曲线
3.3.3 构建细胞炎症模型
3.4 筛选干扰siRNA序列
3.4.1 细胞总RNA提取及反转录
3.4.2 转染及筛选siRNA
3.5 干扰LKB1基因对AMPK信号通路相关基因表达结果
3.5.1 LKB1/AMPK信号通路下游相关基因表达
3.5.2 PGC-1α和ATG13表达
3.6 炎症细胞中促炎因子IL-lA和TNF-a表达结果
4 讨论
4.1 克隆及生物信息学分析
4.2 肠炎模型组各组织表达分析
4.2.1 LKB1组织表达分析
4.2.2 与LKB1相关基因的组织表达分析
4.3 转染si-02-LKB1对炎症细胞模型中信号因子表达影响
4.3.1 PGC-1α和ATG13表达差异分析
4.3.2 AMPK激酶及其相关信号因子表达差异分析
4.3.3 促炎因子IL-1A和TNF-α表达差异分析
5 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]溃疡性结肠炎与克罗恩病基因谱表达的差异[J]. 赵琦,何鲜平,游绍伟. 世界华人消化杂志. 2014(34)
[2]NUAK1通过影响F-actin聚合促进乳腺癌的侵袭转移[J]. 尹崇高,李平,李洪利,孙磊,刘菲,张丽娜,李文通,张宝刚. 中国生物化学与分子生物学报. 2013(10)
[3]不同中性洗涤纤维与淀粉比例饲粮对生长肉兔生产性能、盲肠发酵及胃肠道发育的影响[J]. 朱岩丽,李福昌,王春阳,王雪鹏. 动物营养学报. 2013(08)
[4]转录因子Sp1对肺癌细胞LKB1-VEGF通路调控作用研究[J]. 臧远胜,周平坤,丁新民,梁璇,隋建丽,白贝,李强,徐勤枝. 军事医学科学院院刊. 2007(01)
[5]自噬和自噬性细胞死亡与肿瘤的关系及研究进展[J]. 贺淑芳,万小云,谢幸. 国外医学(老年医学分册). 2006(01)
[6]Ultrastructural Pathologic Observation on the Gut-Associated Lymphoid Tissues of Sacculus Rotundus of Rabbits Infected with Rabbit Haemorrhagic Disease Virus[J]. SHE Rui-ping, YANG Han-chun, JIA Jun-zheng, LIU Hai-hong, MA Yi-xin and Itakura CCollege of Animal Medicine , China Agricultural University , Beijing 100094 , P. R. China;Veterinary Faculty , Hokkaido University , Sapttoro 062, Japan. Agricultural Sciences in China. 2003(04)
博士论文
[1]RNAi技术在抑制HBV复制和表达中的应用[D]. 张宏斌.第一军医大学 2006
[2]断乳仔兔腹泻发生机制及生物活性物质的调控研究[D]. 谷子林.东北农业大学 2004
硕士论文
[1]黑斑息肉综合征双气囊小肠镜治疗的临床研究及其STK11/LKB1基因突变筛查[D]. 卞德建.第二军医大学 2014
[2]新西兰兔ATG16L1基因多态性与非特异性消化道紊乱的关联分析[D]. 肖正龙.四川农业大学 2013
[3]家兔IL-10基因多态性对基因表达量和肠炎易感性的影响[D]. 王霞.四川农业大学 2012
[4]不同ADF水平饲粮对肉兔生产性能、肠道粘膜免疫及盲肠发酵的影响[D]. 彭全辉.四川农业大学 2008
本文编号：3164771
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
学术名词简表
1 文献综述
1.1 肠炎发生分子机制研究
1.2 LKB1基因的发现及其分子结构
1.3 LKB1基因的调节方式
1.4 LKB1基因功能
1.4.1 对T细胞发育影响
1.4.2 促进成肌细胞分化
1.4.3 可变剪切体LKB1s与精细胞形成
1.4.4 LKB1对细胞极性调节
1.4.5 LKB1与癌症发生关系
1.5 LKB1基因相关信号通路
1.5.1 LKB1/AMPK信号通路与能量代谢
1.5.2 AMPK/SIRT1/NF-κβ信号通路介导炎症反应
1.5.3 LKB1/AMPK/mTOR信号通路与癌症发生
1.6 本研究的目的和意义
1.6.1 试验目的
1.6.2 试验研究的主要内容
1.7 本研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 仪器与试剂
2.3 试验方法
2.3.1 各组织总RNA的提取
2.3.2 总RNA质量检测
2.3.3 反转录合成cDNA
2.3.4 克隆LKB1基因
2.3.5 组织定量表达分析
2.4 细胞试验
2.4.1 细胞传代
2.4.2 冷冻和复苏细胞
2.4.3 细胞计数
2.4.4 siRNA序列及相关基因引物信息
2.4.5 筛选siRNA分子及检测炎症细胞中各基因表达水平
3 试验结果
3.1 LKB1基因克隆及序列分析
3.1.1 RNA质量的检测
3.1.2 LKB1基因克隆结果
3.1.3 测序及生物信息学分析结果
3.2 检测肠炎模型组各组织基因表达
3.3 细胞试验结果
3.3.1 CEC细胞培养及观察
3.3.2 细胞生长曲线
3.3.3 构建细胞炎症模型
3.4 筛选干扰siRNA序列
3.4.1 细胞总RNA提取及反转录
3.4.2 转染及筛选siRNA
3.5 干扰LKB1基因对AMPK信号通路相关基因表达结果
3.5.1 LKB1/AMPK信号通路下游相关基因表达
3.5.2 PGC-1α和ATG13表达
3.6 炎症细胞中促炎因子IL-lA和TNF-a表达结果
4 讨论
4.1 克隆及生物信息学分析
4.2 肠炎模型组各组织表达分析
4.2.1 LKB1组织表达分析
4.2.2 与LKB1相关基因的组织表达分析
4.3 转染si-02-LKB1对炎症细胞模型中信号因子表达影响
4.3.1 PGC-1α和ATG13表达差异分析
4.3.2 AMPK激酶及其相关信号因子表达差异分析
4.3.3 促炎因子IL-1A和TNF-α表达差异分析
5 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]溃疡性结肠炎与克罗恩病基因谱表达的差异[J]. 赵琦,何鲜平,游绍伟. 世界华人消化杂志. 2014(34)
[2]NUAK1通过影响F-actin聚合促进乳腺癌的侵袭转移[J]. 尹崇高,李平,李洪利,孙磊,刘菲,张丽娜,李文通,张宝刚. 中国生物化学与分子生物学报. 2013(10)
[3]不同中性洗涤纤维与淀粉比例饲粮对生长肉兔生产性能、盲肠发酵及胃肠道发育的影响[J]. 朱岩丽,李福昌,王春阳,王雪鹏. 动物营养学报. 2013(08)
[4]转录因子Sp1对肺癌细胞LKB1-VEGF通路调控作用研究[J]. 臧远胜,周平坤,丁新民,梁璇,隋建丽,白贝,李强,徐勤枝. 军事医学科学院院刊. 2007(01)
[5]自噬和自噬性细胞死亡与肿瘤的关系及研究进展[J]. 贺淑芳,万小云,谢幸. 国外医学(老年医学分册). 2006(01)
[6]Ultrastructural Pathologic Observation on the Gut-Associated Lymphoid Tissues of Sacculus Rotundus of Rabbits Infected with Rabbit Haemorrhagic Disease Virus[J]. SHE Rui-ping, YANG Han-chun, JIA Jun-zheng, LIU Hai-hong, MA Yi-xin and Itakura CCollege of Animal Medicine , China Agricultural University , Beijing 100094 , P. R. China;Veterinary Faculty , Hokkaido University , Sapttoro 062, Japan. Agricultural Sciences in China. 2003(04)
博士论文
[1]RNAi技术在抑制HBV复制和表达中的应用[D]. 张宏斌.第一军医大学 2006
[2]断乳仔兔腹泻发生机制及生物活性物质的调控研究[D]. 谷子林.东北农业大学 2004
硕士论文
[1]黑斑息肉综合征双气囊小肠镜治疗的临床研究及其STK11/LKB1基因突变筛查[D]. 卞德建.第二军医大学 2014
[2]新西兰兔ATG16L1基因多态性与非特异性消化道紊乱的关联分析[D]. 肖正龙.四川农业大学 2013
[3]家兔IL-10基因多态性对基因表达量和肠炎易感性的影响[D]. 王霞.四川农业大学 2012
[4]不同ADF水平饲粮对肉兔生产性能、肠道粘膜免疫及盲肠发酵的影响[D]. 彭全辉.四川农业大学 2008
本文编号：3164771
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