胰岛素样生长因子-1对Caco2细胞斯钙素1表达的影响

发布时间：2021-04-28 08:48

　　斯钙素1（Stanniocalcinl, STC1）是一种首先在硬骨类鱼中发现的糖蛋白激素,由鱼类特有的内分泌腺斯坦尼氏小体（corpuscles of stannius, CS）所分泌。在鱼类体内,STC1通过降低鳃和肠对钙的吸收、增加肾脏对磷酸盐的重吸收,来维持体内矿物质代谢的动态平衡。研究表明STC1也在哺乳动物体内参与了钙磷稳态的调控,与已知多种钙磷代谢调节因子骨钙素（0C）、骨保护素（OPG）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）等有互为靶标的复杂联系。IGF-1是一具多种功能的调控因子,参与了机体细胞分化、增殖和成熟等有关的重要生理功能。研究表明,IGF-1与哺乳动物体内钙磷调节与代谢相关因子存在密切的联系。机体钙磷稳态的维持依赖于小肠、肾脏和骨骼三种器官以及维生素D、甲状旁腺素、降钙素等激素密切协调作用而实现的。因此,研究IGF-1在小肠上皮细胞中对STC1的影响,可以为钙磷代谢稳态的调控及代谢紊乱疾病防治提供新的理论基础和实验依据。本实验利用Caco2细胞作为小肠上皮细胞模型,研究IGF-1对STC1表达的影响。通过不同浓度的外源IGF-1不同时间段的处理,然后利用荧光定... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一部分 文献综述
    1 斯钙素的研究进展
        1.1 斯钙素的发现与功能概述
        1.2 斯钙素的结构
        1.3 斯钙素的表达及定位
        1.4 斯钙素的主要生理作用
            1.4.1 STC1与钙磷
            1.4.2 STC1与泌尿系统
            1.4.3 STC1与妊娠
            1.4.4 STC1与运动系统
            1.4.5 STC1与肿瘤
    2 胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的研究进展
        2.1 IGF-1的发现
        2.2 IGF-1的结构
        2.3 IGF-1的主要功能
            2.3.1 IGF-1与生长发育
            2.3.2 IGF-1与代谢作用
    3 Caco2细胞的研究进展
    4 斯钙素1、IGF-1参与钙磷稳态调节的研究进展
    5 荧光定量PCR技术
        5.1 荧光定量PCR技术原理
        5.2 相对定量PCR
        5.3 绝对定量PCR
第二部分 实验研究部分
    1 前言
    2 实验材料
        2.1 细胞系
        2.2 主要试剂及耗材
        2.3 主要仪器设备
        2.4 主要溶液培养基及其配置
            2.4.1 IMDM培养液的配制
            2.4.2 PBS平衡盐溶液的配制和消毒
            2.4.3 D-Hanks溶液配置和消毒
            2.4.4 0.25%胰蛋白酶消化液的配制和灭菌
            2.4.5 LB培养基的配置
            2.4.6 0.1mol/L CaCl_2溶液和0.1mol/L CaCl_2-15%甘油溶液的配制
            2.4.7 电泳缓冲液TAE的配制
    3 实验方法
        3.1 Caco2细胞的培养
        3.2 质粒标准品的构建
            3.2.1 感受态菌的制备
            3.2.2 总RNA的提取和STC1基因扩增
            3.2.3 TA克隆及转化
            3.2.4 质粒少量提取
            3.2.5 质粒标准品的PCR鉴定
        3.3 IGF-1最适浓度的选取
            3.3.1 实验分组
            3.3.2 RNA的提取与荧光定量PCR
        3.4 不同时间相同浓度IGF-1处理Caco2细胞
        3.5 绝对定量PCR
            3.5.1 建立标准曲线
            3.5.2 RNA、cDNA浓度测定
            3.5.3 绝对定量
        3.6 蛋白提取
            3.6.1 细胞裂解提取总蛋白
            3.6.2 蛋白浓度测定
        3.7 Western blot
            3.7.1 SDS-PAGE电泳
            3.7.2 免疫印迹操作-转膜
            3.7.3 免疫检测
            3.7.4 化学发光与曝光
    4 实验结果与分析
        4.1 质粒标准品的构建
            4.1.1 目的片段的提取
            4.1.2 质粒标准品的PCR鉴定
            4.1.3 质粒标准品的测序鉴定
        4.2 建立标准曲线结果
            4.2.1 质粒标准品拷贝数的测定结果
            4.2.2 绘制标准曲线结果
        4.3 RNA的提取
        4.4 IGF-1最适浓度选取相对定量及Western blot结果
            4.4.1 相对定量结果
            4.4.2 Western blot结果
        4.5 最适浓度IGF-1分不同时间处理Caco2细胞的绝对定量及western blot结果
            4.5.1 绝对定量结果
            4.5.2 Western blot结果
    5 讨论
        5.1 绝对定量标准曲线的制备
        5.2 IGF-1最适浓度的选取
        5.3 最适浓度IGF-1分不同时间处理Caco2细胞
    6 结论
参考文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]胰岛素样生长因子-1的研究进展[J]. 李江,董作亮.  国际检验医学杂志. 2013(07)
[2]胰岛素样生长因子IGF-1的研究进展[J]. 邢海权,闫梦菲.  畜禽业. 2011(08)
[3]斯钙素的相关研究概述[J]. 任雪平.  商丘师范学院学报. 2010(03)
[4]人类斯钙素生物学特性的相关研究[J]. 张延涛,王静蓉,李晓燕.  医学综述. 2009(19)
[5]斯钙素的研究进展[J]. 陈维娜,朱广瑾.  生理科学进展. 2008(03)
[6]人类斯钙素1的生物学特性研究进展[J]. 唐小龙,张洹.  中国病理生理杂志. 2008(03)
[7]哺乳动物斯钙素-1的研究[J]. 杨玫,周安国,王之盛.  饲料工业. 2007(12)
[8]胰岛素样生长因子-1研究进展[J]. 段宇.  国外医学.内分泌学分册. 2001(06)
[9]人和哺乳动物斯钙素研究概况[J]. 李卫国,李金亭,高春建.  生理科学进展. 2000(01)

博士论文
[1]ARC及IGF-1在AS肉鸡中抗心肌细胞凋亡作用的研究[D]. 席照房.华中农业大学 2012

硕士论文
[1]Caco-2细胞中葡萄糖、中性氨基酸和二肽（Lys-Phe）转运载体基因和蛋白表达对底物反应模式的比较研究[D]. 吕丽萍.山东农业大学 2012



本文编号：3165182