BRD7参与小鼠炎症发生的功能及机制研究
发布时间：2021-04-28 09:57
[研究目的]BRD7是我室自主克隆的全长新基因,10余年来的工作基础证实BRD7是一个抑瘤基因和核转录调节因子,通过调控多种靶基因参与不同的信号通路,从而表现出不同的生物学表型,如炎症,发育,生殖及肿瘤发生。近年来的研究表明,很多抑癌基因如PTEN、P53、 PDCD4等不仅与肿瘤的发生发展密切相关,而且参与了免疫反应和炎性疾病等正常生理和病理过程。因此,在前期成功构建BRD7基因敲除小鼠模型的基础上,本研究拟探讨BRD7在小鼠炎症发生中的作用和机制,为炎症性疾病发病机制及临床诊治提供实验基础和理论依据。[研究方法]利用前期构建的BRD7条件剔除小鼠模型,系统研究了BRD7剔除对小鼠炎症发生的影响；通过全基因组基因芯片杂交,探讨BRD7剔除前后小鼠重要免疫器官-脾脏差异基因表达谱,并通过real-time PCR进行验证；进一步构建LPS诱导的小鼠胚胎成纤维细胞炎症模型和AOM/DSS联合诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型,探讨BRD7剔除对LPS诱导MEF细胞及AOM/DSS诱导的小鼠结肠炎症发生发展的影响,并通过qRT-PCR或免疫组化技术分别在MEF细胞和小鼠结肠炎组织中对BRD7介导的...
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
主要缩写词简表
第一章 前言
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 所用细胞
2.1.2 实验动物
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要溶液配制
2.1.5 主要仪器
2.1.6 引物
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠基因型鉴定
2.2.2 小鼠组织蛋白水平鉴定
2.2.3 制备小鼠胚胎成纤维细胞
2.2.4 实时定量PCR检测LPS诱导MEF细胞后炎症因子的表达
2.2.5 小鼠溃疡性结肠炎模型的建立
2.2.6 标本采集
2.2.7 结直肠组织病理学检测
2.2.8 免疫组织化学
2.2.9 免疫荧光
2.3 数据处理及统计学分析
第三章 结果
3.1 实验小鼠鼠尾基因型鉴定及部分组织BRD7蛋白水平的检测
3.2 BRD7缺失容易导致小鼠体表炎症及脾脏形态结构的异常
3.2.1 BRD7缺失容易导致小鼠体表炎症
3.2.2 BRD7缺失易导致免疫器官脾形态和结构的异常
3.3 脾脏全基因组芯片杂交及芯片验证
3.3.1 脾脏RNA的抽提及BRD7的表达鉴定
3.3.2 脾脏全基因组芯片杂交,构建差异基因表达谱
3.3.3 芯片验证
3.4 构建LPS诱导的小鼠胚胎成纤维细胞炎症模型
3.4.1 MEF细胞的制备
3.4.2 real-time PCR检测LPS诱导MEF细胞后炎症因子mRNA水平的表达
3.5 构建AOM/DSS联合诱导的小鼠溃疡性结肠炎动物模型
3.5.1 建模动物的一般状况观察
3.5.2 病理组织学改变及病例检测
3.6 免疫组织化学及免疫荧光实验证实BRD7通过IL-6、TNFA、CXCL1、INOS介导的NF-κB信号通路参与了炎症的发生
3.6.1 免疫组织化学结果
3.6.2 免疫荧光结果
第四章 讨论
4.1 基因敲除小鼠模型是研究BRD7在体内的新表型、生物学功能和机制的良好模型
4.2 炎症模型的构建
4.2.1 LPS诱导的小鼠胚胎成纤维细胞炎症模型
4.2.2 AOM/DSS联合诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型
4.3 BRD7参与小鼠炎症发生的机制
第五章 结论
参考文献
综述
参考文献
攻读硕士学位期间主要研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Association between TNF-a and IL-1β genotypes vs Helicobacter pylori infection in Indonesia[J]. Yang Zhao,Jing-Wen Wang,Tsutomu Tanaka,Akihiro Hosono,Ryosuke Ando,Shinkan Tokudome,Soeripto,FX Ediati Triningsih,Tegu Triono,Suwignyo Sumoharjo,EY Wenny Astuti Achwan,Stephanus Gunawan,Yu-Min Li. World Journal of Gastroenterology. 2013(46)
[2]卡波氏肉瘤相关疱疹病毒vGPCR具有巯基化酪氨酸的氨基端的表达和纯化（英文）[J]. 吴慧,傅永明,肖俊,周曼,冯浩. 湖南师范大学自然科学学报. 2011(06)
[3]BRD7核输出信号序列的定位与功能鉴定[J]. 周鸣,郭驰,李夏雨,何佳瑾,徐晓杰,王贺冉,唐珂,曹利,李小玲,李桂源. 中南大学学报(医学版). 2011(07)
[4]Cancer in inflammatory bowel disease[J]. Steven H Itzkowitz. World Journal of Gastroenterology. 2008(03)
[5]Dextran sulfate sodium-induced colitis-associated neoplasia:a promising model for the development of chemopreventive interventions[J]. Margie Lee CLAPPER,Harry Stanley COOPER,Wen-Chi Lee CHANG. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(09)
本文编号：3165274
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
主要缩写词简表
第一章 前言
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 所用细胞
2.1.2 实验动物
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要溶液配制
2.1.5 主要仪器
2.1.6 引物
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠基因型鉴定
2.2.2 小鼠组织蛋白水平鉴定
2.2.3 制备小鼠胚胎成纤维细胞
2.2.4 实时定量PCR检测LPS诱导MEF细胞后炎症因子的表达
2.2.5 小鼠溃疡性结肠炎模型的建立
2.2.6 标本采集
2.2.7 结直肠组织病理学检测
2.2.8 免疫组织化学
2.2.9 免疫荧光
2.3 数据处理及统计学分析
第三章 结果
3.1 实验小鼠鼠尾基因型鉴定及部分组织BRD7蛋白水平的检测
3.2 BRD7缺失容易导致小鼠体表炎症及脾脏形态结构的异常
3.2.1 BRD7缺失容易导致小鼠体表炎症
3.2.2 BRD7缺失易导致免疫器官脾形态和结构的异常
3.3 脾脏全基因组芯片杂交及芯片验证
3.3.1 脾脏RNA的抽提及BRD7的表达鉴定
3.3.2 脾脏全基因组芯片杂交,构建差异基因表达谱
3.3.3 芯片验证
3.4 构建LPS诱导的小鼠胚胎成纤维细胞炎症模型
3.4.1 MEF细胞的制备
3.4.2 real-time PCR检测LPS诱导MEF细胞后炎症因子mRNA水平的表达
3.5 构建AOM/DSS联合诱导的小鼠溃疡性结肠炎动物模型
3.5.1 建模动物的一般状况观察
3.5.2 病理组织学改变及病例检测
3.6 免疫组织化学及免疫荧光实验证实BRD7通过IL-6、TNFA、CXCL1、INOS介导的NF-κB信号通路参与了炎症的发生
3.6.1 免疫组织化学结果
3.6.2 免疫荧光结果
第四章 讨论
4.1 基因敲除小鼠模型是研究BRD7在体内的新表型、生物学功能和机制的良好模型
4.2 炎症模型的构建
4.2.1 LPS诱导的小鼠胚胎成纤维细胞炎症模型
4.2.2 AOM/DSS联合诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型
4.3 BRD7参与小鼠炎症发生的机制
第五章 结论
参考文献
综述
参考文献
攻读硕士学位期间主要研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Association between TNF-a and IL-1β genotypes vs Helicobacter pylori infection in Indonesia[J]. Yang Zhao,Jing-Wen Wang,Tsutomu Tanaka,Akihiro Hosono,Ryosuke Ando,Shinkan Tokudome,Soeripto,FX Ediati Triningsih,Tegu Triono,Suwignyo Sumoharjo,EY Wenny Astuti Achwan,Stephanus Gunawan,Yu-Min Li. World Journal of Gastroenterology. 2013(46)
[2]卡波氏肉瘤相关疱疹病毒vGPCR具有巯基化酪氨酸的氨基端的表达和纯化（英文）[J]. 吴慧,傅永明,肖俊,周曼,冯浩. 湖南师范大学自然科学学报. 2011(06)
[3]BRD7核输出信号序列的定位与功能鉴定[J]. 周鸣,郭驰,李夏雨,何佳瑾,徐晓杰,王贺冉,唐珂,曹利,李小玲,李桂源. 中南大学学报(医学版). 2011(07)
[4]Cancer in inflammatory bowel disease[J]. Steven H Itzkowitz. World Journal of Gastroenterology. 2008(03)
[5]Dextran sulfate sodium-induced colitis-associated neoplasia:a promising model for the development of chemopreventive interventions[J]. Margie Lee CLAPPER,Harry Stanley COOPER,Wen-Chi Lee CHANG. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(09)
本文编号：3165274
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3165274.html
