亚精胺调控仔猪肠黏膜上皮细胞IPEC-J2增殖、迁移及炎性反应的机制研究

发布时间：2021-04-28 20:54

　　多胺是动物细胞生长必需的一类活性小分子,包括腐胺、亚精胺和精胺。腐胺是其他两种多胺合成的前体物,三种多胺之间在多胺合成酶、多胺氧化酶和亚精胺/精胺乙酰转移酶的作用下可以互相转化。本课题组前期研究发现,腐胺对猪肠粘膜上皮细胞（IPEC-J2）具有良好的促进细胞增殖、迁移和抗炎的效果。但是还不清楚腐胺的这些功能是通过其本身起的作用还是通过其代谢产物亚精胺或精胺起的作用。为此,我们以IPEC-J2细胞为模型,通过添加多胺代谢通路抑制剂DEGBG和DFMO阻断多胺之间的相互转化,来揭示多胺促进细胞增殖和迁移以及抗炎的作用机理。IPEC-J2细胞以0.5×10⁵个/mL接种在96孔板中,添加不同浓度亚精胺（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L、32μmol/L和64μmol/L）来研究亚精胺对IPEC-J2细胞的增殖作用并筛选出亚精胺适宜添加量。向培养基中添加不同浓度的DEGBG（0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L）来确定抑制细胞内亚精胺生成的DEGBG适宜添加水平。通过在IPEC-J... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 前言
    1.2 仔猪断奶应激
        1.2.1 断奶应激的主要影响因素
        1.2.2 断奶应激对仔猪肠道健康的影响
    1.3 多胺的理化性质与代谢途径
        1.3.1 多胺的理化性质
        1.3.2 多胺的结构
        1.3.3 多胺的合成途径
        1.3.4 多胺在细胞内的转运
        1.3.5 多胺在细胞内的代谢途径
    1.4 多胺的生物学功能
        1.4.1 多胺在血管生成中的作用
        1.4.2 多胺在抗氧化应激上的作用
        1.4.3 多胺在细胞增殖上的作用
        1.4.4 多胺在细胞迁移上的作用
        1.4.5 多胺的抗炎作用
    1.5 腐胺促进小肠上皮细胞损伤修复的分子机制
        1.5.1 腐胺对粘附斑激酶(Focal Adhesion Kinase,FAK)信号通路的影响
        1.5.2 腐胺对丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinases,MAPK)信号通路的影响
        1.5.3 腐胺对NF-κB信号通路的影响
    1.6 本试验提出的问题及方案
        1.6.1 研究的目的及意义
        1.6.2 研究的内容和拟解决的关键问题
        1.6.3 技术路线
第二章 试验材料与方法
    2.1 试验材料
    2.2 试验仪器
    2.3 细胞培养
    2.4 试验方法
        2.4.1 DEGBG合成
        2.4.2 CCK-8细胞增殖试验
        2.4.3 细胞迁移试验
        2.4.4 细胞中多胺的提取和测定
        2.4.5 细胞中RNA的提取
        2.4.6 RNA反转录
        2.4.7 实时荧光定量PCR
        2.4.8 IPEC-J2炎症刺激反应模型建立
        2.4.9 细胞中蛋白测定与Western blot
        2.4.10 细胞内过氧化氢检测
    2.5 数据统计分析
第三章 试验结果与分析
    3.1 亚精胺对IPEC-J2细胞增殖和迁移的影响
        3.1.1 外源添加亚精胺对IPEC-J2细胞增殖的影响
        3.1.2 DEGBG对 IPEC-J2 细胞内多胺水平的影响
        3.1.4 亚精胺对DEGBG抑制细胞增殖的缓解作用
        3.1.5 亚精胺对IPEC-J2细胞迁移的影响
    3.2 亚精胺对IPEC-J2细胞增殖和迁移的作用机制
        3.2.1 亚精胺对MAPK信号通路中关键基因表达的影响
        3.2.2 亚精胺对MAPK/ERK和 FAK信号通路关键蛋白表达的影响
        3.2.3 亚精胺对ODC蛋白表达的影响
    3.3 亚精胺对IPEC-J2细胞抗炎的作用机制
        3.3.1 亚精胺对LPS和 DEGBG诱导炎症反应的缓解效果
        3.3.2 亚精胺对NF-κB信号通路关键蛋白表达的影响
第四章 讨论
    4.1 腐胺促进IPEC-J2细胞增殖和迁移是通过转化为亚精胺起作用
    4.2 亚精胺促进IPEC-J2细胞增殖和迁移的作用机制
    4.3 NF-κB信号通路介导亚精胺抑制IPEC-J2 细胞炎症反应
第五章 全文结论、创新点及后续研究展望
    5.1 全文结论
    5.2 创新点
    5.3 后续研究展望
参考文献
附录 A
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]断奶仔猪发生应激原因与防控措施[J]. 王蕊香,那木吉拉,银花.  畜牧兽医科学(电子版). 2020(04)
[2]Putrescine mitigates intestinal atrophy through suppressing inflammatory response in weanling piglets[J]. Bangmin Liu,Xianren Jiang,Long Cai,Xuemei Zhao,Zhaolai Dai,Guoyao Wu,Xilong Li.  Journal of Animal Science and Biotechnology. 2019(04)
[3]早期断奶应激对仔猪肠黏膜屏障功能的影响及其监测与修复[J]. 王向荣,贺建华,戴求仲,方热军.  动物营养学报. 2014(11)
[4]NF-κB信号通路与炎症反应[J]. 王晓晨,吉爱国.  生理科学进展. 2014(01)
[5]有效防治仔猪断奶腹泻的新方法[J]. 李正云,祁先卫,盛彦武.  当代畜牧. 2013(35)
[6]早期断奶仔猪腹泻原因及防制措施[J]. 杜会坡,张利国,孟召川.  中国畜牧兽医文摘. 2013(08)
[7]The biological stress of early weaned piglets[J]. Joy M Campbell,Joe D Crenshaw,Javier Polo.  Journal of Animal Science and Biotechnology. 2013(02)
[8]仔猪断奶应激及营养调控措施的应用[J]. 王恬.  畜牧与兽医. 2009(05)
[9]影响早期断奶仔猪的营养因素[J]. 张传涛,杨金宝,何若钢,贺树鹏,郭卫华,覃小荣.  饲料博览(技术版). 2007(03)
[10]早期断奶仔猪营养生理及其调控[J]. 郭长义,胡民强.  饲料研究. 2006(02)

硕士论文
[1]腐胺调控仔猪肠黏膜上皮细胞增殖和损伤修复的机制研究[D]. 刘邦民.中国农业科学院 2019



本文编号：3166156