水貂犬瘟热病毒的分离鉴定及精制卵黄抗体（IgY）的研制

发布时间：2021-04-29 01:12

　　犬瘟热（Canine distemper，CD）是由副粘病毒科麻疹病毒属（Morbillivirus）的犬瘟热病毒（Canine distemper virus，CDV）引起的一种急性、高度接触传染性疾病。该病毒可致多种动物发病，其病死率为30%⁸0%，但雪貂高达100%，素有“毁灭性传染病”之称。目前，CDV的自然感染宿主范围不断扩大，危害性也越来越大。CDV可在犬或貂的肺和腹腔巨噬细胞、肾细胞、犊牛的肾细胞和鸡胚成纤维细胞（CEF）等多种组织细胞上增殖。其中以犬肺巨噬细胞最为易感，可出现CDV典型的葡萄串状细胞病变（CPE），但该细胞分离困难，且容易污染。CEF对营养条件要求低，生长稳定，并对CDV敏感，细胞病变典型、易观察，但CDV在CEF上初次分离很困难，需在鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上经多次传代才能适应CEF。近年来，研究发现CDV具有淋巴细胞信号刺激因子（SLAM），而Vero细胞可以表达SLAM受体，因此，Vero细胞成为了CDV分离培养的首选细胞。本研究中，在将鲁北兽医诊断中心RT-PCR检测呈阳性的水貂CD病料进行常规处理的基础上，分别接种CEF、... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
引言
第1章 文献综述
    1.1 犬瘟热病毒病原学特征
        1.1.1 犬瘟热病毒的形态特征及理化特性
        1.1.2 犬瘟热病毒的抗原性与培养特性
        1.1.3 犬瘟热病毒病毒的组织嗜性与致病性
    1.2 犬瘟热病毒分子生物学特征
        1.2.1 犬瘟热病毒基因组的结构特征
        1.2.2 犬瘟热病毒基因组编码蛋白及其功能
    1.3 犬瘟热病毒的实验室检测技术
        1.3.1 病原学检测技术
        1.3.2 血清学检测技术
        1.3.3 分子生物学检测技术
    1.4 本研究的目的与意义
第2章 水貂犬瘟热病毒的分离鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 病料来源
        2.1.2 细胞和参考毒株
        2.1.3 主要试剂和器材
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 方法
        2.2.1 病料的采集与处理
        2.2.2 病料 RT-PCR 检测 CDV
        2.2.3 病料 PCR 检测水貂细小病毒（MEV 和 ADMV）
        2.2.4 病毒分离培养
        2.2.5 分离毒鉴定
    2.3 结果
        2.3.1 病料 RT-PCR 检测 CDV 及 PCR 的特异性试验结果
        2.3.2 病料 PCR 检测水貂细小病毒（MEV 和 ADMV）结果
        2.3.3 分离毒 CDV 在不同细胞上的病变特征
        2.3.4 分离毒 CDV 在不同细胞上的病毒效力
        2.3.5 分离毒 CDV 在 Vero 细胞上的中和效价
        2.3.6 CDV 分离毒 RT-PCR 鉴定结果
        2.3.7 分离毒 RT-PCR 扩增产物测序鉴定结果
        2.3.8 分离毒间接免疫荧光鉴定结果
        2.3.9 包涵体检查结果
    2.4 讨论
        2.4.1 病毒检测引物的设计
        2.4.2 CDV 分离毒细胞培养条件的优化
        2.4.3 CDV 分离毒鉴定方法的选择
    2.5 小结
第3章 水貂犬瘟热病毒荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立与应用
    3.1 材料
        3.1.1 毒株
        3.1.2 主要试剂和器材
        3.1.3 主要溶液的配制
    3.2 方法
        3.2.1 引物的设计与合成
        3.2.2 样品处理与核酸提取
        3.2.3 目的基因的扩增与标准质粒的构建
        3.2.4 标准曲线的建立及敏感性检测
        3.2.5 特异性试验
        3.2.6 稳定性试验
    3.3 结果
        3.3.1 RT-PCR 扩增及质粒的构建
        3.3.2 标准曲线的建立及敏感性检测
        3.3.3 特异性试验
        3.3.4 稳定性试验
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 水貂犬瘟热病毒精制卵黄抗体（IGY）的制备及动物保护试验
    4.1 材料
        4.1.1 毒株
        4.1.2 抗原制备
        4.1.3 实验动物
        4.1.4 主要试剂和器材
        4.1.5 主要溶液的配制
    4.2 方法
        4.2.1 蛋鸡的免疫
        4.2.2 鸡蛋与血清的收集及处理
        4.2.3 卵黄抗体提取制备
        4.2.4 卵黄抗体和血清抗体效力测定
        4.2.5 SDS-PAGE 电泳检测 IgY
        4.2.6 抗水貂 CDV 病毒 IgY 体外病毒中和试验
        4.2.7 IgY 免疫动物保护性试验
    4.3 结果
        4.3.1 AGP 法测定 CDV IgG 和 IgY 的抗体水平
        4.3.2 间接 ELISA 法测定 CDV IgG 和 IgY 的抗体水平
        4.3.3 SDS-PAGE 电泳检测卵黄抗体
        4.3.4 IgY 体外病毒中和试验
        4.3.5 IgY 免疫动物治疗效果
    4.4 讨论
        4.4.1 免疫原选择
        4.4.2 免疫程序设计
        4.4.3 卵黄抗体与血清抗体消长规律
        4.4.4 AGP 检测方法的设立
        4.4.5 IgY 抽提方法的选择
    4.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介
在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3166543