绵羔羊瘤胃微生物区系与宿主基因表达差异的研究

发布时间：2021-04-29 03:56

　　本研究选用甘肃高山细毛羊及其与南非肉用美利奴杂交F1代羔羊各6只，研究了遗传背景对瘤胃发酵参数的影响，并采用变性梯度凝胶电泳技术（PCR-DGGE）方法检测了瘤胃微生物区系，利用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）技术分析了宿主中与瘤胃脂肪酸转运、肌肉发育和脂肪沉积相关基因的表达量。获得了如下结果：1.通过对甘肃高山细毛羊（A组）和南甘F1（B组）的瘤胃微生物VFAs的测定，结果表明：A组和B组两组羊间除了丁酸无显著差异外（P>0.05），其余参数均呈显著或极显著差异（P<0.05或P<0.01）。其中，乙酸A组极显著高于B组（P<0.01）；丙酸B组极显著高于A组（P<0.01）；乙酸/丙酸A组极显著高于B组（P<0.01）；总酸A组显著高于B组（P<0.05）。绵羊瘤胃液尿素氮、氨氮和总氮B组都极显著高于A组（P<0.01），蛋白氮2组间无显著差异（P>0.05）。2.运用PCR-DGGE技术分析了2组绵羊瘤胃微生物区系多样性，结果表明，A组和B组绵羊PCR-DGGE图谱无相似性；瘤胃微生物多样性指数分别为3.61和3... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Summary
1 文献综述
    1.1 问题的提出
    1.2 影响绵羊瘤胃发育的因素
        1.2.1 遗传
        1.2.2 年（日）龄
        1.2.3 饲料组成及形态
        1.2.4 挥发性脂肪酸
        1.2.5 瘤胃微生物
    1.3 绵羊瘤胃微生物区系多样性
    1.4 本研究涉及的基因研究进展
        1.4.1 MCTs 家族
        1.4.2 IGF-Ⅰ和 IGF-ⅠR 基因
        1.4.3 PPARγ基因
    1.5 本研究的目的和意义
2 材料方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 动物来源与样品采集
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要分子生物试剂配制
        2.1.5 引物
    2.2 方法
        2.2.1 瘤胃液样品的采集与处理
        2.2.2 瘤胃参数测定指标及方法
        2.2.3 DNA提取方法
        2.2.4 DGGE 法
        2.2.5 DGGE 凝胶切胶及 PCR 扩增的方法
        2.2.6 DGGE 凝胶回收 DNA
        2.2.7 RNA 提取方法
        2.2.8 Real-time PCR 法
    2.3 数据处理
3 结果与分析
    3.1 瘤胃参数测定与分析
        3.1.1 瘤胃液中 VFAs 测定
        3.1.2 瘤胃液中的氮含量测定
    3.2 PCR-DGGE 结果与分析
        3.2.1 瘤胃内容物总 DNA 的提取及 PCR 扩增
        3.2.2 DGGE 指纹图谱建立及分析
        3.2.3 割胶条带序列分析
    3.3 宿主基因表达分析
        3.3.1 总 RNA 的提取
        3.3.2 不同类群绵羊瘤胃背囊 MCTs 基因的表达量分析
        3.3.3 不同类群绵羊肌肉组织 IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR 基因的表达量分析
        3.3.4 不同类群绵羊肝脏组织 IGF-Ⅰ基因的表达量分析
        3.3.5 不同类群绵羊脂肪组织 PPARγ基因的表达量分析
4 讨论
    4.1 不同类群绵羊的瘤胃参数测定的差异
    4.2 PCR-DGGE 分析比较不同类群绵羊瘤胃微生物区系差异
    4.3 宿主基因表达量分析
        4.3.1 不同类群绵羊瘤胃组织 MCTs 基因家族的表达差异
        4.3.2 不同类群绵羊脂肪组织 PPARγ基因的表达差异
        4.3.3 不同类群绵羊肝脏、肌肉组织 IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR 基因的表达差异
5 结论
参考文献
附录一 VFA测定方法
附录二 氨态氮测定方法
致谢
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本文编号：3166792