小鹅瘟病毒WH-12株的分离鉴定及其双抗夹心ELISA检测方法的建立

发布时间：2021-05-06 14:55

　　小鹅瘟（GP）也被称为Derzsy’s病,是由小鹅瘟病毒（学名为鹅细小病毒,Goose parvovirus, GPV）引起的一种主要侵害雏鹅和雏番鸭的高度接触性传染病。该病传播速度快,死亡率和发病率均高达90%-100%,随着雏鹅日龄的增长,发病率和死亡率都有所下降,其主要特征是小肠粘膜表层大片坏死脱落与渗出物凝成假膜栓子物堵塞于小肠,最大发病日龄为60日龄,其后常成隐性感染。本病一年四季均可发生流行,具有一定的季节性和周期性。目前,该病已成为危害养鹅业和养番鸭业中最主要传染病之一,给养殖业造成重大损失。本研究对疑似小鹅瘟临床病例进行了病原的分离鉴定,丰富了小鹅瘟的流行病学及病原学资料,为临床诊断提供依据。在病原分离鉴定的基础上,扩增了该分离株的全基因序列,进行了序列分析,为小鹅瘟病毒分子流行病学的的研究提供依据。此外,本研究通过构建重组质粒,表达结构蛋白VP3,建立了小鹅瘟病毒双抗夹心ELISA检测方法,旨在为基层防疫单位及流行病学调查提供了技术手段。主要研究内容：对来自安徽省五河县某养殖场所送检的病死和濒死小鹅进行的实验室检测,通过流行病学、临诊观察和剖检病变的检查,初步疑为小鹅... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
缩略语及符号
第一章 小鹅瘟病毒生物学特性及其诊断方法的研究进展
    1 小鹅瘟病毒的发现
    2 小鹅瘟病毒的特性
        2.1 小鹅瘟病毒的分类地位
        2.2 形态特征
        2.3 理化特性
        2.4 培养特性
    3 小鹅瘟病毒的分子生物学特性
        3.1 基因组结构特点
        3.2 基因组的转录和调节
    4 小鹅瘟病毒主要蛋白
        4.1 非结构蛋白
        4.2 结构蛋白
    5 小鹅瘟
        5.1 流行病学
        5.2 小鹅瘟的临床症状和病理变化
    6 小鹅瘟病毒的诊断方法
        6.1 病毒分离和鉴定
        6.2 血清学诊断
        6.3 分子生物学诊断
    7 小鹅瘟的防治
    8 研究目的及意义
    参考文献
第二章 小鹅瘟病毒分离鉴定及全基因序列的测定
    摘要
    1 材料
        1.1 材料
    2 方法
        2.1 病料的采集及处理
        2.2 病料的鉴定
        2.3 病毒的增殖及传代
        2.4 病毒的分离鉴定
        2.5 动物回归试验
        2.6 GPV各片段的扩增与测序
        2.7 GPV全基因序列的拼接和分析
    3 结果
        3.1 病料的鉴定
        3.2 鹅胚的观察
        3.3 血凝试验(HA)
        3.4 琼脂扩散试验(AGP)
        3.5 PCR方法
        3.6 动物回归试验
        3.7 GPVWH-12各片段的扩增
        3.8 克隆的鉴定
        3.9 GPV基因序列的拼接
        3.10 全基因序列同源性的比较
        3.11 遗传进化分析
        3.12 GPV各基因核苷酸序列及推导氨基酸序列同源性比较
    4 讨论
    参考文献
第三章 小鹅瘟病毒VP3蛋白多克隆抗体的制备与双抗夹心ELISA方法的建立
    摘要
    1 材料
        1.1 材料
    2 方法
        2.1 VP3基因引物的设计与扩增
        2.2 重组表达载体Pcold Ⅰ—VP3的构建
        2.3 VP3蛋白的表达及鉴定
        2.4 VP3蛋白浓度的测定
        2.5 抗VP3多克隆抗体的制备及鉴定
        2.6 双抗夹心ELISA方法反应条件的建立
    3 结果
        3.1 VP3基因扩增及鉴定
        3.2 VP3蛋白的表达
        3.3 VP3蛋白的纯化
        3.4 VP3蛋白Western-blot的鉴定
        3.5 VP3蛋白的浓度
        3.6 抗VP3多克隆抗体的纯化及鉴定
        3.7 双抗夹心ELISA方法反应条件的建立
    4 讨论
    参考文献
全文总结
附录一
附录二
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]鹅细小病毒非结构蛋白B细胞线性抗原表位的鉴定及抗原表位区分子特性分析[J]. 于天飞,仇铮,马波,高明春,张文龙,王君伟.  中国预防兽医学报. 2011(08)
[2]鹅细小病毒非结构蛋白和结构蛋白的二级结构及B细胞抗原表位预测[J]. 于天飞,马波,邢明伟,靳淼,刘海暇,李俚,王君伟.  中国家禽. 2007(07)
[3]小鹅瘟的诊断与防制[J]. 苏颖,王姝.  现代畜牧兽医. 2007(03)
[4]几种常见鹅病的防治方法[J]. 存云.  湖北畜牧兽医. 2007(02)
[5]小鹅瘟的流行与有效防制措施[J]. 王永坤,田慧芳.  现代畜牧兽医. 2007(01)
[6]小鹅瘟的防治[J]. 包金莲.  内蒙古科技与经济. 2006(24)
[7]小鹅瘟综合防治[J]. 侯洪烈.  四川畜牧兽医. 2006(11)
[8]小鹅瘟的研究进展[J]. 李福伟,李惠敏,张桂红,吴玄光.  广东畜牧兽医科技. 2006(04)
[9]鹅细小病毒HG5/82株的分离鉴定及生物学特性的研究[J]. 李桂霞,刘胜旺,孔宪刚,谷守林,冉多良.  中国预防兽医学报. 2005(03)
[10]小鹅瘟的发生与防治[J]. 周景明.  湖北畜牧兽医. 2003(06)

硕士论文
[1]抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备及对应抗原表位的定位[D]. 郭鹭.东北农业大学 2010
[2]感染鹅细小病毒雏鹅病理学研究[D]. 裴颖.东北农业大学 2008
[3]鹅细小病毒VP3-ELISA和NS2-ELISA检测方法的建立及抗体消长规律的测定[D]. 张雅为.东北农业大学 2008



本文编号：3172120