猪种布鲁氏菌感染相关循环miRNA的筛选及验证
发布时间：2021-05-10 01:38
布鲁氏菌病（Brucellosis）是一种由布鲁氏菌（Brucella）引起的烈性人畜共患传染病,广泛流行于全球160多个国家和地区,给世界范围内畜牧业的发展和人类的健康带来了巨大的威胁。目前,布鲁氏菌病的诊断方法主要可以分为病原学诊断和血清学诊断,但两类方法各自存在着一些缺点与不足:病原学诊断存在病原分离操作难度大,分离成功率低,病原培养时间长以及存在一定生物安全风险等问题;血清学诊断则存在凝集抗原容易和多种与布鲁氏菌存在相似抗原表位的细菌抗血清（大肠杆菌O157、耶尔森菌O9等）发生交叉反应、不能区分免疫抗体和感染抗体等问题。microRNA（简称miRNA）是一类长约22nt的内源性非编码小分子RNA,广泛存在于线虫、果蝇、植物和包括人在内的真核生物中。随着对其研究的深入,人们发现miRNA可以从细胞内释放,广泛而稳定的存在于包括血清、血浆、唾液、尿液甚至牛奶等细胞外液中,人们将这类miRNA统称为循环miRNA（circulating20microRNA）。循环miRNA具有存在稳定、物种间进化保守、检测方法多样等特点,并且循环miRNA作为一种新的疾病诊断标志物已经在人类医学...
【文章来源】：中国兽医药品监察所北京市
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 引言
1.1 布鲁氏菌及布鲁氏菌病概述
1.1.1 布鲁氏菌及布鲁氏菌病
1.1.2 布鲁氏菌病的诊断方法
1.1.3 布鲁氏菌病的防治
1.2 转录组学及转录组测序技术概述
1.3 循环miRNA概述
1.3.1 循环miRNA的发现
1.3.2 循环miRNA的特点
1.3.3 循环miRNA的形成与功能
1.3.4 循环miRNA的提取与检测
1.3.5 循环miRNA与疾病的诊断
1.4 本研究目的和意义
第二章 布鲁氏菌感染小鼠模型的建立及血清转录组测序
2.1 引言
2.2 材料
2.2.1 菌株及实验动物
2.2.2 主要试剂及耗材
2.2.3 主要仪器及设备
2.3 方法
2.3.1 细菌的复苏和计数
2.3.2 布鲁氏菌感染BALB/c小鼠
2.3.3 小鼠脾脏重量和脾脏含菌量测定
2.3.4 小鼠血清抗体滴度的测定
2.3.5 小鼠血清转录组测序
2.4 结果
2.4.1 不同感染时间小鼠脾脏重量变化
2.4.2 不同感染时间小鼠脾脏含菌量变化
2.4.3 不同感染时间小鼠血清抗体水平变化
2.4.4 小鼠血清转录组测序
2.5 讨论
第三章 小鼠血清转录组测序数据验证
3.1 引言
3.2 材料
3.2.1 菌株、细胞株及实验动物
3.2.2 主要试剂及耗材
3.2.3 主要仪器及设备
3.3 方法
3.3.1 S1330 感染组与空白对照组小鼠血清转录组数据验证
3.3.2 S2 感染组与空白对照组小鼠血清转录组数据验证
3.3.3 S1330 感染组与S2 感染组小鼠血清转录组数据验证
3.3.4 扩大样本量验证mmu-miR-10b-5p
3.3.5 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬细胞RAW264.7 中表达水平的探究
3.3.6 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬细胞中下游靶点的预测及验证
3.3.7 bta-miR-10b-5p在牛血清中表达水平的探究
3.4 结果
3.4.1 S1330 感染组与空白对照组小鼠血清转录组数据验证
3.4.2 S2 感染组与空白对照组小鼠血清转录组数据验证
3.4.3 S1330 感染组与S2 感染组小鼠血清转录组数据验证
3.4.4 扩大样本量验证mmu-miR-10b-5p
3.4.5 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬细胞RAW264.7 中表达水平的探究
3.4.6 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬细胞中下游靶点的预测及验证
3.4.7 bta-miR-10b-5p在牛血清中表达水平的探究
3.5 讨论
第四章 结论
4.1 实验结论
4.2 创新点
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]microRNA检测方法的优缺点评价[J]. 祁双,韩崇旭. 国际检验医学杂志. 2017(01)
[2]我国家畜布鲁氏菌病流行现状与诊断技术研究进展[J]. 赵贵民,王洪梅,何洪彬. 中国畜牧杂志. 2016(16)
[3]三种方法提取血清miRNA效果的比较[J]. 陈昌国,陈秋圆,郭建巍,马志家,刘敏,赵强元,张雅芳. 检验医学与临床. 2015(20)
[4]循环microRNA:潜在的疾病诊断生物标志物[J]. 焦志军. 临床检验杂志. 2012(10)
[5]动物中microRNA的保守性和进化历程[J]. 罗艳,张群,梁宇君,张士璀. 中国科学:生命科学. 2012(02)
[6]TaqMan20MGB探针实时荧光定量PCR快速检测布鲁氏菌[J]. 高正琴,邢进,冯育芳,岳秉飞,贺争鸣. 中国人兽共患病学报. 2011(11)
[7]布鲁氏菌病的流行情况及危害[J]. 赵凤菊. 中国畜牧兽医文摘. 2011(02)
[8]布鲁氏杆菌各类检测方法的比较[J]. 曾瑞霞,苏玉虹. 中国畜牧兽医文摘. 2007(01)
硕士论文
[1]循环miRNA内参的筛选及验证[D]. 向梦琴.南华大学 2015
本文编号：3178422
【文章来源】：中国兽医药品监察所北京市
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 引言
1.1 布鲁氏菌及布鲁氏菌病概述
1.1.1 布鲁氏菌及布鲁氏菌病
1.1.2 布鲁氏菌病的诊断方法
1.1.3 布鲁氏菌病的防治
1.2 转录组学及转录组测序技术概述
1.3 循环miRNA概述
1.3.1 循环miRNA的发现
1.3.2 循环miRNA的特点
1.3.3 循环miRNA的形成与功能
1.3.4 循环miRNA的提取与检测
1.3.5 循环miRNA与疾病的诊断
1.4 本研究目的和意义
第二章 布鲁氏菌感染小鼠模型的建立及血清转录组测序
2.1 引言
2.2 材料
2.2.1 菌株及实验动物
2.2.2 主要试剂及耗材
2.2.3 主要仪器及设备
2.3 方法
2.3.1 细菌的复苏和计数
2.3.2 布鲁氏菌感染BALB/c小鼠
2.3.3 小鼠脾脏重量和脾脏含菌量测定
2.3.4 小鼠血清抗体滴度的测定
2.3.5 小鼠血清转录组测序
2.4 结果
2.4.1 不同感染时间小鼠脾脏重量变化
2.4.2 不同感染时间小鼠脾脏含菌量变化
2.4.3 不同感染时间小鼠血清抗体水平变化
2.4.4 小鼠血清转录组测序
2.5 讨论
第三章 小鼠血清转录组测序数据验证
3.1 引言
3.2 材料
3.2.1 菌株、细胞株及实验动物
3.2.2 主要试剂及耗材
3.2.3 主要仪器及设备
3.3 方法
3.3.1 S1330 感染组与空白对照组小鼠血清转录组数据验证
3.3.2 S2 感染组与空白对照组小鼠血清转录组数据验证
3.3.3 S1330 感染组与S2 感染组小鼠血清转录组数据验证
3.3.4 扩大样本量验证mmu-miR-10b-5p
3.3.5 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬细胞RAW264.7 中表达水平的探究
3.3.6 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬细胞中下游靶点的预测及验证
3.3.7 bta-miR-10b-5p在牛血清中表达水平的探究
3.4 结果
3.4.1 S1330 感染组与空白对照组小鼠血清转录组数据验证
3.4.2 S2 感染组与空白对照组小鼠血清转录组数据验证
3.4.3 S1330 感染组与S2 感染组小鼠血清转录组数据验证
3.4.4 扩大样本量验证mmu-miR-10b-5p
3.4.5 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬细胞RAW264.7 中表达水平的探究
3.4.6 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬细胞中下游靶点的预测及验证
3.4.7 bta-miR-10b-5p在牛血清中表达水平的探究
3.5 讨论
第四章 结论
4.1 实验结论
4.2 创新点
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]microRNA检测方法的优缺点评价[J]. 祁双,韩崇旭. 国际检验医学杂志. 2017(01)
[2]我国家畜布鲁氏菌病流行现状与诊断技术研究进展[J]. 赵贵民,王洪梅,何洪彬. 中国畜牧杂志. 2016(16)
[3]三种方法提取血清miRNA效果的比较[J]. 陈昌国,陈秋圆,郭建巍,马志家,刘敏,赵强元,张雅芳. 检验医学与临床. 2015(20)
[4]循环microRNA:潜在的疾病诊断生物标志物[J]. 焦志军. 临床检验杂志. 2012(10)
[5]动物中microRNA的保守性和进化历程[J]. 罗艳,张群,梁宇君,张士璀. 中国科学:生命科学. 2012(02)
[6]TaqMan20MGB探针实时荧光定量PCR快速检测布鲁氏菌[J]. 高正琴,邢进,冯育芳,岳秉飞,贺争鸣. 中国人兽共患病学报. 2011(11)
[7]布鲁氏菌病的流行情况及危害[J]. 赵凤菊. 中国畜牧兽医文摘. 2011(02)
[8]布鲁氏杆菌各类检测方法的比较[J]. 曾瑞霞,苏玉虹. 中国畜牧兽医文摘. 2007(01)
硕士论文
[1]循环miRNA内参的筛选及验证[D]. 向梦琴.南华大学 2015
本文编号：3178422
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3178422.html
