东北白鹅TLR15基因基本特征及LPS诱导下的表达分析

发布时间：2021-05-10 03:09

　　Toll样受体（Toll-like20receptors,TLRs）是固有免疫系统中一类重要的跨膜信号传递蛋白,通过识别病原微生物保守的分子相关模式启动对病原体的识别,从而实现早期抗感染作用,并为获得性免疫提供相关活化分子。Toll样受体15（Toll-like20receptors2015,TLR15）作为禽类所特有的模式识别受体,其在禽类免疫系统的作用分析有助于了解该分子的抗感染作用机制,并为免疫制剂的开发提供基础依据。本研究以东北白鹅为试验对象,对TLR15在相关炎症反应中的作用进行了系列分析。本研究首先采用反转录PCR技术克隆东北白鹅TLR15基因,并通过生物信息学软件分析该基因的结构特征、分类地位和进化关系;同时构建东北白鹅TLR15部分序列原核表达载体,诱导重组蛋白表达,制备兔抗鹅TLR15序列多克隆抗体;其次在细菌脂多糖（LPS）诱导下建立雏鹅炎症反应模型,应用荧光定量PCR技术,分析东北白鹅TLR15基因以及相关免疫因子在不同组织的转录水平;再应用免疫组织化学技术,对TLR15在不同组织的表达水平进行检测。结果表明:1、东北白鹅TLR15基因片段长度22059820bp... 

【文章来源】：哈尔滨师范大学黑龙江省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 TOLL样受体研究进展
        1.1.1 Toll样受体的发现
        1.1.2 Toll样受体的结构
        1.1.3 Toll样受体的种类
        1.1.4 Toll样受体的分布
        1.1.5 Toll样受体的信号通路
    1.2 禽类TOLL样受体15的研究进展
        1.2.1 鸡TLR15的分子生物学研究
        1.2.2 鹅TLR15的分子生物学研究
    1.3 研究目的与意义
    1.4 研究内容
第2章 东北白鹅TLR15序列克隆、原核表达及多克隆抗体的制备
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 载体和菌株
        2.1.3 酶及主要试剂
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 引物设计
        2.2.2 鹅肝脏组织总RNA的提取
        2.2.3 鹅总RNA的纯化及反转录
        2.2.4 鹅TLR15基因的克隆
        2.2.5 鹅TLR15生物信息学分析
        2.2.6 鹅TLR15部分基因原核表达载体的构建
        2.2.7 鹅TLR15部分基因的原核表达及多克隆抗体的制备
        2.2.8 抗血清的制备及检测
    2.3 结果
        2.3.1 鹅肝脏组织总RNA的提取及RT-PCR
        2.3.2 鹅TLR15基因的鉴定
        2.3.3 鹅TLR15基因的生物信息学特征
        2.3.4 鹅TLR15原核表达载体的鉴定
        2.3.5 鹅TLR15重组蛋白的鉴定
        2.3.6 抗血清的检测
    2.4 讨论
    2.5 结论
第3章 LPS诱导下鹅TLR15 在组织中的分布
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 酶及主要试剂
        3.1.3 主要仪器设备
    3.2 试验方法
        3.2.1 雏鹅炎症模型的建立
        3.2.2 引物设计
        3.2.3 鹅不同组织总RNA的提取
        3.2.4 总RNA的纯化及反转录
        3.2.5 鹅TLR15 及相关免疫因子的荧光定量PCR
        3.2.6 鹅TLR15的免疫组织化学检测
    3.3 结果
        3.3.1 鹅TLR15及免疫因子分析
        3.3.2 免疫因子表达图谱构建
        3.3.3 鹅TLR15的组织分布
    3.4 讨论
    3.5 结论
结论
参考文献
攻读硕士期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3178558