ALV-J致病机制的体外分子病理学研究
发布时间：2021-05-10 06:54
ALV-J主要引起鸡的骨髓细胞瘤（Myelocytoma）或骨髓白血病（Myeloid20Leukosis，ML）和多种细胞类型的恶性肿瘤。近年来我国蛋鸡群出现ALV-J感染病例的报道不断增加，在我国J亚群白血病已由最初只有肉用鸡感染发病，逐渐向商品蛋鸡和中国许多地方品种鸡蔓延，其宿主范围正在扩大，肿瘤表型也在不断变化。本研究选择早期分离自肉鸡髓样细胞瘤病例的NX0101株和近期分离自蛋鸡血管瘤病例的HN10PY01株J亚群禽白血病病毒，分别接种DF-1细胞、SPF蛋鸡CEF细胞及白羽肉鸡父母代CEF细胞，在感染后1、2、3、5、7天分别收集细胞和细胞上清。检测细胞上清ALV群特异性抗原p27的表达量、病毒TCID50，比较研究两毒株对不同来源的CEF细胞的易感性及在不同细胞上的复制能力；收集细胞用荧光定量法检测感染细胞的原癌基因（c-myc、c-myb）、抑癌基因（p53、p27、p16）和凋亡基因（Bcl-2）以及细胞热应激蛋白HSP70和HSP60基因的mRNA表达量；并用ELISA方法检测细胞上清中热应激蛋白HSP70和HSP60的表达量；通过凋亡试剂盒检测感染细胞的凋亡状况，...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 病毒的分类
1.2 J 亚群禽白血病的病原学与分子病毒学
1.3 ALV-J 的致病性和致瘤机理
1.4 肿瘤相关基因
1.4.1 癌基因
1.4.2 抑癌基因
1.4.3 凋亡基因 Bcl-2
1.5 热应激蛋白
1.6 本研究的目的意义
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 病毒
2.1.2 主要材料
2.1.3 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 病毒的增殖
2.2.2 病毒的定量
2.2.3 前病毒基因组 DNA 提取
2.2.4 特异性 PCR 检测
2.3 不同来源的 ALV-J 体外细胞感染实验
2.3.1 实验设计
2.3.2 鸡胚成纤维细胞制作
2.3.3 肉鸡 CEF 外源性禽白血病病毒鉴定
2.3.4 细胞铺板及病毒接种
2.3.5 收集细胞及细胞上清
2.3.6 ALV 特异性抗体 p27 的检测
2.3.7 肿瘤相关基因检测
2.3.8 ELISA 法检测热应激蛋白 HSP60、HSP70 的含量
2.3.9 TUNEL 试剂盒检测细胞凋亡数量差异
3 结果
3.1 病毒定量
3.2 特异性 PCR 检测
3.3 肉鸡 CEF 外源性禽白血病病毒鉴定结果
3.4 复制能力比较检测结果
3.4.1 ALV 群特异性抗体的检测
3.4.2 毒力检测
3.5 肿瘤相关基因检测结果
3.5.1 Real-time PCR 标准曲线的建立
3.5.2 利用 Real-time PCR 检测 ALV-J 感染靶细胞肿瘤相关基因表达
3.6 ELISA 法检测热应激蛋白 HSP70、HSP60 的含量
3.6.1 HSP70 ELISA 检测结果
3.6.2 HSP60 ELISA 检测结果
3.7 凋亡试剂盒检测结果
4 讨论
4.1 复制能力比较
4.2 肿瘤相关基因检测
4.3 热应激蛋白检测
4.4 细胞凋亡数量检测
5 结论
6 参考文献
致谢
硕士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]HSP60和p53在胃癌中的表达及意义[J]. 李桂青. 临床消化病杂志. 2014(01)
[2]蛋鸡J亚群禽白血病病毒SD1009分离株的分离鉴定及全基因组序列分析[J]. 王琦,王永强,康忠惠,高玉龙,潘伟,李久宽,秦立廷,祁小乐,高宏雷,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2011(08)
[3]热休克蛋白60与细胞凋亡[J]. 曹智,马骏,袁文俊,林丽. 生理科学进展. 2008(03)
[4]Two20distinct20pathways20of20p1620gene20inactivation20in20gallbladder20cancer[J]. Hiroyuki Tadokoro,Takako Shigihara,Tomomi Ikeda,Masaru Takase,Masafumi Suyama. World Journal of Gastroenterology. 2007(47)
[5]禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[J]. 杨玉莹,叶建强,赵振华,秦爱建,顾玉芳. 中国病毒学. 2003(05)
[6]HSP60和CD44V6在胃腺癌中的表达及其意义[J]. 陈志芬,邓长生,夏冰,朱尤庆,曾俊,龚玲玲. 世界华人消化杂志. 2001(09)
博士论文
[1]蛋鸡ALV-J的分离鉴定及分子致瘤机制的研究[D]. 曲悦.山东农业大学 2012
[2]禽白血病病毒J亚群（ALV-J）内蒙株的建立及致瘤机理的研究[D]. 成子强.内蒙古农业大学 2002
本文编号：3178904
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 病毒的分类
1.2 J 亚群禽白血病的病原学与分子病毒学
1.3 ALV-J 的致病性和致瘤机理
1.4 肿瘤相关基因
1.4.1 癌基因
1.4.2 抑癌基因
1.4.3 凋亡基因 Bcl-2
1.5 热应激蛋白
1.6 本研究的目的意义
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 病毒
2.1.2 主要材料
2.1.3 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 病毒的增殖
2.2.2 病毒的定量
2.2.3 前病毒基因组 DNA 提取
2.2.4 特异性 PCR 检测
2.3 不同来源的 ALV-J 体外细胞感染实验
2.3.1 实验设计
2.3.2 鸡胚成纤维细胞制作
2.3.3 肉鸡 CEF 外源性禽白血病病毒鉴定
2.3.4 细胞铺板及病毒接种
2.3.5 收集细胞及细胞上清
2.3.6 ALV 特异性抗体 p27 的检测
2.3.7 肿瘤相关基因检测
2.3.8 ELISA 法检测热应激蛋白 HSP60、HSP70 的含量
2.3.9 TUNEL 试剂盒检测细胞凋亡数量差异
3 结果
3.1 病毒定量
3.2 特异性 PCR 检测
3.3 肉鸡 CEF 外源性禽白血病病毒鉴定结果
3.4 复制能力比较检测结果
3.4.1 ALV 群特异性抗体的检测
3.4.2 毒力检测
3.5 肿瘤相关基因检测结果
3.5.1 Real-time PCR 标准曲线的建立
3.5.2 利用 Real-time PCR 检测 ALV-J 感染靶细胞肿瘤相关基因表达
3.6 ELISA 法检测热应激蛋白 HSP70、HSP60 的含量
3.6.1 HSP70 ELISA 检测结果
3.6.2 HSP60 ELISA 检测结果
3.7 凋亡试剂盒检测结果
4 讨论
4.1 复制能力比较
4.2 肿瘤相关基因检测
4.3 热应激蛋白检测
4.4 细胞凋亡数量检测
5 结论
6 参考文献
致谢
硕士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]HSP60和p53在胃癌中的表达及意义[J]. 李桂青. 临床消化病杂志. 2014(01)
[2]蛋鸡J亚群禽白血病病毒SD1009分离株的分离鉴定及全基因组序列分析[J]. 王琦,王永强,康忠惠,高玉龙,潘伟,李久宽,秦立廷,祁小乐,高宏雷,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2011(08)
[3]热休克蛋白60与细胞凋亡[J]. 曹智,马骏,袁文俊,林丽. 生理科学进展. 2008(03)
[4]Two20distinct20pathways20of20p1620gene20inactivation20in20gallbladder20cancer[J]. Hiroyuki Tadokoro,Takako Shigihara,Tomomi Ikeda,Masaru Takase,Masafumi Suyama. World Journal of Gastroenterology. 2007(47)
[5]禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[J]. 杨玉莹,叶建强,赵振华,秦爱建,顾玉芳. 中国病毒学. 2003(05)
[6]HSP60和CD44V6在胃腺癌中的表达及其意义[J]. 陈志芬,邓长生,夏冰,朱尤庆,曾俊,龚玲玲. 世界华人消化杂志. 2001(09)
博士论文
[1]蛋鸡ALV-J的分离鉴定及分子致瘤机制的研究[D]. 曲悦.山东农业大学 2012
[2]禽白血病病毒J亚群（ALV-J）内蒙株的建立及致瘤机理的研究[D]. 成子强.内蒙古农业大学 2002
本文编号：3178904
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