貉源犬瘟热病毒分离鉴定及其H、F基因序列分析

发布时间：2021-05-12 07:05

　　犬瘟热（CD）是由犬瘟热病毒（CDV）引起的一种高度接触性、致死性传染病。我国于1980年从病犬体内首次分离到犬瘟热病毒。目前，随着我国养殖业的快速发展，犬瘟热病已成为危害毛皮经济动物最大的传染病之一。然而近年来，其他科属包括大熊猫、小熊猫、猕猴等多种动物均出现感染犬瘟热病毒的报道，可见犬瘟热病毒的感染呈现不断扩大的趋势，由于该病的高传染性和高致死性，所以对该病的早期预防和早期诊断就显得尤为重要。本研究从哈尔滨一水貂养殖场，采集5只疑似犬瘟热病死貉子的肝、肺、脾、肠等脏器，利用Vero细胞成功分离一株病毒，通过免疫荧光，RT-PCR等方法鉴定为CDV，命名为CDV-HLJ（11）。通过理化特性鉴定分离毒CDV-HLJ（11）对酸、热、乙醚等环境因素敏感，动物回归实验用分离到的CDV-HLJ（11）株第三代细胞毒对貉（狐狸）攻毒显示对貉与狐狸均有明显的致病性。采用RT-PCR方法对分离到病毒的H、F基因进行扩增并测序，并分别与GenBank上已发表的毒株序列进行比对。结果显示，分离株CDV-HLJ（11）的H基因序列与野毒株HeB（07）1、SD（09）3、SD（07）1同源性最高，分别... 

【文章来源】：江苏科技大学江苏省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
目录
Contents
第1章 绪论
    1.1 CDV 生物学特点
        1.1.1 病原结构特点
        1.1.2 核酸组成及特点
        1.1.3 CDV 的分离培养
    1.2 流行病学特点
    1.3 CDV 致病机理
    1.4 病理变化
    1.5 犬瘟热诊断
        1.5.1 病原学方法
        1.5.2 免疫学方法
        1.5.3 单克隆抗体
        1.5.4 胶体金技术
        1.5.5 分子生物学方法
    1.6 犬瘟热基因工程疫苗研究进展
        1.6.1 基因疫苗
        1.6.2 基因工程亚单位疫苗
    1.7 CDV 相关蛋白及基因研究进展
        1.7.1 核衣壳(N)蛋白及其基因
        1.7.2 融合(F)蛋白及其基因
        1.7.3 附着或血凝(H)蛋白及基因
    1.8 研究目的及意义
第2章 貉源犬瘟热病毒的分离鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 病料
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 细胞
        2.1.4 主要试剂和仪器
        2.1.5 常用溶液和试剂的配置及处理
    2.2 方法
        2.2.1 病毒分离
        2.2.2 理化特性鉴定
        2.2.3 RT-PCR 鉴定
        2.2.4 免疫荧光试验
        2.2.5 动物回归试验
    2.3 结果
        2.3.1 病毒分离结果
        2.3.2 理化特性
        2.3.3 RT-PCR 检测
        2.3.4 免疫荧光检测
        2.3.5 动物回归实验
    2.4 讨论
第3章 H、F 基因的克隆及序列分析
    3.1 材料
        3.1.1 主要试剂
        3.1.2 试剂的配置
        3.1.3 仪器
        3.1.4 克隆载体和受体菌
        3.1.5 病毒毒株
    3.2 方法
        3.2.1 引物设计
        3.2.2 病毒基因组 RNA 的提取
        3.2.3 RT-PCR
        3.2.4 凝胶电泳
        3.2.5 PCR 产物的回收纯化
        3.2.6 目的基因与 T 载体的连接
        3.2.7 转化
        3.2.8 H、F基因序列测定及分析
    3.3 结果
        3.3.1 H 基因 RT-PCR
        3.3.2 F 基因 RT-PCR
        3.3.3 H 基因序列分析
        3.3.4 F 基因序列分析
    3.4 讨论
结论
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表论文
致谢



本文编号：3182971