T-2毒素影响K562细胞向红系细胞分化的分子机理研究

发布时间：2021-05-16 18:06

　　T-2毒素是由镰刀菌产生的毒性最强的A族单端孢霉烯族毒素,是全球粮谷类最常见的污染性霉菌毒素。动物或人食入被该毒素污染的食物会导致食物中毒性白细胞缺乏症、单端孢霉烯族中毒症、大骨节病、人畜赤霉粮中毒症和克山病等多种疾病。临床上,中毒症状主要表现为拒食、腹泻、呕吐、贫血、免疫力下降、内脏器官的出血、骨髓组织的坏死、母畜不孕或流产甚至死亡。造血系统是T-2毒素的主要靶器官之一,它对造血系统的损伤作用以及对外周血样的毒性作用大于同类毒素。毒素进入机体后引起造血器官损伤,导致骨髓组织坏死,影响多能干细胞的功能,使多种血液成分的数量比例失衡,表现为：骨髓和脾脏红髓细胞损伤、骨髓发育不全、血液系统内造血细胞数目显著减少、红细胞计数和容积下降、贫血以及红细胞溶血等症状。正常动物体内的红细胞是由多能干细胞向红系细胞分化而来的,因此,为了阐释T-2毒素引起造血系统损伤的作用机理,研究T-2毒素影响造血干细胞分化的分子作用机理是非常必要的。然而,前人对多能干细胞向红系细胞的分化进行研究,仅得到了参与分化过程的部分基因家族和信号通路,并未对红系分化的分子机理进行系统研究,且毒素影响多能干细胞向红系细胞分化过... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：123 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1. 前言
    1.1 立题依据
    1.2 T-2毒素造血系统的毒素研究进展
    1.3 K562细胞向红系分化的研究进展
    1.4 筛选所得差异表达基因(蛋白)功能的研究进展
    1.5 研究目标和内容
2 材料方法
    2.1 细胞株
    2.2 主要试剂
    2.3 主要仪器
    2.4 主要试剂的配制
    2.5 差异基因和差异蛋白的筛选
    2.6 细胞培养及冻存
    2.7 实时荧光定量PCR检测相关基因mRNA的表达
        2.7.1 细胞处理及实验分组
        2.7.2 总RNA的提取
        2.7.3 总RNA纯度及完整性的检测
        2.7.4 逆转录反应
        2.7.5 实时荧光定量PCR检测目的基因mRNA表达水平
        2.7.6 荧光定量数据分析
    2.8 Western blot方法测定相关蛋白磷酸化水平
        2.8.1 细胞处理及实验分组
        2.8.2 总蛋白的提取
        2.8.3 蛋白浓度测定
        2.8.4 SDS-PAGE电泳
        2.8.5 Western印迹杂交
    2.9 RNA干扰技术检测MS4A3在红系分化中的作用
        2.9.1 细胞处理及实验分组
        2.9.2 RNA干扰实验
    2.10 细胞红系分化检测
        2.10.1 流式细胞仪检测红系分化的可行性
        2.10.2 T-2毒素及信号通路抑制剂对K562细胞向红系细胞分化的影响
        2.10.3 MS4A3基因对红系分化的影响
    2.11 统计学分析
3. 结果
    3.1 红系分化潜在的功能基因和蛋白
    3.2 K562细胞培养
    3.3 引物设计及检测
        3.3.1 引物设计
        3.3.2 RNA质量鉴定
        3.3.3 引物可靠性检测
    3.4 差异基因(蛋白)在T-2毒素影响K562细胞向红系分化中的作用
        3.4.1 T-2毒素和信号通路抑制剂对K562细胞向红系分化的影响
        3.4.2 T-2毒素影响差异基因mRNA表达水平的时效关系
        3.4.3 差异基因(蛋白)与信号转导通路间的关系
    3.5 MS4A3在红系分化中的作用
        3.5.1 siRNA干扰效率与剂量
        3.5.2 MS4A3与K562细胞向红系分化的关系
        3.5.3 信号通路对MS4A3基因的调控作用
        3.5.4 MS4A3基因与其他差异表达基因(蛋白)间的关系
4. 讨论
    4.1 红系分化检测方法的确定
    4.2 红系分化相关的基因和蛋白的选择
    4.3 T-2毒素抑制K562细胞分化的途径
    4.4 MS4A3是T-2毒素调控红系分化的关键基因
    4.5 红系分化相关的潜在分子机理
5. 结论
6 文献综述：单端孢霉烯族毒素的毒性作用机理研究进展
    6.1 引言
    6.2 单端孢霉烯族毒素的特性
        6.2.1 T-2毒素的特性
        6.2.2 雪腐镰刀菌烯醇的特性
        6.2.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)的特性
    6.3 单端孢霉烯族毒素的毒性
        6.3.1 急性毒性
        6.3.2 血液系统毒性
        6.3.3 免疫系统毒性
        6.3.4 细胞毒性
        6.3.5 神经毒性
        6.3.6 遗传毒性
        6.3.7 致癌、致畸、致突变作用
    6.4 单端孢霉烯族毒素毒性作用的分子机制
        6.4.1 单端孢霉烯族毒素诱导细胞凋亡的分子机制
        6.4.2 单端孢霉烯族毒素影响细胞增殖的分子机理
        6.4.3 单端孢霉烯族毒素对mRNA翻译的抑制作用
        6.4.4 单端孢霉烯族毒素对MAPKs信号通路的影响
    6.5 结论与展望
参考文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
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[2]MicroRNA-144调控红系分化[J]. 汪晓艳,蒋崇亮,朱勇,王芳,余佳,冯涛.  基础医学与临床. 2011(06)
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[9]K562细胞模拟骨髓造血多能干细胞的实验应用[J]. 张祖珣,李爱华,曾小澜,李俊娥.  中国生化药物杂志. 2000(01)
[10]食管癌高发区粮食中镰刀菌毒素的含量及其致突变作用[J]. 张帆,吴志远,吴健丽,夏求洁.  中华预防医学杂志. 2000(01)

硕士论文
[1]T-2毒素影响K562细胞向红系细胞分化相关的基因组和蛋白组研究[D]. 李婷婷.华中农业大学 2012
[2]T-2毒素的细胞毒性研究[D]. 王敏辉.安徽农业大学 2011
[3]Hermap基因对红细胞分化发育过程中细胞信号转导通路的作用的研究[D]. 高赛君.广州医学院 2010



本文编号：3190152