4株欧亚类禽H1N1亚型猪流感病毒生物学特性研究

发布时间：2017-04-21 09:01

  本文关键词：4株欧亚类禽H1N1亚型猪流感病毒生物学特性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：猪是A型流感病毒(Influenza A virus,IAV)的重要中间宿主和“混合器”,不同亚型及不同来源的流感病毒可在猪体内频繁重组,不断产生新的流行病毒株。自20世纪至今,全球发生了4次人流感大流行,每次流感大流行都与猪流感病毒(Swine influenza viruses,SIVs)密切相关。近年来,我国SIVs流行亚型众多且易变异,其中欧亚类禽H1N1(Eurasian avian-like H1N1,EA H1N1)SIVs自1979年被报道以来,已在我国猪群中广泛流行并建立了稳定的遗传谱系,而且发生了多起感染人的事件,严重危害人类和动物的健康。迄今为止,研究较多的是EA H1N1 SIVs在猪群中的流行情况,然而有关EA H1N1 SIVs的生物学特性鲜有报道。因此,研究EA H1N1 SIVs的生物学特性显得格外重要。自2010年8月至2013年3月,本实验室对全国范围内的SIVs进行了系统性地监测,结果从全国24个省份分离并鉴定出139株EA H1N1 SIVs。为了评价EA H1N1 SIVs的致病性、受体结合特性和在哺乳动物间的传播能力等生物学特性,本研究首先利用哺乳动物模型BALB/c小鼠,评价了3株代表性EA H1N1SIVs和一株早期分离株在BALB/c小鼠体内的复制能力及致病性。结果显示:4株EA H1N1 SIVs均对小鼠呈低致病力并且均可在小鼠呼吸道进行复制。随后选取小鼠试验中的2株EA H1N1 SIVs,通过固相结合试验检测其受体结合特性并分析其氨基酸位点差异。结果显示:2株病毒均以结合SAα-2,6Gal受体为主,共有33个氨基酸位点差异。受体结合特性试验表明这2株病毒已经具备了在哺乳动物间发生传播的先决条件,进而利用哺乳动物模型雪貂,评估了其在雪貂间的呼吸道飞沫传播能力。结果表明这2株病毒均能在雪貂间发生传播,更重要的是A/swine/Guangxi/18/2011(H1N1)(简称GX/18)能在雪貂间发生3传3的高效呼吸道飞沫传播。本研究结果对我们深入了解EA H1N1 SIVs的生物学特性具有重要的意义,同时本研究也表明EA H1N1 SIVs存在人际间传播的可能性,能给人类健康造成严重威胁,为进一步研究EA H1N1 SIVs在哺乳动物间呼吸道飞沫传播的分子机制奠定基础,也为EA H1N1 SIVs的监测与防控提供了一个新的实验依据。
【关键词】：欧亚类禽H1N1 猪流感病毒 致病性 受体 传播
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 摘要2-3
• Summary3-5
• 缩略语表5-8
• 第一章 文献综述8-21
• 1.1 A型流感病毒概述8-9
• 1.2 猪流感病毒在中国的流行概况9-11
• 1.3 欧亚类禽H1N1猪流感病毒概述11-12
• 1.4 猪流感或禽流感病毒零星感染人的情况12-13
• 1.5 研究流感病毒常用实验动物模型13-16
• 1.5.1 流感病毒感染模型 小鼠13
• 1.5.2 流感病毒传播模型 豚鼠13-14
• 1.5.3 流感病毒传播模型 雪貂14-15
• 1.5.4 非人灵长类动物15-16
• 1.6 影响A型流感病毒传播的分子机制16-19
• 1.6.1 受体结合特性与A型流感病毒传播的关系16-17
• 1.6.2 HA糖基化与A型流感病毒传播的关系17
• 1.6.3 HA稳定性与A型流感病毒传播的关系17-18
• 1.6.4 NA与A型流感病毒传播的关系18-19
• 1.6.5 PB2与A型流感病毒传播的关系19
• 1.7 本研究的目的与意义19-21
• 第二章 EA H1N1亚型猪流感病毒对BALB/c小鼠的致病性研究21-26
• 2.1 材料与方法21-22
• 2.1.1 病毒株21
• 2.1.2 实验动物和鸡胚21
• 2.1.3 鸡胚半数感染量（EID50）的测定21
• 2.1.4 病毒对BALB/c小鼠的致病性试验21-22
• 2.1.5 BALB/c小鼠脏器中的病毒滴定22
• 2.2 结果22-24
• 2.2.1 鸡胚半数感染量（EID50）的测定结果22
• 2.2.2 病毒在BALB/c小鼠体内的复制情况22-23
• 2.2.3 BALB/c小鼠体重变化情况23-24
• 2.3 讨论24-26
• 第三章 EA H1N1亚型猪流感病毒氨基酸差异和受体结合特性分析26-33
• 3.1 材料与方法26-29
• 3.1.1 病毒株及鸡胚26
• 3.1.2 实验试剂26
• 3.1.3 病毒的扩增及纯化26-27
• 3.1.4 扩增病毒的序列鉴定27-28
• 3.1.5 病毒株氨基酸位点差异分析28
• 3.1.6 病毒株受体结合特性检测方法28-29
• 3.2 结果29-31
• 3.2.1 扩增病毒的序列鉴定结果29
• 3.2.2 病毒株氨基酸位点差异结果29-30
• 3.2.3 病毒株受体结合特性检测结果30-31
• 3.3 讨论31-33
• 第四章 EA H1N1亚型猪流感病毒在哺乳动物雪貂体内的复制和传播能力评估33-42
• 4.1 材料与方法33-35
• 4.1.1 病毒株33
• 4.1.2 实验动物33
• 4.1.3 实验试剂和鸡红细胞33
• 4.1.4 雪貂间呼吸道飞沫传播试验33-34
• 4.1.5 病毒在雪貂体内的复制试验34-35
• 4.1.6 雪貂鼻洗液与脏器中病毒滴定35
• 4.1.7 雪貂血清抗体的检测试验35
• 4.2 结果35-39
• 4.2.1 雪貂间呼吸道飞沫传播试验结果35-37
• 4.2.2 雪貂体温、体重变化及血清抗体检测结果37-38
• 4.2.3 病毒在雪貂体内的复制结果38-39
• 4.3 讨论39-42
• 全文结论42-43
• 参考文献43-50
• 致谢50-51
• 作者简介51-52
• 导师简介52-53

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