鸭胚早期性别鉴定及性别决定候选基因表达的研究
发布时间：2021-06-06 03:41
在养鸭业中,鸭雌雄个体间因生理、行为等特性的不同导致在生产性能、饲养管理与经济用途及价值等方面存在巨大差异。在胚胎早期进行性别鉴定或者通过性别控制,提前预知甚至决定动物性别,这将会为养鸭业带来一次巨大的飞跃。本实验以凤头鸭胚为研究对象,通过比较与优化鸭胚胎期全血和尿囊液直接PCR性别鉴定方法,旨在获得一种方便、快捷、无损的早期鸭胚性别鉴定的方法。同时,通过在鸭胚中注射芳香化酶抑制剂（AI）和17β-雌二醇（E2）,在性别分化关键时期观察其性腺组织学和形态学变化,成功建立鸭胚性反转模型;采用RT-qPCR方法分析AI和E2诱导的性反转鸭胚中DMRT1、SOX9、AMH、P450arom、FOXL2、SF-1等6个性别决定候选基因在性腺分化发育过程中的表达,探讨鸭性别决定相关基因的作用机制。进一步通过构建SOX9和FOXL2的干扰和过表达载体,检测性别决定关键基因的表达水平变化,为探明SOX9和FOXL2基因在鸭性别分化中功能提供理论依据。主要研究结果如下:1.以鸭胚全血为模板,用常规PCR反应缓冲液和Taq DNA聚合酶直接进行PCR扩增,成功鉴定鸭胚性别,该方法同样适用于雏鸭及成年鸭血...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１尿囊液采样点??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]禽胚性别鉴定方法的研究进展[J]. 叶子巧婧,杨雅茹,张宁宁,龙博文,杜晓惠. 黑龙江畜牧兽医. 2014(19)
[2]中国地方家鸭ZW性染色体上CHD1基因序列差异的检测新方法[J]. 胡艳,徐文娟,宋迟,宋卫涛,单艳菊,陈文峰,李慧芳. 畜牧兽医学报. 2013(05)
[3]ER及其相关基因在鸡性反转胚胎中的表达[J]. 刘贤侠,冯欣璐,赵宗胜,李大全. 中国农学通报. 2013(14)
[4]微量全血PCR技术鉴定雏鸡及鸡胚性别[J]. 李治利,秦清明,施振旦,陈海南,黄群山. 中国畜牧兽医. 2012(09)
[5]Sox9基因参与动物性别决定与分化的分子机制[J]. 陈维,王昌留. 鲁东大学学报(自然科学版). 2012(02)
[6]FOXL2与脊椎动物性别决定研究进展[J]. 鲁毅,李任峰,徐萍,李学斌,刘卫,王三虎. 河南农业科学. 2012(01)
[7]Formestane和17-βestradiol诱导鸡、鹌鹑胚胎性反转的研究[J]. 冯欣璐,姚守秀,米拉,姚秀娟,赵宗胜. 石河子大学学报(自然科学版). 2010(05)
[8]家鸡CHD1基因PCR快速性别鉴定方法的建立及其在早期鸡胚中的应用[J]. 王嘉力,贾存灵,苏利红,魏泽辉. 家禽科学. 2009(12)
[9]RNA干扰技术及其应用[J]. 任小青. 天津农学院学报. 2009(01)
[10]芳香化酶于各组织脏器中的生物学表达及调节[J]. 续哲莉,张西臣,邱丽贞,王可人. 内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2008(03)
博士论文
[1]SF-1是尼罗罗非鱼性类固醇激素生成、性腺发育以及性别分化所必需的关键因子[D]. 谢庆平.西南大学 2016
硕士论文
[1]番鸭性别控制及其性腺分化时期的研究[D]. 翁晖.福建农林大学 2013
[2]己烯雌酚对性反转鸡性别决定相关基因及学习记忆的影响[D]. 房丽秀.苏州大学 2009
[3]芳香化酶抑制剂Formestane和Letrozole诱导番鸭性别分化的研究[D]. 顾月琴.南京农业大学 2006
本文编号：3213526
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１尿囊液采样点??
ＤＮＡ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?３?ｔｏ?８：?ｔｈｅ?ｗｈｏｌｅ?ｂｌｏｏｄ?ｄｏｓａｇｅ?ｉｓ?０．２？?０．５，?１．０，?２．０，?３．０?ｒｅｓｐｓｔｉｖｅｌｙ．?４．０?ｊｉｌ??Ｔａｑ?ＤＮＡ聚合酶用量：结果在０．１？１．５ｐｌＴａｑ?ＤＮＡ聚合酶范围内都能扩增出很好的目的??条带（图２－３），说明只需Ｏ．ｌｐｌＴａｑＤＮＡ聚合酶就可以扩增出符合检测要求的目的条带。??１２?３?４?５?６?７?８?Ｍ?ｂＰ?１?２?３?４?５?６?７?８?Ｍ??■?ｒ?－?ｌ：Ｊｌ??４〇〇?ｉ??ｍ〇?＾?二：＾??Ａ?Ｂ??图２－３?Ｔａｑ?ＤＮＡ聚合酶用量悌度扩增结果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｔａｑ?ＤＮＡ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??注：①Ａ为公鸭，Ｂ为母鸭；②Ｍ：?ＤＬｌＯＯＯＤＮＡＭａｒｋｅｒ，卜２?：?１、２均为提ＤＮＡ阳性对照，??３？８?：?Ｔａｑ?ＤＮＡ?聚合酶用量梯度?０．１、０．３、０．６、０．９、１．２?和?１．５Ｗ??Ｎｏｔｅ：?？Ａ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｍａｌｅ?ｄｕｃｋ，?Ｂ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｆｅｍａｌｅ?ｄｕｃｋ；?？Ｍ：ＤＬ１０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１－２：１?ａｎｄ?２?ａｒｅ?ｎｅｇａｔｉｖｅ??ＤＮＡ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?３－８：?Ｔａｑ?ＤＴｓＩＡ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ｉｓ?０．１?？?０．３，?０．６．?０．９．?１．２?ａｎｄ?１．５?［ｉ＼??反应程序：结果在３０？４０个循环范围内都可扩增出清晰可辨的目的条带
Ａ?Ｂ??图２－２公鸭、母鸭全血ＰＣＲ反应体系模板含量梯度扩增结果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｇｒａｄｉｅｎｔ?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?Ａｓｓａｙ?ｆｏｒ?ｍａｌｅ?ａｎｄ?ｆｅｍａｌｅ?Ｄｕｃｋｓ??注：①Ａ为公鸭，Ｂ为母鸭；②Ｍ：?ＤＬｌＯＯＯＤＮＡＭａｒｋｅｒ，?１？２?：?１、２均为提ＤＮＡ阳性对照，??３？８?：全血用量分别为０．２、０．５、１．０、２．０、３．０、?４．０…??Ｎｏｔｅ：?？Ａ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｍａｌｅ?ｄｕｃｋ，?Ｂ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｆｅｍａｌｅ?ｄｕｃｋ；?？Ｍ：?ＤＬ１０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１?ｔｏ?２：?１?ａｎｄ?２?ａｒｅ?ｔｈｅ??ＤＮＡ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?３?ｔｏ?８：?ｔｈｅ?ｗｈｏｌｅ?ｂｌｏｏｄ?ｄｏｓａｇｅ?ｉｓ?０．２？?０．５，?１．０，?２．０，?３．０?ｒｅｓｐｓｔｉｖｅｌｙ．?４．０?ｊｉｌ??Ｔａｑ?ＤＮＡ聚合酶用量：结果在０．１？１．５ｐｌＴａｑ?ＤＮＡ聚合酶范围内都能扩增出很好的目的??条带（图２－３），说明只需Ｏ．ｌｐｌＴａｑＤＮＡ聚合酶就可以扩增出符合检测要求的目的条带。??１２?３?４?５?６?７?８?Ｍ?ｂＰ?１?２?３?４?５?６?７?８?Ｍ??■?ｒ?－?ｌ：Ｊｌ??４〇〇?ｉ??ｍ〇?＾?二：＾??Ａ?Ｂ??图２－３?Ｔａｑ?ＤＮＡ聚合酶用量悌度扩增结果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｔａｑ?ＤＮＡ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??注：①Ａ为公鸭
【参考文献】：
期刊论文
[1]禽胚性别鉴定方法的研究进展[J]. 叶子巧婧,杨雅茹,张宁宁,龙博文,杜晓惠. 黑龙江畜牧兽医. 2014(19)
[2]中国地方家鸭ZW性染色体上CHD1基因序列差异的检测新方法[J]. 胡艳,徐文娟,宋迟,宋卫涛,单艳菊,陈文峰,李慧芳. 畜牧兽医学报. 2013(05)
[3]ER及其相关基因在鸡性反转胚胎中的表达[J]. 刘贤侠,冯欣璐,赵宗胜,李大全. 中国农学通报. 2013(14)
[4]微量全血PCR技术鉴定雏鸡及鸡胚性别[J]. 李治利,秦清明,施振旦,陈海南,黄群山. 中国畜牧兽医. 2012(09)
[5]Sox9基因参与动物性别决定与分化的分子机制[J]. 陈维,王昌留. 鲁东大学学报(自然科学版). 2012(02)
[6]FOXL2与脊椎动物性别决定研究进展[J]. 鲁毅,李任峰,徐萍,李学斌,刘卫,王三虎. 河南农业科学. 2012(01)
[7]Formestane和17-βestradiol诱导鸡、鹌鹑胚胎性反转的研究[J]. 冯欣璐,姚守秀,米拉,姚秀娟,赵宗胜. 石河子大学学报(自然科学版). 2010(05)
[8]家鸡CHD1基因PCR快速性别鉴定方法的建立及其在早期鸡胚中的应用[J]. 王嘉力,贾存灵,苏利红,魏泽辉. 家禽科学. 2009(12)
[9]RNA干扰技术及其应用[J]. 任小青. 天津农学院学报. 2009(01)
[10]芳香化酶于各组织脏器中的生物学表达及调节[J]. 续哲莉,张西臣,邱丽贞,王可人. 内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2008(03)
博士论文
[1]SF-1是尼罗罗非鱼性类固醇激素生成、性腺发育以及性别分化所必需的关键因子[D]. 谢庆平.西南大学 2016
硕士论文
[1]番鸭性别控制及其性腺分化时期的研究[D]. 翁晖.福建农林大学 2013
[2]己烯雌酚对性反转鸡性别决定相关基因及学习记忆的影响[D]. 房丽秀.苏州大学 2009
[3]芳香化酶抑制剂Formestane和Letrozole诱导番鸭性别分化的研究[D]. 顾月琴.南京农业大学 2006
本文编号：3213526
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