A型鸭肝炎病毒反向遗传操作系统的构建及初步应用

发布时间：2021-06-09 04:46

　　[目的]A型鸭病毒肝炎给我国养禽业带来了较大的威胁,深入研究该病病原及相关致病机理对于防控该病的流行具有重要意义。反向遗传学操作系统是研究RNA病毒,包括A型鸭肝炎病毒（Duck Hepatitis A Virus, DHAV）分子生物学的良好技术平台。本论文即分别构建了DHAV的微基因组和复制子两种反向遗传操作系统,并利用这一技术平台,初步分析和研究了DHAV基因组非编码区的生物学功能。[方法]（1）根据DHAV ZJ-V株基因组序列（GenBank No.EF382778）,通过萤火虫荧光素酶报告基因（fLuc）替换DHAV的ORF,保留其5’UTR和3’UTR。同时,在5’UTR上游插入海肾荧光素酶报告基因（RLuc）作为内参基因。成功构建了含有双报告基因的DHAV微基因组（pRluc-fLuc）。将pRluc-fLuc转染DF-1细胞,分别用RT-PCR、Western Blot方法结合荧光素酶活性测定,评价微基因组的有效性。同时,用RNA Draw软件分析DHAV非编码区（Untranslated Region）的二级结构,并在此基础上,分别构建了缺失5’UTR、3’UTR、... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

雏鸭感染DHAV后临床病理变化

基因组基本结构示意图如图所示。IRFS P1 P2 P3< >< ~ ——?二-广.wjvw 丨 VP3 I VP1 丨 M |2B| 2C ~拆 | ^ I ^Polyprotein

的复制模式，二者之间的差别在于采用哪种引物启动负链RNA的合成。第一种模式是以病毒Vpg蛋白作为复制起始的引物；第二种是以反转发夹环作为复制起始的引物(图4)。4


本文编号：3219960