基于SGLT1介导的p-38MAPK/AKt2信号通路探讨TGEV感染对NHE3易位的影响与机制
发布时间：2021-06-09 15:31
猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床症状的高度接触性肠道传染病,主要感染2周龄内的仔猪,其致死率可达100%,是世界各养猪国家仔猪早期死亡和生长发育迟缓的重要疫病。近年来,TGE的流行进一步加剧,给养猪业造成了严重的经济损失。虽然有疫苗用于预防,但由于对病毒的致病机理尚未阐明,一直没能从根本上控制该病。猪传染性胃肠炎病毒主要经消化道感染小肠,在小肠上皮细胞内大量复制,可破坏上皮细胞钠离子转运功能,导致肠道渗透压升高,引起腹泻。已知膜转运蛋白NHE3（Na+/H+exchanger 3）主要介导肠细胞Na+/H+交换,并且与腹泻的发生发展密切相关。生理状态下,Na+-葡萄糖转运体SGLT1介导的NHE3易位可参与调控NHE3的活性,但在TGEV感染条件下,能否通过改变NHE3的易位,进而影响...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小肠营养物质吸收模式图（引自Gurneyetal.2016）
研究内容TGEV 感染猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）对 NHE3 易位和活性的影响；TGEV 感染 IPEC-J2，不同时间点采样，利用 pH 荧光探针 BCECF-AM 检测 N换活性；Western-blot 和 RT-qPCR 分别检测 NHE3 和 SGLT1 的总蛋白表达量变RNA 水平；通过生物素化标记膜蛋白检测细胞膜上 NHE3 的蛋白表达量变化。生理情况下，SGLT1 介导的 p38MAPK/Akt2 调控 NHE3 易位的机制研究通过构建慢病毒干扰载体沉默 SGLT1 表达后，Western-blot 检测信号通路中KAPK-2 和 EZRIN 关键蛋白的磷酸化水平，生物素化法检测细胞膜上 NHE3 蛋量，火焰原子吸收法检测细胞内外 Na+的浓度变化；通过药物抑制剂 Phlorizin 下图 2-1. SGLT1 介导 p38MAPK/AKt2 调控 NHE3 易位的信号通路模拟图Fig 2-1. The pathway p38MAPK/AKt2 mediated by SGLT1 regulation NHE3 translocation
后检测 SGLT1 蛋白表达变化图 3-1 溶解曲线Fig 3-1 The melt curves图 3-2 TGEV 感染不同时间点 SGLT1 的基因相对表达量3-2 Relative quantity of SGLT1 mRNAat different time after TGE
【参考文献】：
期刊论文
[1]Ezrin蛋白生物学功能新进展[J]. 宫海叶,曾萧,刘莎莎,李红霞. 世界最新医学信息文摘. 2018(72)
[2]轮状病毒对NHE3蛋白水平及其生物活性的影响[J]. 王昕,范媛媛,王鹏,李玲,潘雪,范程程,孟雨姗,蒋莉莉. 广东医学. 2018(07)
[3]NHEs在腹泻中的研究进展[J]. 陈洪浪,宋丽军,赵淑敏,陈文锋,赵文昌. 广东医学. 2017(06)
[4]钠-葡萄糖共转运蛋白1和2的研究新进展[J]. 孙静媛,马丽娜,高凌. 世界华人消化杂志. 2016(25)
[5]猪主要腹泻病的发病机制综述[J]. 孙宏伟,王泽岩,任少敏,高发辉,高小鹏,何斌,区亮欣,罗胜军. 中国动物检疫. 2016(03)
[6]稳定表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的ST细胞株的构建及其亚细胞定位[J]. 何雷,贾艳艳,郁川,余祖华,丁轲,李静,程相朝,李银聚,张春杰,金修哲. 中国预防兽医学报. 2016(02)
[7]细胞内pH值测定方法的研究进展[J]. 张思佳,段小红,焦阳,周密. 现代生物医学进展. 2014(21)
[8]猪传染性胃肠炎病毒致病机制的研究进展[J]. 殷相平,任晓峰,柳纪省. 世界华人消化杂志. 2013(01)
[9]钠离子通道及其作用药物研究进展[J]. 周松,李世根,刘永刚,刘希琴. 医药导报. 2008(07)
[10]TGEV的sM、M和N基因克隆及特征分析[J]. 程杰,柳纪省,吴润,殷相平,李宝玉,兰喜,王辉. 畜牧兽医学报. 2005(07)
本文编号：3220840
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小肠营养物质吸收模式图（引自Gurneyetal.2016）
研究内容TGEV 感染猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）对 NHE3 易位和活性的影响；TGEV 感染 IPEC-J2，不同时间点采样，利用 pH 荧光探针 BCECF-AM 检测 N换活性；Western-blot 和 RT-qPCR 分别检测 NHE3 和 SGLT1 的总蛋白表达量变RNA 水平；通过生物素化标记膜蛋白检测细胞膜上 NHE3 的蛋白表达量变化。生理情况下，SGLT1 介导的 p38MAPK/Akt2 调控 NHE3 易位的机制研究通过构建慢病毒干扰载体沉默 SGLT1 表达后，Western-blot 检测信号通路中KAPK-2 和 EZRIN 关键蛋白的磷酸化水平，生物素化法检测细胞膜上 NHE3 蛋量，火焰原子吸收法检测细胞内外 Na+的浓度变化；通过药物抑制剂 Phlorizin 下图 2-1. SGLT1 介导 p38MAPK/AKt2 调控 NHE3 易位的信号通路模拟图Fig 2-1. The pathway p38MAPK/AKt2 mediated by SGLT1 regulation NHE3 translocation
后检测 SGLT1 蛋白表达变化图 3-1 溶解曲线Fig 3-1 The melt curves图 3-2 TGEV 感染不同时间点 SGLT1 的基因相对表达量3-2 Relative quantity of SGLT1 mRNAat different time after TGE
【参考文献】：
期刊论文
[1]Ezrin蛋白生物学功能新进展[J]. 宫海叶,曾萧,刘莎莎,李红霞. 世界最新医学信息文摘. 2018(72)
[2]轮状病毒对NHE3蛋白水平及其生物活性的影响[J]. 王昕,范媛媛,王鹏,李玲,潘雪,范程程,孟雨姗,蒋莉莉. 广东医学. 2018(07)
[3]NHEs在腹泻中的研究进展[J]. 陈洪浪,宋丽军,赵淑敏,陈文锋,赵文昌. 广东医学. 2017(06)
[4]钠-葡萄糖共转运蛋白1和2的研究新进展[J]. 孙静媛,马丽娜,高凌. 世界华人消化杂志. 2016(25)
[5]猪主要腹泻病的发病机制综述[J]. 孙宏伟,王泽岩,任少敏,高发辉,高小鹏,何斌,区亮欣,罗胜军. 中国动物检疫. 2016(03)
[6]稳定表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的ST细胞株的构建及其亚细胞定位[J]. 何雷,贾艳艳,郁川,余祖华,丁轲,李静,程相朝,李银聚,张春杰,金修哲. 中国预防兽医学报. 2016(02)
[7]细胞内pH值测定方法的研究进展[J]. 张思佳,段小红,焦阳,周密. 现代生物医学进展. 2014(21)
[8]猪传染性胃肠炎病毒致病机制的研究进展[J]. 殷相平,任晓峰,柳纪省. 世界华人消化杂志. 2013(01)
[9]钠离子通道及其作用药物研究进展[J]. 周松,李世根,刘永刚,刘希琴. 医药导报. 2008(07)
[10]TGEV的sM、M和N基因克隆及特征分析[J]. 程杰,柳纪省,吴润,殷相平,李宝玉,兰喜,王辉. 畜牧兽医学报. 2005(07)
本文编号：3220840
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