猪腹泻病双重RT-PCR检测方法建立与PED抗原灭活及免疫效果评价
发布时间：2021-06-22 14:37
猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的各个不同日龄阶段的猪均可发病的一类急性、高度接触性肠道传染病。以哺乳仔猪尤其是3-10日龄仔猪的腹泻、呕吐、脱水和高死亡率为主要临床特征。从1971年被发现至今已然发展成为严重影响养猪产业的重大病毒性传染病之一。因此,做好猪流行性腹泻病的防控工作至关重要。通过对吉林农业科技学院疫病检测中心近年来送检病料的研究分析表明,吉林地区引起猪腹泻并致死的病毒性疾病主要包括两种,即流行性腹泻（PED）和传染性胃肠炎（TGE）,且两种病多数存在交叉感染。因此,本试验在对PED的研究基础上,建立PEDV和TGEV双重RT-PCR检测方法进行研究分析。首先用胶体金试剂盒和常规RT-PCR方法筛选出PED单纯感染和PED、TGE双重感染的阳性病料;根据GeneBank公布的序列的对比分析,设计PEDV和TGEV的引物。目的基因长度分别为PEDV 223bp,TGEV 832bp。对建立的双重RT-PCR方法进行多次重复试验,最终摸索出反应的最佳条件...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
单重PCR最适引物浓度的确定（PEDV）
反应条件优化，PEDV 扩增条带在引物浓度为 0.85μM/终选择 0.85μM/L。M 1 2 3图 1-1 单重 PCR 最适引物浓度的确定（PEDV）ptimal primer concentrations of single P（DL2000DNA Maker）；1：1.0μM/L；2：0.8TGEV 扩增条带在引物浓度为 1μM/L 时 1μM/L。M 1 2 32
1-3 单重 PCR 最佳退火温度的确定（PEDV）imal annealing temperature of single PCR2000（DL2000DNA Maker）；1：53℃；2：54℃火温度在 54℃的条件下，PCR 扩增效率为 54℃。M 1 2 3 1-4 单项 PCR 最佳退火温度的确定（TGEV）imal annealing temperature of single PCR2000（DL2000DNA Maker）；1：53℃；2：54℃应条件优化832b
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪腹泻三联活疫苗席卷全国 应该如何进行科学免疫?[J]. 张金辉. 猪业科学. 2016(08)
[2]猪传染性胃肠炎的诊治[J]. 周兴忠,张金玉. 中国畜牧兽医文摘. 2016(03)
[3]猪传染性胃肠炎的综合防治[J]. 郭一学. 湖北畜牧兽医. 2016(02)
[4]我国研制成功猪腹泻三联活疫苗[J]. 吉林农业. 2015(08)
[5]猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 王黎,李碧,周远成,朱玲,徐志文,郭万柱. 中国兽医学报. 2015(02)
[6]猪流行性腹泻病毒荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J]. 于长青,林树伯,刘乐荣,王庆博,李继良. 北京农学院学报. 2015(03)
[7]猪流行性腹泻研究进展[J]. 李蕾,刘新文,殷颖珊. 南方农业. 2014(15)
[8]猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立[J]. 焦洋,姜焱,王凯民,张常印,雷治海,唐泰山. 动物医学进展. 2013(08)
[9]科学使用疫苗 防控仔猪腹泻[J]. 熊慎苏. 今日畜牧兽医. 2013(03)
[10]猪传染性胃肠炎病毒致病机制的研究进展[J]. 殷相平,任晓峰,柳纪省. 世界华人消化杂志. 2013(01)
硕士论文
[1]猪传染性胃肠炎流行毒株的分离鉴定及全基因组分析[D]. 朱蕴暖.黑龙江八一农垦大学 2017
[2]猪流行性腹泻病毒（PEDV）流行株的序列分析和抗原表位表达[D]. 程小娜.海南大学 2015
[3]仔猪流行性腹泻的诊断[D]. 林勇.四川农业大学 2013
[4]猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻快速诊断方法的建立及S基因的表达[D]. 刘邓.新疆农业大学 2009
本文编号：3243018
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
单重PCR最适引物浓度的确定（PEDV）
反应条件优化，PEDV 扩增条带在引物浓度为 0.85μM/终选择 0.85μM/L。M 1 2 3图 1-1 单重 PCR 最适引物浓度的确定（PEDV）ptimal primer concentrations of single P（DL2000DNA Maker）；1：1.0μM/L；2：0.8TGEV 扩增条带在引物浓度为 1μM/L 时 1μM/L。M 1 2 32
1-3 单重 PCR 最佳退火温度的确定（PEDV）imal annealing temperature of single PCR2000（DL2000DNA Maker）；1：53℃；2：54℃火温度在 54℃的条件下，PCR 扩增效率为 54℃。M 1 2 3 1-4 单项 PCR 最佳退火温度的确定（TGEV）imal annealing temperature of single PCR2000（DL2000DNA Maker）；1：53℃；2：54℃应条件优化832b
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪腹泻三联活疫苗席卷全国 应该如何进行科学免疫?[J]. 张金辉. 猪业科学. 2016(08)
[2]猪传染性胃肠炎的诊治[J]. 周兴忠,张金玉. 中国畜牧兽医文摘. 2016(03)
[3]猪传染性胃肠炎的综合防治[J]. 郭一学. 湖北畜牧兽医. 2016(02)
[4]我国研制成功猪腹泻三联活疫苗[J]. 吉林农业. 2015(08)
[5]猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 王黎,李碧,周远成,朱玲,徐志文,郭万柱. 中国兽医学报. 2015(02)
[6]猪流行性腹泻病毒荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J]. 于长青,林树伯,刘乐荣,王庆博,李继良. 北京农学院学报. 2015(03)
[7]猪流行性腹泻研究进展[J]. 李蕾,刘新文,殷颖珊. 南方农业. 2014(15)
[8]猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立[J]. 焦洋,姜焱,王凯民,张常印,雷治海,唐泰山. 动物医学进展. 2013(08)
[9]科学使用疫苗 防控仔猪腹泻[J]. 熊慎苏. 今日畜牧兽医. 2013(03)
[10]猪传染性胃肠炎病毒致病机制的研究进展[J]. 殷相平,任晓峰,柳纪省. 世界华人消化杂志. 2013(01)
硕士论文
[1]猪传染性胃肠炎流行毒株的分离鉴定及全基因组分析[D]. 朱蕴暖.黑龙江八一农垦大学 2017
[2]猪流行性腹泻病毒（PEDV）流行株的序列分析和抗原表位表达[D]. 程小娜.海南大学 2015
[3]仔猪流行性腹泻的诊断[D]. 林勇.四川农业大学 2013
[4]猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻快速诊断方法的建立及S基因的表达[D]. 刘邓.新疆农业大学 2009
本文编号：3243018
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