牛病毒性腹泻病毒E 84-170aa rns 蛋白的可溶性表达及抗体间接ELISA检测方法的建立
发布时间：2021-06-23 13:03
为建立一种检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗体的ELISA方法,对Erns蛋白一个包含2个预测抗原表位的96氨基酸蛋白编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体pET-E84-170aarns,转化表达菌株BL21（DE3）,在28℃用0.1 mmol/L IPTG诱导重组蛋白表达。将重组E84-170aarns蛋白通过Ni2+-NTA树脂亲和层析方法纯化后,用Western-blot分析其抗原性。结果显示,重组E84-170aarns蛋白以完全可溶形式在大肠杆菌中高效表达,经Ni2+-NTA树脂纯化获得重组E84-170aarns蛋白的浓度和纯度分别为1.5 mg/mL和94%。Western-blot显示,该重组蛋白对BVDV阳性血清具有很强的抗原反应性。用纯化的重组E84-170aarns
【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(10)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
重组Erns84-170aa蛋白的Western-blot分析
450，N；下同。P：Positiveserum；N：Negativeserum；P/N=D450，P/D450，N；Thesameasfollows.表1最适抗原包被浓度和血清稀释度的确定Table1Determinationofthecoatingconcentrationofantigenandthedilutionofserumsamples图2重组Erns84-170aa蛋白的Western-blot分析Figure2Western-blotanalysisofrecombinantErns84-170aaprotein1：预染蛋白Marker；2～3：重组Erns84-170aa蛋白。1：Prestainedmolecularweightmarker；2—3：RecombinantErns84-170aaprotein.图1重组Erns84-170aa蛋白在大肠杆菌表达及纯化的SDS-PAGE分析Figure1SDS-PAGEanalysisoftheexpressionofErns84-170aarecombinantplasmidinE.coliandpurifiedrecom-binantErns84-170aaprotein1：蛋白Marker；2：未诱导菌体裂解物；3：重组表达菌诱导后菌体裂解物；4：重组表达菌诱导后菌体裂解物上清；5～8：纯化的重组蛋白。1：Prestainedmolecularweightmarker；2：TheuninducedBL21（DE3）cellsharbouringtherecombinantplasmid；3：TheinducedBL21（DE3）cellsharbouringtherecombinantplasmid；4：ThesupernatantaftersonicationoftheBL21（DE3）cellsexpressingErns84-170aa；5—8：Thepuri-fiedrecombinantErns84-170aaprotein.值（5.93）最大且阳性血清D450≥1.0。2.6酶标抗体最佳工作浓度确定结果如表3所示，当酶标二抗选择1∶5000浓度时，P/N值（5.69）最大且阳性血清D450≥1.0。2.7阴阳性临界值判定标准确定结果如表4所示，40份阴性样品的平均D450值为0.214，S值为0.023，阴性样品值的上
特异性检测Figure3SpecificitytestBVDVIBRV阳BLV阳性BTV阳性血AKAV阳性血
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于重组Erns蛋白的牛病毒性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立[J]. 肖盛中,马振国,李岩,马旭升,李爽,杨若松,盛金良. 中国预防兽医学报. 2019(03)
[2]牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E0蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 丁金花,马旭升,蔡卓轩,肖盛中,吴鹏,盛金良,陈创夫. 石河子大学学报(自然科学版). 2018(01)
[3]牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的表达与多克隆抗体制备[J]. 王雪枝,朱远茂,史鸿飞,严昊,蔡红,王姝,马磊,薛飞. 黑龙江畜牧兽医. 2014(05)
[4]青海牦牛BVDV E0基因的表达与抗原性检测[J]. 王光华,叶成玉,蔡其刚,王戈平,陆艳,张芳芳,马利青,周继章. 中国兽医杂志. 2013(04)
[5]牛病毒性腹泻病毒感染的免疫应答研究进展[J]. 宫晓炜,曹小安,郑福英,陈启伟,周继章,殷宏,才学鹏. 中国兽医科学. 2012(11)
本文编号：3244989
【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(10)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
重组Erns84-170aa蛋白的Western-blot分析
450，N；下同。P：Positiveserum；N：Negativeserum；P/N=D450，P/D450，N；Thesameasfollows.表1最适抗原包被浓度和血清稀释度的确定Table1Determinationofthecoatingconcentrationofantigenandthedilutionofserumsamples图2重组Erns84-170aa蛋白的Western-blot分析Figure2Western-blotanalysisofrecombinantErns84-170aaprotein1：预染蛋白Marker；2～3：重组Erns84-170aa蛋白。1：Prestainedmolecularweightmarker；2—3：RecombinantErns84-170aaprotein.图1重组Erns84-170aa蛋白在大肠杆菌表达及纯化的SDS-PAGE分析Figure1SDS-PAGEanalysisoftheexpressionofErns84-170aarecombinantplasmidinE.coliandpurifiedrecom-binantErns84-170aaprotein1：蛋白Marker；2：未诱导菌体裂解物；3：重组表达菌诱导后菌体裂解物；4：重组表达菌诱导后菌体裂解物上清；5～8：纯化的重组蛋白。1：Prestainedmolecularweightmarker；2：TheuninducedBL21（DE3）cellsharbouringtherecombinantplasmid；3：TheinducedBL21（DE3）cellsharbouringtherecombinantplasmid；4：ThesupernatantaftersonicationoftheBL21（DE3）cellsexpressingErns84-170aa；5—8：Thepuri-fiedrecombinantErns84-170aaprotein.值（5.93）最大且阳性血清D450≥1.0。2.6酶标抗体最佳工作浓度确定结果如表3所示，当酶标二抗选择1∶5000浓度时，P/N值（5.69）最大且阳性血清D450≥1.0。2.7阴阳性临界值判定标准确定结果如表4所示，40份阴性样品的平均D450值为0.214，S值为0.023，阴性样品值的上
特异性检测Figure3SpecificitytestBVDVIBRV阳BLV阳性BTV阳性血AKAV阳性血
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于重组Erns蛋白的牛病毒性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立[J]. 肖盛中,马振国,李岩,马旭升,李爽,杨若松,盛金良. 中国预防兽医学报. 2019(03)
[2]牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E0蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 丁金花,马旭升,蔡卓轩,肖盛中,吴鹏,盛金良,陈创夫. 石河子大学学报(自然科学版). 2018(01)
[3]牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的表达与多克隆抗体制备[J]. 王雪枝,朱远茂,史鸿飞,严昊,蔡红,王姝,马磊,薛飞. 黑龙江畜牧兽医. 2014(05)
[4]青海牦牛BVDV E0基因的表达与抗原性检测[J]. 王光华,叶成玉,蔡其刚,王戈平,陆艳,张芳芳,马利青,周继章. 中国兽医杂志. 2013(04)
[5]牛病毒性腹泻病毒感染的免疫应答研究进展[J]. 宫晓炜,曹小安,郑福英,陈启伟,周继章,殷宏,才学鹏. 中国兽医科学. 2012(11)
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