基于代谢组学的苦豆草治疗大肠湿热证作用机制研究
发布时间：2021-06-26 17:25
苦豆草具有清肠,燥湿的功效,中兽医临床用于治疗畜禽湿热泻痢,里急后重及淋证涩痛等,但其作用机制尚不完全清楚。本研究以苦豆草为研究对象,采用高效液相色谱法（HPLC）测定苦豆草中5种生物碱的含量;在此基础上建立大肠湿热证大鼠模型后应用苦豆草进行干预治疗,采用代谢组学策略从机体内源性代谢小分子层面探究苦豆草治疗大肠湿热证的作用机制。该研究为苦豆草治疗畜禽大肠湿热证药理作用及临床应用提供了基础研究资料和理论依据。主要研究结果如下:1、苦豆草中5种生物碱化学成分含量测定采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6×150 mm,5μm）,以甲醇-0.2%磷酸水溶液为流动相,柱温35℃,波长205 nm梯度洗脱。通过考察线性关系、精密度、稳定性、重现性及加样回收实验等,显示所建立的苦豆草中5种生物碱含量测定方法可靠;并用此方法测定苦豆草中苦参碱、槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱及氧化苦参碱含量分别为0.03%、0.03%、0.30%、0.18%及0.26%,其中以槐定碱含量最高。2、大肠湿热证模型建立和苦豆草干预治疗效果探究Wistar大鼠32只,随机分为对照组（...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
苦豆草中主要生物碱化学结构示意图
再分别取适量单个对照品溶液，混合制备成终浓度约为 0.1 mg·mL-1的混合对照品母液。使用时稀释至所需浓度，经 0.22 μm 微孔滤膜过滤。2.2.2 苦豆草样品溶液制备称取苦豆草粗粉 0.2g，加 20mL三氯甲烷和 1mL浓氨水，超声处理 30min，置 4℃条件下 12h，抽滤，水浴蒸干，加流动相定容至 10mL，超声处理 30min，补足缺失量，用 0.22 μm 微孔滤膜过滤，制得苦豆草样品溶液。2.3 方法学考察2.3.1 系统适应性实验按照2.1的色谱条件，分别取混合对照品溶液及苦豆草样品溶液20μL进样，测定其含量，可见各生物碱成分分离效果良好，基线平稳，其中苦参碱，槐果碱，槐定碱，氧化槐果碱，氧化苦参碱的保留时间分别为：9.565 min，11.774 min，13.098 min，17.245 min 和 21.054 min（图 2-1，2-2）。
图 2-2 苦豆草样品 HPLC 图谱Figure 2-2 The HPLC chromatogram of Sophora alopecuroides.2.3.2 线性关系考察精密量取混合对照品母液，分别稀释成质量浓度为 0.005 mg·mL-1，0.01mg·mL-1， 0.02mg·mL-1，0.04mg·mL-1，0.08mg·mL-1的混合对照品，计算出每个浓度下单个对照品的质量浓度，按 2.1 的色谱条件测定峰面积，以质量浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)，得苦参碱、槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱及氧化苦参碱的线性回归方程（表 2-1，图 2-3）。其中苦参碱线性范围为：1.20 μg·mL-1～19.24μg·mL-1；槐果碱线性范围：0.67μg·mL-1～10.67μg·mL-1；槐定碱线性范围为：1.17μg·mL-1～18.67μg·mL-1；氧化槐果碱线性范围为：0.84μg·mL-1～13.33μg·mL-1；氧化苦参碱线性范围为：1.13 μg·mL-1～18.10 μg·mL-1。表 2-1 苦豆草中 5 种生物碱线性回归方程测定结果Table 2-1 The linear regression equation results of 5 alkaloids in Sophora alopecuroides
【参考文献】：
期刊论文
[1]苦豆子多糖对小鼠体内外免疫功能的调节作用[J]. 郑夺,冯文茹,陈冠,张岩,陶遵威. 中国现代应用药学. 2018(01)
[2]平胃散加减在兽医临床上的应用[J]. 彭刚. 中国畜牧兽医文摘. 2017(10)
[3]苦豆子总黄酮对乙肝病毒复制的影响[J]. 赵义勇,杨巧丽,李壮,刘燕,黄华. 中国民族民间医药. 2017(17)
[4]柱前衍生化HPLC法建立苦豆子多糖特征图谱的研究[J]. 张岩,赵振宇,王苹,张桂贤,傅予,刘庆焕,陶遵威. 天津中医药. 2017(09)
[5]槐果碱体内药动学和体外抗肿瘤研究[J]. 杨晓艺,曾诚,李建光. 中药新药与临床药理. 2017(05)
[6]岭南温病湿热证小鼠模型的建立及肠道菌群的研究分析[J]. 王婷,郑锋玲,骆欢欢. 中华中医药学刊. 2017(06)
[7]槐胺碱镇痛抗炎作用及其机制研究[J]. 陈靖,杨丽. 中华中医药学刊. 2017(06)
[8]中医“湿热证”病证结合动物模型研究进展[J]. 朱闽,何清湖,荀建宁. 中华中医药杂志. 2017(02)
[9]尿液作为新型生物标志物来源的探索[J]. 井健,高友鹤. 生物化学与生物物理进展. 2016(11)
[10]苦豆籽HPLC指纹图谱的建立及产区相关性分析[J]. 王秀芬,陈海燕,冷晓红. 宁夏医科大学学报. 2016(10)
硕士论文
[1]猪瘟病毒感染细胞的代谢组学及葡萄糖促进猪瘟病毒增殖的研究[D]. 张必凯.中国人民解放军军事医学科学院 2017
[2]苦豆子生物碱提取分离纯化研究[D]. 马朝阳.江南大学 2004
本文编号：3251759
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
苦豆草中主要生物碱化学结构示意图
再分别取适量单个对照品溶液，混合制备成终浓度约为 0.1 mg·mL-1的混合对照品母液。使用时稀释至所需浓度，经 0.22 μm 微孔滤膜过滤。2.2.2 苦豆草样品溶液制备称取苦豆草粗粉 0.2g，加 20mL三氯甲烷和 1mL浓氨水，超声处理 30min，置 4℃条件下 12h，抽滤，水浴蒸干，加流动相定容至 10mL，超声处理 30min，补足缺失量，用 0.22 μm 微孔滤膜过滤，制得苦豆草样品溶液。2.3 方法学考察2.3.1 系统适应性实验按照2.1的色谱条件，分别取混合对照品溶液及苦豆草样品溶液20μL进样，测定其含量，可见各生物碱成分分离效果良好，基线平稳，其中苦参碱，槐果碱，槐定碱，氧化槐果碱，氧化苦参碱的保留时间分别为：9.565 min，11.774 min，13.098 min，17.245 min 和 21.054 min（图 2-1，2-2）。
图 2-2 苦豆草样品 HPLC 图谱Figure 2-2 The HPLC chromatogram of Sophora alopecuroides.2.3.2 线性关系考察精密量取混合对照品母液，分别稀释成质量浓度为 0.005 mg·mL-1，0.01mg·mL-1， 0.02mg·mL-1，0.04mg·mL-1，0.08mg·mL-1的混合对照品，计算出每个浓度下单个对照品的质量浓度，按 2.1 的色谱条件测定峰面积，以质量浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)，得苦参碱、槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱及氧化苦参碱的线性回归方程（表 2-1，图 2-3）。其中苦参碱线性范围为：1.20 μg·mL-1～19.24μg·mL-1；槐果碱线性范围：0.67μg·mL-1～10.67μg·mL-1；槐定碱线性范围为：1.17μg·mL-1～18.67μg·mL-1；氧化槐果碱线性范围为：0.84μg·mL-1～13.33μg·mL-1；氧化苦参碱线性范围为：1.13 μg·mL-1～18.10 μg·mL-1。表 2-1 苦豆草中 5 种生物碱线性回归方程测定结果Table 2-1 The linear regression equation results of 5 alkaloids in Sophora alopecuroides
【参考文献】：
期刊论文
[1]苦豆子多糖对小鼠体内外免疫功能的调节作用[J]. 郑夺,冯文茹,陈冠,张岩,陶遵威. 中国现代应用药学. 2018(01)
[2]平胃散加减在兽医临床上的应用[J]. 彭刚. 中国畜牧兽医文摘. 2017(10)
[3]苦豆子总黄酮对乙肝病毒复制的影响[J]. 赵义勇,杨巧丽,李壮,刘燕,黄华. 中国民族民间医药. 2017(17)
[4]柱前衍生化HPLC法建立苦豆子多糖特征图谱的研究[J]. 张岩,赵振宇,王苹,张桂贤,傅予,刘庆焕,陶遵威. 天津中医药. 2017(09)
[5]槐果碱体内药动学和体外抗肿瘤研究[J]. 杨晓艺,曾诚,李建光. 中药新药与临床药理. 2017(05)
[6]岭南温病湿热证小鼠模型的建立及肠道菌群的研究分析[J]. 王婷,郑锋玲,骆欢欢. 中华中医药学刊. 2017(06)
[7]槐胺碱镇痛抗炎作用及其机制研究[J]. 陈靖,杨丽. 中华中医药学刊. 2017(06)
[8]中医“湿热证”病证结合动物模型研究进展[J]. 朱闽,何清湖,荀建宁. 中华中医药杂志. 2017(02)
[9]尿液作为新型生物标志物来源的探索[J]. 井健,高友鹤. 生物化学与生物物理进展. 2016(11)
[10]苦豆籽HPLC指纹图谱的建立及产区相关性分析[J]. 王秀芬,陈海燕,冷晓红. 宁夏医科大学学报. 2016(10)
硕士论文
[1]猪瘟病毒感染细胞的代谢组学及葡萄糖促进猪瘟病毒增殖的研究[D]. 张必凯.中国人民解放军军事医学科学院 2017
[2]苦豆子生物碱提取分离纯化研究[D]. 马朝阳.江南大学 2004
本文编号：3251759
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3251759.html
