拟态弧菌靶向表位基因疫苗的设计、构建及其免疫效果评价

发布时间：2021-07-04 19:14

　　拟态弧菌（Vibrio mimicus）是一种严重危害水产养殖业发展的肠道病原菌。口服或肛注基因疫苗所激发的肠黏膜免疫在抗该菌感染中发挥重要作用。因此,研制安全、高效的拟态弧菌基因疫苗对于防控鱼类拟态弧菌感染具有重要意义。基因疫苗以安全、易于构建、免疫应答全面且持久等优势受到人们关注。但是,口服或肛注“裸”基因疫苗易受到消化道酶类降解,导致其免疫原性减弱,无法获得高水平的肠黏膜免疫应答,而解决这一问题的关键措施是选用适宜载体将基因疫苗靶向抗原递呈细胞（Antigen Presenting Cell,APC）进行高效表达与递呈。目前,细菌菌蜕（Bacterial Ghosts,BGs）已被证实具有防止基因疫苗降解并将其靶向APC进行表达的作用,而鱼类恒定链类似蛋白（Invariant chain like protein,Iclp）具有将抗原肽靶向MHC分子,提高抗原提呈效率的作用。因此,可利用Iclp与BGs作为基因疫苗的内、外靶向载体,以提高其免疫原性。前期研究中我们鉴定了拟态弧菌两种免疫保护性蛋白（OmpU黏附素蛋白和VMH溶血素蛋白）的免疫优势表位。在此基础上,本论文以OmpU蛋... 

【文章来源】：安徽农业大学安徽省

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【学位级别】：硕士

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拟态弧菌的形态与结构

-192RFADRDTSTGEFADNKEDGY）以不同方式进行串联组合，应用DNAstar Protean软件分析各种组合方式的可行性。发现以图1-1方式串联的多表位肽（命名为OVepis）中各表位间相对独立，抗原性参数较好，可以作为疫苗靶点。将多表位肽OVepis序列转化为核苷酸序列，从而获得一个长度为324 bp的多表位串联基因（OVepis基因）。委托通用生物技术有限公司合成OVepis基因，并克隆至质粒pUC57形成重组克隆质粒pUC57-OVepis。仪器名称 型号 生产厂家超低温保存箱 DW-86L-388A 海尔特种电器有限公司医用低温保存箱 DW-25W198 海尔特种电器有限公司台式高速冷冻离心机 Allegra 64R 美国贝克曼库尔特公司冷场发射扫描电子显微镜 S-4800 日本日立公司透射电子显微镜 HT-7700 日本日立公司实时荧光定量 PCR 仪 ABI StepOne 美国应用生物系统公司ADVENTURE 系列电子天平 AR223CN 奥豪斯仪器（常州）有限公司立式高压蒸汽灭菌锅 LDZX-30KBS 上海亚荣生化仪器厂超净工作台 SW-CJ-1F 苏州安泰空气技术有限公司电热恒温水槽 DK-8D 上海一恒科技有限公司力康 Heal Force Smart 超纯水系统 Smart-N UV/VF 力康生物医疗科技控股有限公司生物安全柜 ClassⅡBSC 新加坡艺思高科技有限公司生化培养箱 LRH-250 上海

血清与肠黏液中非特异性免疫因子活性检测采集免疫前与免疫后 3 d、7 d、14 d、21 d，各实验组随机取 000 r/min，4 ℃离心 10 min，收集血清。同时根据草鱼肠道开，清除粪便后用洁净玻片小心刮取中、后肠段处的肠黏液匀浆，10 000 r/min，4 ℃离心 20 min，取上清即为待检肠黏标记，置于-80 ℃保存。图 1-3 不同实验组某一组织中目的基因转录水平检测的加样示意图 PBS 对照组、pcDNA3.1 对照组、双靶向表位基因疫苗组、外靶向表位基因疫苗组和“裸”表位基因疫苗组。1-3 孔为目的基因，4-6 孔为内参基因，7-8 孔为schematic diagram of sample addition for the detection of target gene transcriptional tissue of fish in different experimental groupsents PBS control group, pcDNA3.1 control group, double-targeted DNA argeted DNA vaccine group, endogenous-targeted DNA vaccine group and nakectively. 1-3 wells: target gene; 4-6 wells: reference gene; 7-8 wells: negative contrater.

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3265377