MDA5在IBDV感染鸡胚成纤维细胞自噬发生过程中的作用研究
发布时间：2021-07-21 11:21
传染性法氏囊病病毒（IBDV）是属于Birnaviridae家族的双链RNA病毒。自噬是真核细胞的死亡方式之一。有研究表明,IBDV可以引起DF-1细胞自噬,但其具体机制仍有待研究。MDA5为模式识别受体家族中的一员,能够特异性识别双链RNA病毒。课题组前期研究显示,IBDV能够激活雏鸡法氏囊内鸡MDA5（chMDA5）信号通路,参与IBDV感染雏鸡过程。因此,本试验以IBDV为致病原,鸡胚成纤维细胞（CEF）为研究对象,对MDA5与IBDV引起的自噬之间的关系进行研究,进一步揭示IBDV致病机制。首先,将双链RNA病毒模拟物poly（I:C）转染至CEF,采用Western blot方法对CEF内chMDA5蛋白表达进行检测,结果发现poly（I:C）转染能够引起CEF内chMDA5的表达升高。之后将CEF分为对照组、poly（I:C）组、chMDA5 siRNA+poly（I:C）组、Rapa+poly（I:C）组、3-MA+poly（I:C）组,采用Western blot方法对细胞内自噬标志蛋白LC3表达进行检测,结果显示chMDA5介导poly（I:C）引起CEF的自噬,并且...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
IBDV的PCR鉴定100bp
37注：a)：正常对照组；b)：IBDV 感染组；c)、d)：chMDA5 siRNA+IBDV 组。A：自噬体；M：线粒体；N：细胞核。Note: a): control group; b): IBDV infection group; c), d): chMDA5 siRNA+IBDV group.A: autophagosome;M: mitochondria; N: nucleus.图 3-14 CEF 超微病理学变化Fig. 3-14 CEF ultramicropathological changes
-18T 载体连接后的产物，转化进行测序分析，经软件分析获粒构建成功。量 PCR 标准曲线的绘制粒 T-IBDV VP2 浓度为 273.4 n 6.1×1010（拷贝数/μL）。故×104、6.1×103、6.1×102，即反1.22×105、1.22×104。进行 PC反应对应的 Ct 值分别为 12.04，曲线中只有一个峰值，表明目图 3-16 IBDV VP2 引物的鉴定6 Identification of IBDV VP2 pr
【参考文献】：
期刊论文
[1]番鸭呼肠孤病毒感染诱导细胞自噬的研究[J]. 吴异健,崔龙萍,黄诗杭,王全溪,吴晓平,周五朵,朱二鹏,黄一帆,吴宝成. 病毒学报. 2017(02)
[2]自噬小体膜来源的形态学分析[J]. 王自彬,王静,王玲,赵文娥. 电子显微学报. 2016(06)
[3]传染性法氏囊病病毒感染对鸡细胞模式识别受体及抗病毒基因转录的影响[J]. 欧阳伟,王永山,王晓丽,夏兴霞,潘群兴,毕振威,诸玉梅,董晨红,张海彬. 中国预防兽医学报. 2015(02)
[4]MDA5在先天性免疫抗病毒作用中的研究进展[J]. 刘欢欢,谢丽君,邵志勇,高洪,严玉霖. 中国畜牧兽医. 2015(01)
[5]感染传染性法氏囊病病毒的DF-1细胞中chTLR3表达的动态变化[J]. 王成成,王杲强,葛铭,于群,潘龙,张瑞莉. 中国兽医科学. 2014(12)
[6]细胞自噬与病毒感染[J]. 陶冶,任晓峰. 病毒学报. 2013(01)
[7]胞浆内核酸受体RLRs的研究进展[J]. 廖倩,吴谡琦,孙修勤. 海洋科学进展. 2013(01)
[8]核因子-κB与眼科疾病的研究进展[J]. 袁洪峰,贺翔鸽. 国际眼科杂志. 2008(01)
硕士论文
[1]鸡MDA5信号通路在IBDV致雏鸡法氏囊病理损伤中的作用研究[D]. 栾亚男.东北农业大学 2016
[2]鸡TLR3信号通路在IBDV致雏鸡法氏囊免疫损伤中的作用研究[D]. 赵霞.东北农业大学 2016
[3]鸡传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白的克隆与表达[D]. 朱彩霞.山东农业大学 2009
本文编号：3294929
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
IBDV的PCR鉴定100bp
37注：a)：正常对照组；b)：IBDV 感染组；c)、d)：chMDA5 siRNA+IBDV 组。A：自噬体；M：线粒体；N：细胞核。Note: a): control group; b): IBDV infection group; c), d): chMDA5 siRNA+IBDV group.A: autophagosome;M: mitochondria; N: nucleus.图 3-14 CEF 超微病理学变化Fig. 3-14 CEF ultramicropathological changes
-18T 载体连接后的产物，转化进行测序分析，经软件分析获粒构建成功。量 PCR 标准曲线的绘制粒 T-IBDV VP2 浓度为 273.4 n 6.1×1010（拷贝数/μL）。故×104、6.1×103、6.1×102，即反1.22×105、1.22×104。进行 PC反应对应的 Ct 值分别为 12.04，曲线中只有一个峰值，表明目图 3-16 IBDV VP2 引物的鉴定6 Identification of IBDV VP2 pr
【参考文献】：
期刊论文
[1]番鸭呼肠孤病毒感染诱导细胞自噬的研究[J]. 吴异健,崔龙萍,黄诗杭,王全溪,吴晓平,周五朵,朱二鹏,黄一帆,吴宝成. 病毒学报. 2017(02)
[2]自噬小体膜来源的形态学分析[J]. 王自彬,王静,王玲,赵文娥. 电子显微学报. 2016(06)
[3]传染性法氏囊病病毒感染对鸡细胞模式识别受体及抗病毒基因转录的影响[J]. 欧阳伟,王永山,王晓丽,夏兴霞,潘群兴,毕振威,诸玉梅,董晨红,张海彬. 中国预防兽医学报. 2015(02)
[4]MDA5在先天性免疫抗病毒作用中的研究进展[J]. 刘欢欢,谢丽君,邵志勇,高洪,严玉霖. 中国畜牧兽医. 2015(01)
[5]感染传染性法氏囊病病毒的DF-1细胞中chTLR3表达的动态变化[J]. 王成成,王杲强,葛铭,于群,潘龙,张瑞莉. 中国兽医科学. 2014(12)
[6]细胞自噬与病毒感染[J]. 陶冶,任晓峰. 病毒学报. 2013(01)
[7]胞浆内核酸受体RLRs的研究进展[J]. 廖倩,吴谡琦,孙修勤. 海洋科学进展. 2013(01)
[8]核因子-κB与眼科疾病的研究进展[J]. 袁洪峰,贺翔鸽. 国际眼科杂志. 2008(01)
硕士论文
[1]鸡MDA5信号通路在IBDV致雏鸡法氏囊病理损伤中的作用研究[D]. 栾亚男.东北农业大学 2016
[2]鸡TLR3信号通路在IBDV致雏鸡法氏囊免疫损伤中的作用研究[D]. 赵霞.东北农业大学 2016
[3]鸡传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白的克隆与表达[D]. 朱彩霞.山东农业大学 2009
本文编号：3294929
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