冷冻保护剂对犊牛睾丸组织标志性酶活性及关键基因表达量的影响
发布时间：2021-07-21 11:27
睾丸组织尤其是幼龄动物睾丸组织的冷冻保存技术不仅能为优良家畜生殖细胞保存、珍稀濒危物种保护等提供新的途径，而且能为未成年男性癌症患者生育能力恢复、组织器官冷冻保存等提供理论基础，对动物方向生物繁殖技术的进步有巨大的推动作用。为了探讨犊牛睾丸组织适宜的冷冻保存技术体系，本研究设计了6种以甘油、DMSO、乙二醇、海藻糖、BSA和睾丸液为主要成份的冷冻保护液配伍，首先测定冷冻后犊牛睾丸组织中AKP、ACP、LDH和β-D-Glucosidase等标志性酶活性，然后运用RT-PCR技术测定睾丸组织中CREM、Stra8、HSP70-2、Oct4、SCF和C-KIT6个基因的相对表达量，同时将解冻后的睾丸组织制备为单细胞悬液并测定细胞活率，并选择活率最高的睾丸细胞进行SSCs的分离纯化培养，运用碱性磷酸酶染色和反转录PCR法对获得的细胞进行鉴定。主要研究结果如下：1.经15mg/ml牛血清白蛋白（BSA）冷冻7d后，睾丸组织AKP、ACP、LDH和β-D-Glucosidase的活性分别为599.99、129.11、1891.53和489.98U/gprot，均显著高于其他组（P<0.05...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
精子发生过程
代代相传的特性而被视为永生细胞（Ali Honaramooz 2003）。对于 SSCs 体外增诱导分化的研究可以为哺乳动物精子发生的相关研究提供理论基础，也可以为雄种质资源的保存提供技术支持，利用 SSCs 的信息遗传特性将其作为基因载体来基因动物试验模型正在成为国内外转基因领域的研究热点。
的 5～7 倍；流式细胞分选术也是通过识别 SSCs 的特异未确定一种只在 SSCs 表面特异性表达的标志物，所以Kanatsu-Shinohara et al. 2003a; Kubota et al. 2004a）；差易掌握，首先用无菌的明胶溶液包被培养皿，然后将制大约 12h，鉴于体细胞（如支持细胞）比精原细胞能够器轻轻吹打培养液即可使刚贴壁或轻微贴壁的精原细胞中便可富集培养。定常用形态学、免疫组化染色和细胞特异性表达基因等al. 2004）。SSCs 的培养是进行诱导分化和后续研究的基培养基、血清，特别是一些促生长因子如胶质细胞源性纤维细胞促生长因子（bFGF）、白血病抑制因子（LIF现 GDNF 是 SSCs 分化调控的关键因子；尹明和李德雪体外能够促进 SSCs 的分化，LIF 对 SSCs 增殖具有明显促发生过程中 SSCs 增殖分化的机理了解地尚不够透彻，体系的建立仍然存在诸多困难，这需要我们继续努力探
【参考文献】：
期刊论文
[1]冷冻保护剂对猪精液的冷冻保护作用[J]. 王春伟,高璞,苏泽智,李青旺,杨公社,胡建宏. 家畜生态学报. 2013(07)
[2]5种禽类卵黄低密度脂蛋白对猪精子冷冻效果的影响[J]. 吕瑞凯,胡建宏,王红,程亮,江中良,李青旺,姚俊,张鹏飞. 西北农业学报. 2011(09)
[3]奶山羊睾丸组织冷冻保存及复苏后精原干细胞的分离培养[J]. 朱海鲸,华进联,宋文聪,黄建升,田泽华. 中国兽医学报. 2011(04)
[4]牦牛睾丸组织能量代谢相关酶活力的分析[J]. 邱翔,林亚秋,王国生,阮武勇,刘薇,王翠丽,黄林,郑玉才. 四川动物. 2010(05)
[5]MC004对大鼠睾丸组织结构和酶活力的影响[J]. 骆永伟,施畅,杨保华,胡中慧,吴纯启,王全军,马华智,周莉,廖明阳. 毒理学杂志. 2009(05)
[6]不同卵巢组织冷冻方法对保存女性生育力的研究[J]. 刘爱华,周平,魏兆莲,章志国,邢琼,曹云霞. 生殖医学杂志. 2009 (04)
[7]基于生物新陈代谢中酶的高效催化性研究[J]. 李淑丽. 甘肃联合大学学报(自然科学版). 2009(04)
[8]Stra8:生殖细胞有丝分裂转变为减数分裂前特异表达的基因[J]. 米美玲,杨蓓,徐斯凡,邹挺. 中华男科学杂志. 2009(01)
[9]海藻糖和牛血清白蛋白对牛精液的冷冻效果[J]. 昝林森,张莺莺,耿繁军,田万强. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(10)
[10]小鼠精原细胞体外增殖与冷冻保存[J]. 李学家,王勇胜,刘凤军,刘军,张涌. 农业生物技术学报. 2007(04)
硕士论文
[1]不同冷冻保护剂对未成熟小鼠睾丸组织的保护作用[D]. 王晓英.河北医科大学 2010
[2]新生牛精原干细胞体外增殖调控的研究[D]. 张仕强.西北农林科技大学 2007
本文编号：3294937
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
精子发生过程
代代相传的特性而被视为永生细胞（Ali Honaramooz 2003）。对于 SSCs 体外增诱导分化的研究可以为哺乳动物精子发生的相关研究提供理论基础，也可以为雄种质资源的保存提供技术支持，利用 SSCs 的信息遗传特性将其作为基因载体来基因动物试验模型正在成为国内外转基因领域的研究热点。
的 5～7 倍；流式细胞分选术也是通过识别 SSCs 的特异未确定一种只在 SSCs 表面特异性表达的标志物，所以Kanatsu-Shinohara et al. 2003a; Kubota et al. 2004a）；差易掌握，首先用无菌的明胶溶液包被培养皿，然后将制大约 12h，鉴于体细胞（如支持细胞）比精原细胞能够器轻轻吹打培养液即可使刚贴壁或轻微贴壁的精原细胞中便可富集培养。定常用形态学、免疫组化染色和细胞特异性表达基因等al. 2004）。SSCs 的培养是进行诱导分化和后续研究的基培养基、血清，特别是一些促生长因子如胶质细胞源性纤维细胞促生长因子（bFGF）、白血病抑制因子（LIF现 GDNF 是 SSCs 分化调控的关键因子；尹明和李德雪体外能够促进 SSCs 的分化，LIF 对 SSCs 增殖具有明显促发生过程中 SSCs 增殖分化的机理了解地尚不够透彻，体系的建立仍然存在诸多困难，这需要我们继续努力探
【参考文献】：
期刊论文
[1]冷冻保护剂对猪精液的冷冻保护作用[J]. 王春伟,高璞,苏泽智,李青旺,杨公社,胡建宏. 家畜生态学报. 2013(07)
[2]5种禽类卵黄低密度脂蛋白对猪精子冷冻效果的影响[J]. 吕瑞凯,胡建宏,王红,程亮,江中良,李青旺,姚俊,张鹏飞. 西北农业学报. 2011(09)
[3]奶山羊睾丸组织冷冻保存及复苏后精原干细胞的分离培养[J]. 朱海鲸,华进联,宋文聪,黄建升,田泽华. 中国兽医学报. 2011(04)
[4]牦牛睾丸组织能量代谢相关酶活力的分析[J]. 邱翔,林亚秋,王国生,阮武勇,刘薇,王翠丽,黄林,郑玉才. 四川动物. 2010(05)
[5]MC004对大鼠睾丸组织结构和酶活力的影响[J]. 骆永伟,施畅,杨保华,胡中慧,吴纯启,王全军,马华智,周莉,廖明阳. 毒理学杂志. 2009(05)
[6]不同卵巢组织冷冻方法对保存女性生育力的研究[J]. 刘爱华,周平,魏兆莲,章志国,邢琼,曹云霞. 生殖医学杂志. 2009 (04)
[7]基于生物新陈代谢中酶的高效催化性研究[J]. 李淑丽. 甘肃联合大学学报(自然科学版). 2009(04)
[8]Stra8:生殖细胞有丝分裂转变为减数分裂前特异表达的基因[J]. 米美玲,杨蓓,徐斯凡,邹挺. 中华男科学杂志. 2009(01)
[9]海藻糖和牛血清白蛋白对牛精液的冷冻效果[J]. 昝林森,张莺莺,耿繁军,田万强. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(10)
[10]小鼠精原细胞体外增殖与冷冻保存[J]. 李学家,王勇胜,刘凤军,刘军,张涌. 农业生物技术学报. 2007(04)
硕士论文
[1]不同冷冻保护剂对未成熟小鼠睾丸组织的保护作用[D]. 王晓英.河北医科大学 2010
[2]新生牛精原干细胞体外增殖调控的研究[D]. 张仕强.西北农林科技大学 2007
本文编号：3294937
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