猪圆环病毒2b和2d基因型Cap蛋白的重组表达及其免疫原性研究
发布时间：2021-07-26 00:01
猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）在临床上主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合征（PDNS）、繁殖障碍和呼吸道疾病等多种疾病,主要发病猪为6-16周龄仔猪。根据国际分类方法主要分为PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d、PCV2e五个基因型。近年来根据流行病学调查和遗传变异分析表明PCV2流行以及变异的趋势国内目前主要流行的为PCV2d基因型毒株。对于PCV2暂无有效的治疗方法,疫苗免疫被认为是当前最为有效的防控措施。Cap蛋白是PCV2的主要免疫原性蛋白,是近些年研究PCV2相关亚单位疫苗的首选抗原。目前市场上商品化疫苗主要是针对PCV2a、PCV2b基因型疫苗,研究证明PCV2a疫苗对PCV2d毒株能提供较好的保护作用。本研究内容主要研究PCV2b疫苗对目前国内流行的PCV2d基因型毒株是否具有较好的保护作用以及构建表达量更高的重组Cap蛋白,构建表达了 PCV2 Cap蛋白重组杆状病毒并进行了免疫原性研究。主要内容如下:1.通过对疑似PCV2的病猪组织病料进行分离鉴定以及小鼠致病性试验,分离到两株分别为P...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＰＣＲ扩增结果??
４９３ｂｐ??Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡｍａｒｋｅｒｌ－４?分别为?Ｘ４６?分离株、５１２３、ＰＣＶ２?阳性、水?ＰＣＲ?产物??图１－１?ＰＣＲ扩增结果??Ｍ．ＤＬ２０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ｌ￣４．Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?Ｘ４６、５１２３、ｔｈｅ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｏｆ?ＰＣＶ２?ａｎｄ?Ｈ２Ｏ??Ｆｉｇ．?１－１?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ??■?■?■??Ａ．分离株Ｘ４６?Ｂ．分离株５１２３?Ｃ．阴性对照??图１－２分离株Ｘ４６和５１２３间接免疫荧光检测??Ａ．Ｘ４６?ｓｔｒａｉｎ?Ｂ．５１２３?ｓｔｒａｉｎ?Ｃ．ＰＫ１５?ｃｅｌｌ?ｂｌａｎｋ??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ＩＦＡ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?Ｘ４６?ａｎｄ?５１２３??３．３分离病毒ＤＮＡ拷贝数的测定??应用Ｔａｑｍａｎ实时荧光定量ＰＣＲ的方法检测ＰＣＶ２分离株Ｘ４６和５１２３的不同代次病??毒ＤＮＡ拷贝数，进而判断病毒在细胞中的增殖情况，结果如图１－３所示，传代到２０代病??毒拷贝数趋于稳定，ＤＮＡ拷贝数分别约为：Ｘ４６，２．７８ｘｌ０１Ｑｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ；?５１２３，??２．３?３?ｘ?１?〇９ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ。??
分离株?Ｘ４６?和?５１２３?与?ＧｅｎＢａｎｋ?上的?８?株?ＰＣＶ２?（ＰＣＶ２ａ、ＰＣＶ２ｂ、ＰＣＶ２ｃ?和?ＰＣＶ２ｄ??各２株）全长序列进行比对分析。１０株ＰＣＶ２毒株全基因组序列构建遗传进化树，结果如??
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 石林,吴瑗,巴少波,刘正奎,陈琳,王磊,邵春艳,孙静,周莹姗,王晓杜,宋厚辉. 浙江农林大学学报. 2018(06)
[2]鉴别PCV2b与PCV2d基因亚型PCR方法的建立及应用[J]. 屈泰龙,严美君,葛猛,李润成,张家祥,余兴龙. 中国兽医科学. 2017(11)
[3]猪圆环病毒2型一步间接免疫荧光试验的建立及初步应用[J]. 宫婷,扈荣良. 中国动物传染病学报. 2017(05)
[4]猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测试剂盒的研制及应用[J]. 任方方,胡瑞丽,倪建平,许燕,李春华,赵笑,杜亚楠,赵凯. 上海农业学报. 2017(02)
[5]猪圆环病毒2型2015JS株的分离鉴定及全基因序列分析[J]. 徐祥兰,王小敏,曹东阳,茅爱华,汪伟,芮荣,何孔旺. 畜牧与兽医. 2016(10)
[6]昆虫杆状病毒表达系统研究进展及其在疫苗中的应用[J]. 梁璐琪. 畜禽业. 2014(10)
[7]杆状病毒表达系统在兽用亚单位疫苗领域应用的研究进展[J]. 刘春菊,任炜杰,王志亮. 中国畜牧兽医. 2013(09)
[8]PCR和IFA测定猪圆环病毒2型半数细胞培养感染量的比较[J]. 王林山,尹燕博,邹勇,何锡忠,韩芳婷,倪建平,赵本进,李春华. 上海农业学报. 2013(01)
[9]猪圆环病毒2型感染昆明小鼠模型的建立[J]. 苗岚飞,崔尚金,张超范,胡守萍,陈长木,张垚. 中国兽医科学. 2008(06)
[10]猪圆环病毒2型原位杂交检测技术的建立与应用[J]. 姚鑫,杨汉春,郭鑫,陈艳红,查振林. 畜牧兽医学报. 2007(02)
硕士论文
[1]河南PCV2的分离鉴定及Cap蛋白的表达与纯化[D]. 赵宝磊.河南农业大学 2017
本文编号：3303033
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＰＣＲ扩增结果??
４９３ｂｐ??Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡｍａｒｋｅｒｌ－４?分别为?Ｘ４６?分离株、５１２３、ＰＣＶ２?阳性、水?ＰＣＲ?产物??图１－１?ＰＣＲ扩增结果??Ｍ．ＤＬ２０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ｌ￣４．Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?Ｘ４６、５１２３、ｔｈｅ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｏｆ?ＰＣＶ２?ａｎｄ?Ｈ２Ｏ??Ｆｉｇ．?１－１?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ??■?■?■??Ａ．分离株Ｘ４６?Ｂ．分离株５１２３?Ｃ．阴性对照??图１－２分离株Ｘ４６和５１２３间接免疫荧光检测??Ａ．Ｘ４６?ｓｔｒａｉｎ?Ｂ．５１２３?ｓｔｒａｉｎ?Ｃ．ＰＫ１５?ｃｅｌｌ?ｂｌａｎｋ??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ＩＦＡ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?Ｘ４６?ａｎｄ?５１２３??３．３分离病毒ＤＮＡ拷贝数的测定??应用Ｔａｑｍａｎ实时荧光定量ＰＣＲ的方法检测ＰＣＶ２分离株Ｘ４６和５１２３的不同代次病??毒ＤＮＡ拷贝数，进而判断病毒在细胞中的增殖情况，结果如图１－３所示，传代到２０代病??毒拷贝数趋于稳定，ＤＮＡ拷贝数分别约为：Ｘ４６，２．７８ｘｌ０１Ｑｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ；?５１２３，??２．３?３?ｘ?１?〇９ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ。??
分离株?Ｘ４６?和?５１２３?与?ＧｅｎＢａｎｋ?上的?８?株?ＰＣＶ２?（ＰＣＶ２ａ、ＰＣＶ２ｂ、ＰＣＶ２ｃ?和?ＰＣＶ２ｄ??各２株）全长序列进行比对分析。１０株ＰＣＶ２毒株全基因组序列构建遗传进化树，结果如??
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 石林,吴瑗,巴少波,刘正奎,陈琳,王磊,邵春艳,孙静,周莹姗,王晓杜,宋厚辉. 浙江农林大学学报. 2018(06)
[2]鉴别PCV2b与PCV2d基因亚型PCR方法的建立及应用[J]. 屈泰龙,严美君,葛猛,李润成,张家祥,余兴龙. 中国兽医科学. 2017(11)
[3]猪圆环病毒2型一步间接免疫荧光试验的建立及初步应用[J]. 宫婷,扈荣良. 中国动物传染病学报. 2017(05)
[4]猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测试剂盒的研制及应用[J]. 任方方,胡瑞丽,倪建平,许燕,李春华,赵笑,杜亚楠,赵凯. 上海农业学报. 2017(02)
[5]猪圆环病毒2型2015JS株的分离鉴定及全基因序列分析[J]. 徐祥兰,王小敏,曹东阳,茅爱华,汪伟,芮荣,何孔旺. 畜牧与兽医. 2016(10)
[6]昆虫杆状病毒表达系统研究进展及其在疫苗中的应用[J]. 梁璐琪. 畜禽业. 2014(10)
[7]杆状病毒表达系统在兽用亚单位疫苗领域应用的研究进展[J]. 刘春菊,任炜杰,王志亮. 中国畜牧兽医. 2013(09)
[8]PCR和IFA测定猪圆环病毒2型半数细胞培养感染量的比较[J]. 王林山,尹燕博,邹勇,何锡忠,韩芳婷,倪建平,赵本进,李春华. 上海农业学报. 2013(01)
[9]猪圆环病毒2型感染昆明小鼠模型的建立[J]. 苗岚飞,崔尚金,张超范,胡守萍,陈长木,张垚. 中国兽医科学. 2008(06)
[10]猪圆环病毒2型原位杂交检测技术的建立与应用[J]. 姚鑫,杨汉春,郭鑫,陈艳红,查振林. 畜牧兽医学报. 2007(02)
硕士论文
[1]河南PCV2的分离鉴定及Cap蛋白的表达与纯化[D]. 赵宝磊.河南农业大学 2017
本文编号：3303033
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