血竭素高氯酸盐对成纤维细胞增殖的调控及其机制研究
发布时间：2021-07-26 07:45
血竭素高氯酸盐是从血竭中提取的血竭素通过成盐后形成的一种稳定物质。本实验通过体内、外研究,探究血竭素高氯酸盐在促进创伤修复过程中,对调控成纤维细胞增殖和相关蛋白表达的作用机制,为生肌类中药血竭治疗创伤修复提供一定的理论依据。在体外研究中,不同浓度的血竭素高氯酸盐（040μg/mL）作用于NIH/3T3细胞24 h后,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性。确定三个有效浓度后,选取该浓度用于细胞划痕实验和流式细胞术,检测血竭素高氯酸盐对细胞迁移和细胞周期的影响。确定最佳有效浓度后,检测药物干预后表皮生长因子受体（EGFR）、成纤维细胞生长因子受体（FGFR）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）/环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）、应激活化蛋白激酶（JNK）和胞内磷脂酰肌醇激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）磷酸化水平的变化,并且使用抑制剂和基因封闭的方法进行反向验证,最终确定血竭素高氯酸盐促进细胞增殖的作用机制。在体内研究中,将血竭素溶于凡士林制备膏剂,对大鼠背部皮肤进行机械打孔制备创伤模型后,实验组大鼠创口涂抹血竭素药膏。对照组大鼠创口...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
血竭素高氯酸盐对成纤维细胞中ERK通路的影响（n=3,xSD）
(A) (B)注：**、△△、##和●●表示 p<0.01，差异极显著。Note: **, △△, ## and ●● indicate that p<0.01, the difference is very significant.图 3-6 血竭素高氯酸盐对成纤维细胞中 MAPK 和 PI3K 通路的影响（n=3, x SD）Fig. 3-6 The effects of Dracorhodin Perchlorate on MAPK and PI3K signaling pathway infibroblast (n=3, x SD)3.7 相关通路抑制剂对血竭素高氯酸盐诱导的通路激活的影响在本实验中，主要使用了三种通路抑制剂（EGFR 抑制剂 AG1478，ERK 抑制剂 U0126，PI3K 抑制剂 LY294002），验证血竭素高氯酸盐诱导激活的相关通路之间的关系。如图 3-7A和 3-7B 所示，成纤维细胞在 AG1478 的预处理前提下，血竭素高氯酸盐将不再上调 EGFR 磷酸化（p>0.05），在对下游通路的检测中，发现在 EGFR 受到抑制时，血竭素高氯酸盐诱导ERK 和 PI3K 通路的活化也受到了抑制（p>0.05）。如图 3-8A 和 3-8B 所示同样的实验思路，成纤维细胞被 U0126 或 LY294002 预处理后，血竭素高氯酸盐诱导的 EGFR 通路活化并未受到影响，相比于用药前，EGFR 磷酸化水平仍有明显的上调（p<0.01）。U0126 明显抑制 ERK及其下游通路 CREB 活化（p<0.01），但是对 PI3K 通路没有明显影响（p>0.05）。如图 3-9A和 3-9B 所示同理 LY294002 能够抑制血竭素高氯酸盐诱导的 PI3K 通路及其下游通路
(A) (B)注： **、△△、##和●●表示 p<0.01，差异极显著。Note: **, △△, ## and ●● indicate that p<0.01, the difference is very significant.图 3-7 AG1478 对血竭素高氯酸盐诱导的相关蛋白通路激活的影响（n=3, x SD）Fig. 3-7 The effects of AG1478 on Dracorhodin Perchlorate-induced relative signaling pathactivation in fibroblast（n=3, x SD）
【参考文献】：
期刊论文
[1]瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的研究[J]. 吕经纬,王佳婧. 科技资讯. 2017(22)
[2]壳聚糖护肤液在皮肤瘢痕修复中的应用研究[J]. 鲁旺旺. 科技风. 2017(11)
[3]血竭活血化瘀作用的GC-MS代谢组学初步研究[J]. 鄯科明,滕中秋. 药物分析杂志. 2016(07)
[4]皮肤创伤修复研究进展[J]. 李晓康,王舒,于杨,李福秋,姚春丽. 中国中西医结合皮肤性病学杂志. 2016(01)
[5]医疗机构中药制剂现状研究及发展对策[J]. 王阶,乔夕瑶,林飞. 中国中药杂志. 2015(21)
[6]外用中药治疗皮肤创伤的研究进展[J]. 李龙剑,张艳,彭丽华,齐江彤,胡忠杰,高建青. 中国现代应用药学. 2015(10)
[7]正交试验优化麒麟血竭中血竭素的超声提取工艺[J]. 梁伟玲,张钦德,吴君. 中国生化药物杂志. 2015(04)
[8]精细化护理对预防皮肤创伤修复术后感染的作用[J]. 闵婷. 临床医药文献电子杂志. 2015(07)
[9]血竭提取物促进成纤维细胞增殖及胶原分泌[J]. 李丹,惠瑞,胡永武,韩岩,郭树忠. 中国组织工程研究. 2014(46)
[10]皮肤创伤修复机制及治疗方法研究进展[J]. 史佩娜,高梦娜,陶键敏,陈菲,潘统鹤,黄梓津,竺亚斌. 浙江医学. 2014 (15)
博士论文
[1]RXRα通过TGF-β/Smads信号通路对急性心梗大鼠心肌重塑及心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的调控[D]. 徐军霞.福建医科大学 2015
[2]Activin B在皮肤创伤的信号机制和温敏水凝胶在皮肤创伤的作用[D]. 张敏.南方医科大学 2013
硕士论文
[1]静电纺PVA-SbQ/zein载药纳米纤维创伤愈合材料的研究[D]. 崔静.江南大学 2015
[2]龙血竭联合康惠尔泡沫敷料治疗糖尿病合并Ⅱ、Ⅲ期压疮的临床研究[D]. 马乃荣.南京中医药大学 2012
[3]龙血竭对糖尿病大鼠烫伤创面修复作用的实验研究[D]. 张宪发.广西医科大学 2012
[4]三种中药对NIH-3T3细胞增殖及胶原合成影响[D]. 贾召锋.东北农业大学 2011
[5]防腐生肌膏促进创伤愈合的实验研究[D]. 戈胜.东北农业大学 2010
本文编号：3303145
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
血竭素高氯酸盐对成纤维细胞中ERK通路的影响（n=3,xSD）
(A) (B)注：**、△△、##和●●表示 p<0.01，差异极显著。Note: **, △△, ## and ●● indicate that p<0.01, the difference is very significant.图 3-6 血竭素高氯酸盐对成纤维细胞中 MAPK 和 PI3K 通路的影响（n=3, x SD）Fig. 3-6 The effects of Dracorhodin Perchlorate on MAPK and PI3K signaling pathway infibroblast (n=3, x SD)3.7 相关通路抑制剂对血竭素高氯酸盐诱导的通路激活的影响在本实验中，主要使用了三种通路抑制剂（EGFR 抑制剂 AG1478，ERK 抑制剂 U0126，PI3K 抑制剂 LY294002），验证血竭素高氯酸盐诱导激活的相关通路之间的关系。如图 3-7A和 3-7B 所示，成纤维细胞在 AG1478 的预处理前提下，血竭素高氯酸盐将不再上调 EGFR 磷酸化（p>0.05），在对下游通路的检测中，发现在 EGFR 受到抑制时，血竭素高氯酸盐诱导ERK 和 PI3K 通路的活化也受到了抑制（p>0.05）。如图 3-8A 和 3-8B 所示同样的实验思路，成纤维细胞被 U0126 或 LY294002 预处理后，血竭素高氯酸盐诱导的 EGFR 通路活化并未受到影响，相比于用药前，EGFR 磷酸化水平仍有明显的上调（p<0.01）。U0126 明显抑制 ERK及其下游通路 CREB 活化（p<0.01），但是对 PI3K 通路没有明显影响（p>0.05）。如图 3-9A和 3-9B 所示同理 LY294002 能够抑制血竭素高氯酸盐诱导的 PI3K 通路及其下游通路
(A) (B)注： **、△△、##和●●表示 p<0.01，差异极显著。Note: **, △△, ## and ●● indicate that p<0.01, the difference is very significant.图 3-7 AG1478 对血竭素高氯酸盐诱导的相关蛋白通路激活的影响（n=3, x SD）Fig. 3-7 The effects of AG1478 on Dracorhodin Perchlorate-induced relative signaling pathactivation in fibroblast（n=3, x SD）
【参考文献】：
期刊论文
[1]瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的研究[J]. 吕经纬,王佳婧. 科技资讯. 2017(22)
[2]壳聚糖护肤液在皮肤瘢痕修复中的应用研究[J]. 鲁旺旺. 科技风. 2017(11)
[3]血竭活血化瘀作用的GC-MS代谢组学初步研究[J]. 鄯科明,滕中秋. 药物分析杂志. 2016(07)
[4]皮肤创伤修复研究进展[J]. 李晓康,王舒,于杨,李福秋,姚春丽. 中国中西医结合皮肤性病学杂志. 2016(01)
[5]医疗机构中药制剂现状研究及发展对策[J]. 王阶,乔夕瑶,林飞. 中国中药杂志. 2015(21)
[6]外用中药治疗皮肤创伤的研究进展[J]. 李龙剑,张艳,彭丽华,齐江彤,胡忠杰,高建青. 中国现代应用药学. 2015(10)
[7]正交试验优化麒麟血竭中血竭素的超声提取工艺[J]. 梁伟玲,张钦德,吴君. 中国生化药物杂志. 2015(04)
[8]精细化护理对预防皮肤创伤修复术后感染的作用[J]. 闵婷. 临床医药文献电子杂志. 2015(07)
[9]血竭提取物促进成纤维细胞增殖及胶原分泌[J]. 李丹,惠瑞,胡永武,韩岩,郭树忠. 中国组织工程研究. 2014(46)
[10]皮肤创伤修复机制及治疗方法研究进展[J]. 史佩娜,高梦娜,陶键敏,陈菲,潘统鹤,黄梓津,竺亚斌. 浙江医学. 2014 (15)
博士论文
[1]RXRα通过TGF-β/Smads信号通路对急性心梗大鼠心肌重塑及心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的调控[D]. 徐军霞.福建医科大学 2015
[2]Activin B在皮肤创伤的信号机制和温敏水凝胶在皮肤创伤的作用[D]. 张敏.南方医科大学 2013
硕士论文
[1]静电纺PVA-SbQ/zein载药纳米纤维创伤愈合材料的研究[D]. 崔静.江南大学 2015
[2]龙血竭联合康惠尔泡沫敷料治疗糖尿病合并Ⅱ、Ⅲ期压疮的临床研究[D]. 马乃荣.南京中医药大学 2012
[3]龙血竭对糖尿病大鼠烫伤创面修复作用的实验研究[D]. 张宪发.广西医科大学 2012
[4]三种中药对NIH-3T3细胞增殖及胶原合成影响[D]. 贾召锋.东北农业大学 2011
[5]防腐生肌膏促进创伤愈合的实验研究[D]. 戈胜.东北农业大学 2010
本文编号：3303145
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3303145.html
