小反刍兽疫西藏07株H、F、M、P蛋白在昆虫细胞中的表达

发布时间：2021-08-03 04:44

　　本研究使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒西藏分离株Tibet07的H、F、M、P四个结构蛋白，并对其进行鉴定。扩增小反刍兽疫病毒Tibet07株H、F、M、P基因，克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中，构建重组穿梭质粒pFastBac-PPRV-H、F、M、P，转化DH10bac大肠杆菌感受态细胞，获得重组杆状病毒质粒Bacmid-PPRV-H、F、M、P，转染sf9细胞，获得重组杆状病毒。扩增重组杆状病毒至P3代，使用该杆状病毒以MOI=5的病毒量感染sf9细胞表达蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定H、F、M、P蛋白的表达。经鉴定各蛋白的条带与预期的分子质量大小相符。感染重组杆状病毒的昆虫细胞，经间接免疫荧光实验鉴定，均可见较强的荧光。结果表明，使用杆状病毒表达系统成功表达了小反刍兽疫病毒西藏分离株Tibet07的H、F、M、P蛋白，各蛋白均可与山羊PPR阳性血清发生特异性反应，表明各表达蛋白均有一定的反应原性。为进一步研究其生物学功能、筛选单抗、研究小反刍兽疫西藏分离株生物学特性等，奠定了实验基础。 

【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

成熟的PPRV结构图（引自刘拂晓毕业论文）

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统简介bacuLovirus expression system，B幼虫作为受体来表达目的蛋白的真点特异性转座使外源基因转座至状病毒的方法[84]，使用同源重组的为杆状病毒基因组英文全名为“baife Technologies 公司商品化，商品毒表达系统粒，具有多角体蛋白启动子，使Bac 载体有庆大霉素抗性（Gen+）FastBac CT-TOPO 载体图谱。

【参考文献】：
期刊论文
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[3]中国西藏小反刍兽疫病毒野生株China/Tib/Gej/07-30基质蛋白基因和融合蛋白基因的分子特征分析[J]. 包静月,赵文姬,王志亮,李林,吴国珍,吴晓东,刘春菊,王君玮,刘雨田,李金明,王英丽.  病毒学报. 2010(04)
[4]小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株F基因的克隆与原核表达[J]. 杨帆,窦永喜,朱学亮,骆学农,岳城,才学鹏.  中国兽医科学. 2009(06)
[5]小反刍兽疫研究进展[J]. 信爱国,杨仁标,向文彬.  中国预防兽医学报. 2003(02)

博士论文
[1]小反刍兽疫病毒样颗粒的构建及对小鼠免疫效力的评价[D]. 刘拂晓.吉林大学 2013
[2]小反刍兽疫病毒血凝素蛋白及其受体的研究[D]. 蒙学莲.中国农业科学院 2012



本文编号：3318957