维氏气单胞菌OmpW基因重组干酪乳杆菌初步应用
发布时间：2021-08-06 21:07
维氏气单胞菌（Aeromonas veronii,AV）是近年来发现的一种可引起人及多种水生生物发病的人-兽-鱼共患的病原菌,广泛存在于自然界水域、土壤和水生动物体中。外膜蛋白W（OmpW）作为维氏气单胞菌的黏附素,是一种潜在的保护性抗原,可以作为基因工程疫苗候选抗原进行试验。乳酸菌是一种公认的益生菌,能够耐受机体的防御机制,通过口服方式,进入机体内可大量存活,并且与肠道粘膜紧密相连,起到调节肠内菌群平衡、增强机体免疫力等益生功能。因此,研制以干酪乳杆菌作为维氏气单胞菌疫苗抗原呈递的载体有非常重要的意义。本研究将预防兽医学研究室保存的维氏气单胞菌OmpW基因重组干酪乳杆菌分泌表达型Lc-pPG612-OmpW和细胞表面表达型Lc-MCS-OmpW进行验证,通过PCR、双酶切和Western blotting验证OmpW基因在乳杆菌中的表达情况。结果显示,经PCR扩增出约600 bp的OmpW基因片段,两种重组乳杆菌表达的约22 kDa的蛋白均具有良好的反应原性。为检验构建的重组菌是否能诱导黏膜和系统免疫应答,本试验以鲫鱼作为试验动物进行免疫学试验。将Lc-pPG612-OmpW和Lc-...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒鉴定M：DNA标准分子量1-5：Lc-pPG612-OmpW基因PCR产物
15图 1-2 重组干酪乳杆菌的检测结果（A：Lc-pPG612-OmpW；B：Lc-MCS-OmpW）A：M：DNA 标准分子量；1-2：Lc-pPG612-OmpW 双酶切产物B：M：DNA 标准分子量；1-2：Lc-MCS-OmpW 双酶切产物Fig.1-2 The identification of recombinant Lc.casei(A: Lc-pPG612-OmpW; B: Lc-MCS-OmpW)A: M: DL5000 DNA Marker; 1-2: plasmid Lc-pPG612-OmpWB: M: DL5000 DNA Marker; 1-2: plasmid Lc-MCS-OmpW
.2.2 蛋白水平验证将重组干酪乳杆菌 Lc-MCS-OmpW 和 Lc-pPG612-OmpW 诱导表达后，利抗维氏气单胞菌 TH0426 株血清作为一抗，山羊抗小鼠 IgG 作为二抗，进estern blotting 鉴定，Lc-pPG612 进行诱导表达作为对照，在 22kDa 处出现印小与预期相符，表明重组干酪乳杆菌能表达目的蛋白。而 Lc-pPG612 空载明显条带，表明抗维氏气单胞菌血清能识别 OmpW 蛋白，结果见图 1-3。
本文编号：3326492
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒鉴定M：DNA标准分子量1-5：Lc-pPG612-OmpW基因PCR产物
15图 1-2 重组干酪乳杆菌的检测结果（A：Lc-pPG612-OmpW；B：Lc-MCS-OmpW）A：M：DNA 标准分子量；1-2：Lc-pPG612-OmpW 双酶切产物B：M：DNA 标准分子量；1-2：Lc-MCS-OmpW 双酶切产物Fig.1-2 The identification of recombinant Lc.casei(A: Lc-pPG612-OmpW; B: Lc-MCS-OmpW)A: M: DL5000 DNA Marker; 1-2: plasmid Lc-pPG612-OmpWB: M: DL5000 DNA Marker; 1-2: plasmid Lc-MCS-OmpW
.2.2 蛋白水平验证将重组干酪乳杆菌 Lc-MCS-OmpW 和 Lc-pPG612-OmpW 诱导表达后，利抗维氏气单胞菌 TH0426 株血清作为一抗，山羊抗小鼠 IgG 作为二抗，进estern blotting 鉴定，Lc-pPG612 进行诱导表达作为对照，在 22kDa 处出现印小与预期相符，表明重组干酪乳杆菌能表达目的蛋白。而 Lc-pPG612 空载明显条带，表明抗维氏气单胞菌血清能识别 OmpW 蛋白，结果见图 1-3。
本文编号：3326492
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