一株猪源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及耐药性、耐药基因的检测
发布时间：2021-08-07 20:09
为了确定发病母猪组织是否感染病原菌及调查病原菌耐药情况,试验对发病母猪组织进行细菌分离培养,经过培养观察、生化试验、16S rRNA测序确定分离菌株,对分离菌株进行药敏试验、小鼠致病性试验、耐药基因检测、常见血清型分型及毒力基因检测。结果表明:分离得到一株肺炎克雷伯氏菌。分离菌株的16S rRNA测序结果与NCBI上18株肺炎克雷伯氏菌参考菌株序列同源性均在99%以上。分离菌株接种在血琼脂培养基上会发生α溶血现象,且具有多重耐药性,携带四环素类tet耐药基因,氨基糖苷类aph（3′）-Ia、strA、strB耐药基因,磺胺类sul 1、sul 2耐药基因及超广谱β-内酰胺酶（ESBL）耐药基因blaSHV,与耐药表型结果一致。分离菌株血清型分型为K20型,含有ureA、wabG、uge毒力基因。在小鼠致病性试验中,以浓度为6.15×108cfu/mL的菌液进行攻毒,能够使小鼠在22 h内死亡,表明分离菌株对小鼠具有致病性。说明本试验所分离得到的猪源肺炎克雷伯氏菌具有严重的耐药性和强致病性。
【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(06)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
图1 分离菌株16S rRNA基因PCR扩增产物电泳结果
根据药敏试验结果,通过PCR扩增得到四类七种耐药基因,即四环素类(tet A)耐药基因、氨基糖苷类[aph(3′)-Ia、strA、strB]耐药基因、磺胺类(sul 1、sul 2)耐药基因以及β-内酰胺类(blaSHV)耐药基因,1%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,结果见图2。回收1～6号泳道的目的条带并测序,测序结果经过同源性比对分析发现,各耐药基因与GenBank上的参考序列(登录号:MH745929.1、CP028480.1、CP031883.1、CP025966.2、CP032227.1、CP032176.1、MH745930.1、CP022926.1、CP025636.1、CP020061.1、CP019160.1、MH715960.1、CP028389.2)同源性均达到99%以上。构建进化树分析(结果见图3),发现分离菌株携带的耐药基因与各参考序列亲缘关系相近,具有非常高的相似度,均属于同一分支,表明该菌株所携带的耐药基因序列比较保守。图3 分离菌株耐药基因与参考序列进化树
图3 分离菌株耐药基因与参考序列进化树
【参考文献】：
期刊论文
[1]3株水貂源致病性肺炎克雷伯氏菌的鉴定与耐药性分析[J]. 肖丽荣,周琦,张召兴,李巧玲,高桂生,贾青辉,史秋梅. 黑龙江畜牧兽医. 2018(22)
[2]羊源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定[J]. 谢宇舟,吴翠兰,李军,陶立,李常挺,彭昊,马春霞,潘艳. 今日畜牧兽医. 2018(01)
[3]一例肺炎克雷伯氏菌引起山羊死亡诊断报告[J]. 黄宇,何宏勇,李军,段振华,甘一波,唐第深,吴翠兰,闭炳芬,潘艳. 中国畜禽种业. 2018(01)
[4]一株牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定与耐药基因型检测[J]. 蒙正群,冷依伊,任梅渗,刘亚东,王印,姚学萍,杨泽晓. 浙江农业学报. 2017(04)
[5]牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及遗传进化分析[J]. 冯娜,高翔,肖敏,宁建刚,邢小勇,包世俊. 中国兽医科学. 2016(11)
[6]猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定[J]. 林星宇,王印,杨泽晓,姚学萍,胡凌,彭善珍,陈平,邬旭龙. 中国预防兽医学报. 2015(05)
[7]肺炎克雷伯氏菌强毒株的分离鉴定及16-23SrRNAITS序列分析[J]. 李富祥,李华春,赵德宏,王娟,姚俊,廖德芳,熊和丽,宋建领,胡骑. 中国畜牧兽医. 2015(02)
[8]10种常见细菌基因检测膜条的研制[J]. 朱飞舟,陈利玉,刘新发,田奇,谈成,欧阳方丹,吴正理,陈汉春. 微生物学杂志. 2011(04)
硕士论文
[1]貂源肺炎克雷伯氏菌血清型和毒力基因的检测及其致病性研究[D]. 王建莉.山东农业大学 2017
[2]NDM-1肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其对小鼠菌血症的治疗研究[D]. 路荣.吉林大学 2013
本文编号：3328457
【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(06)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
图1 分离菌株16S rRNA基因PCR扩增产物电泳结果
根据药敏试验结果,通过PCR扩增得到四类七种耐药基因,即四环素类(tet A)耐药基因、氨基糖苷类[aph(3′)-Ia、strA、strB]耐药基因、磺胺类(sul 1、sul 2)耐药基因以及β-内酰胺类(blaSHV)耐药基因,1%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,结果见图2。回收1～6号泳道的目的条带并测序,测序结果经过同源性比对分析发现,各耐药基因与GenBank上的参考序列(登录号:MH745929.1、CP028480.1、CP031883.1、CP025966.2、CP032227.1、CP032176.1、MH745930.1、CP022926.1、CP025636.1、CP020061.1、CP019160.1、MH715960.1、CP028389.2)同源性均达到99%以上。构建进化树分析(结果见图3),发现分离菌株携带的耐药基因与各参考序列亲缘关系相近,具有非常高的相似度,均属于同一分支,表明该菌株所携带的耐药基因序列比较保守。图3 分离菌株耐药基因与参考序列进化树
图3 分离菌株耐药基因与参考序列进化树
【参考文献】：
期刊论文
[1]3株水貂源致病性肺炎克雷伯氏菌的鉴定与耐药性分析[J]. 肖丽荣,周琦,张召兴,李巧玲,高桂生,贾青辉,史秋梅. 黑龙江畜牧兽医. 2018(22)
[2]羊源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定[J]. 谢宇舟,吴翠兰,李军,陶立,李常挺,彭昊,马春霞,潘艳. 今日畜牧兽医. 2018(01)
[3]一例肺炎克雷伯氏菌引起山羊死亡诊断报告[J]. 黄宇,何宏勇,李军,段振华,甘一波,唐第深,吴翠兰,闭炳芬,潘艳. 中国畜禽种业. 2018(01)
[4]一株牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定与耐药基因型检测[J]. 蒙正群,冷依伊,任梅渗,刘亚东,王印,姚学萍,杨泽晓. 浙江农业学报. 2017(04)
[5]牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及遗传进化分析[J]. 冯娜,高翔,肖敏,宁建刚,邢小勇,包世俊. 中国兽医科学. 2016(11)
[6]猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定[J]. 林星宇,王印,杨泽晓,姚学萍,胡凌,彭善珍,陈平,邬旭龙. 中国预防兽医学报. 2015(05)
[7]肺炎克雷伯氏菌强毒株的分离鉴定及16-23SrRNAITS序列分析[J]. 李富祥,李华春,赵德宏,王娟,姚俊,廖德芳,熊和丽,宋建领,胡骑. 中国畜牧兽医. 2015(02)
[8]10种常见细菌基因检测膜条的研制[J]. 朱飞舟,陈利玉,刘新发,田奇,谈成,欧阳方丹,吴正理,陈汉春. 微生物学杂志. 2011(04)
硕士论文
[1]貂源肺炎克雷伯氏菌血清型和毒力基因的检测及其致病性研究[D]. 王建莉.山东农业大学 2017
[2]NDM-1肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其对小鼠菌血症的治疗研究[D]. 路荣.吉林大学 2013
本文编号：3328457
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3328457.html
