表达猪端粒酶反转录酶转座子载体的构建及其在猪细胞永生化中的应用

发布时间：2021-08-11 20:56

　　细胞培养技术是细胞生物学研究、医学、病毒分离培养与疫苗研发等研究领域不可欠缺的常用工具。细胞系具有一定的体外增殖能力,主要包括自发永生化细胞系和癌基因转化细胞系,前者为正常细胞,但自然发生几率很低；后者的建立相对容易,但细胞的核型、表型、分化等具有不同程度的改变,而且因含癌基因、抗性基因、病毒序列等安全隐患。因此,建立不含癌基因、抗性基因和病毒序列的永生化细胞系具有很好的应用价值。端粒（telomere）是真核细胞染色体末端的特殊结构,与细胞分裂和衰老密切相关。端粒酶负责端粒的复制,由端粒RNA、端粒酶反转录酶（telomerase reverse transcriptase, TERT）与端粒酶相关蛋白组成。研究实验资料显示,导入外源TERT基因不仅可使原代细胞永生化,而且建立的永生化细胞系为正常细胞。基因导入方法主要有重组载体转染法和病毒载体转化法,前者基因转染效率较低,通常需用抗性筛选来获得稳定的细胞克隆；后者转导效率较高,但存在病毒序列等安全隐患。转座子（transposon）是细胞基因组内可移动序列,不仅可作为基因转移载体,而且基因转移效率较高,不需通过抗性筛选即可获得稳定表... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCR扩增产物的电泳分析

分别用转座子报告载体pTEG-GFP和pEGFP-N 1转染PK-15细胞，转染后24h在突光显微镜下观察，从图1-3中可以看到，两个载体转染细胞培养中中的GFP阳性细胞数达到70%,不仅说明载体构建正确，还说明猪EF-la启动子的转录活性与pEGFP-Nl中CMV强启动子相当。

图1-4 SB转座子单独或SB转座子系统介导的报告基因在GO与G7期整合效率检测 1-4 Detection of SB transposon-mediated reporter gene integration into porcine cells座子载体的构建与鉴定猪TERTcDNA扩增与测序鉴定T-PCR扩增的猪TERT cDNA为预期的3399bp (图1-5)。测序结果显示，的 TERTcDNA 与发表序列（GenBankaccession no:NM-001244300)相比，8、582碱基由0变为八,2169-2172碱基由丁0(3丁变为00^,其中2个核差异只引起1个氨基酸改变，无插入和缺失突变。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3336879