不同基因型肉仔鸡肝脏蛋白组学研究
发布时间：2021-08-15 15:17
社会经济的发展和人民生活水平的提高使人们更加注重畜产品的安全、美味和健康。在快速生长型肉鸡带来的负面影响的背景下，地方品种肉鸡以其肉质味道可口、营养健康受到广大消费者的偏爱。肝脏作为家禽代谢、免疫的重要器官，参与蛋白质、碳水化合物、脂肪代谢等各种生理生化反应。因此，肝脏可作为研究物质代谢合适的靶器官，肝脏表达所有蛋白质的整体研究对了解其代谢变化具有积极的意义。本试验采用蛋白质组学技术，建立14日龄、28日龄、42日龄AA肉鸡（公鸡）和庄河大骨鸡（公鸡）肝脏发育变化的蛋白质组图谱，通过不同品种、不同阶段蛋白质图谱差异研究，找出AA肉鸡和庄河大骨鸡肝脏不同发育阶段差异表达的蛋白质，并对差异表达的蛋白进行鉴定、分类、表达量聚类和蛋白质相互作用关系的网络分析，为揭示AA肉鸡和庄河大骨鸡生长发育及代谢调控等生命活动的分子机理奠定基础，为肉鸡选育起到积极的推动作用。试验结果显示AA肉鸡肝脏发育的三个阶段分别检测到了364个、442个、475个蛋白，大骨鸡肝脏发育三个阶段分别检测到了363个、435个、400个蛋白，说明AA肉鸡肝脏蛋白表达呈逐渐增多的趋势，在42日龄达到最高峰，而大骨鸡在28日龄达...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脂肪酸的生物合成过程
图 1.1 蛋白质浓度测定标准曲线Figure 1.1 Standard curve1.7 双向电泳（2-DE）分析1.7.1 肉仔鸡肝脏蛋白质 2-DE 条件的优化为得到较满意的 2-DE 图谱，蛋白点分离较好且清晰可见，本研究对肉仔鸡肝脏蛋白质 2-DE条件进行了摸索、调整和优化。最终得出 IPG 胶条选择 17cm 非线性胶条为最佳胶条，考马斯亮蓝 G-250 染色蛋白质最佳上样量为 500ug。1.7.2 肉仔鸡肝脏蛋白质 2-DE 分析(l) 从冰箱中取出蛋白样品，超声处理 30sec/次×4 次，充分溶解蛋白，超声后在冰浴中冷却 30sec，4℃，15000g 离心 10min。17cm IPG 胶条于室温解冻 20min。取水化上样液，室温融化后，加入2.5ul 40%Bio-lyte(pH3-10)，漩涡混匀。取水化上样液与蛋白样品溶液以 4:1 混匀为上样液。(2) 不断摸索条件后，确定 17cm 胶条上样体积为 420ul，蛋白含量为 500ug，吸取样品，缓缓加入聚焦槽中，注意样品内不能存有气泡，小心用镊子揭开胶条的保护膜，胶面朝下，胶条的+、﹣级应与聚焦盘的+、﹣级保持一致，使胶条与上样液充分接触，滴加矿物油覆盖胶条，盖好聚
图 2.1 不同日龄 AA 肉鸡肝脏 2-DE 蛋白质表达图谱。14 days，28 days，42 days 分别对应 14 日龄、28 日龄、42日龄。肝脏 3 个日龄分别检测到 364 个、442 个、475 个蛋白。每个样品上样量 500μg，CBBG-250 染色。图中数字标出的点为鉴定蛋白点。Figure 2.1 Profile of the 2-DE analysis of the liver of AA broiler at different developmental time Points.14 days,28days,42 days are the protein Profile corresponding to 14 days,28 days,42 days,respectively.There are 364, 442, and 475proteins to have been detected on 14 days,28 days,42 days. 500μg per each sample were subjected to 2-DE and stained byCBB G·250. The marked spots are identifed.
【参考文献】：
期刊论文
[1]日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中FAS基因表达的影响[J]. 张英杰,刘月琴,刘景云. 畜牧兽医学报. 2010(07)
[2]葡萄糖和胰岛素对鹅肝细胞脂肪酸合成酶活性及转录表达的影响[J]. 韩春春,王继文,符自英,李亮. 农业生物技术学报. 2009(04)
[3]中草药复方合剂对肉仔鸡鸡肉鲜味影响的研究[J]. 王昊,边连全,黎伟,陈禹. 饲料博览(技术版). 2008(01)
[4]日粮能量水平对生长育肥猪肌内脂肪含量以及脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表达的影响[J]. 刘作华,杨飞云,孔路军,周晓容,辜玉红,王孝友. 畜牧兽医学报. 2007(09)
[5]动物脂肪酸合成酶（FAS）基因表达的调控[J]. 颜新春,汪以真,许梓荣. 动物营养学报. 2002(02)
[6]猪重组生长激素对不同杂交肥育猪脂肪代谢调控的研究[J]. 熊文中,杨凤,周安国. 畜牧兽医学报. 2001(01)
[7]蛋白质组研究技术及其进展[J]. 俞利荣,曾嵘,夏其昌. 生命的化学. 1998(06)
[8]蛋白质的结构和生物合成[J]. 梁祖霞. 生物学教学. 1983(02)
本文编号：3344795
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脂肪酸的生物合成过程
图 1.1 蛋白质浓度测定标准曲线Figure 1.1 Standard curve1.7 双向电泳（2-DE）分析1.7.1 肉仔鸡肝脏蛋白质 2-DE 条件的优化为得到较满意的 2-DE 图谱，蛋白点分离较好且清晰可见，本研究对肉仔鸡肝脏蛋白质 2-DE条件进行了摸索、调整和优化。最终得出 IPG 胶条选择 17cm 非线性胶条为最佳胶条，考马斯亮蓝 G-250 染色蛋白质最佳上样量为 500ug。1.7.2 肉仔鸡肝脏蛋白质 2-DE 分析(l) 从冰箱中取出蛋白样品，超声处理 30sec/次×4 次，充分溶解蛋白，超声后在冰浴中冷却 30sec，4℃，15000g 离心 10min。17cm IPG 胶条于室温解冻 20min。取水化上样液，室温融化后，加入2.5ul 40%Bio-lyte(pH3-10)，漩涡混匀。取水化上样液与蛋白样品溶液以 4:1 混匀为上样液。(2) 不断摸索条件后，确定 17cm 胶条上样体积为 420ul，蛋白含量为 500ug，吸取样品，缓缓加入聚焦槽中，注意样品内不能存有气泡，小心用镊子揭开胶条的保护膜，胶面朝下，胶条的+、﹣级应与聚焦盘的+、﹣级保持一致，使胶条与上样液充分接触，滴加矿物油覆盖胶条，盖好聚
图 2.1 不同日龄 AA 肉鸡肝脏 2-DE 蛋白质表达图谱。14 days，28 days，42 days 分别对应 14 日龄、28 日龄、42日龄。肝脏 3 个日龄分别检测到 364 个、442 个、475 个蛋白。每个样品上样量 500μg，CBBG-250 染色。图中数字标出的点为鉴定蛋白点。Figure 2.1 Profile of the 2-DE analysis of the liver of AA broiler at different developmental time Points.14 days,28days,42 days are the protein Profile corresponding to 14 days,28 days,42 days,respectively.There are 364, 442, and 475proteins to have been detected on 14 days,28 days,42 days. 500μg per each sample were subjected to 2-DE and stained byCBB G·250. The marked spots are identifed.
【参考文献】：
期刊论文
[1]日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中FAS基因表达的影响[J]. 张英杰,刘月琴,刘景云. 畜牧兽医学报. 2010(07)
[2]葡萄糖和胰岛素对鹅肝细胞脂肪酸合成酶活性及转录表达的影响[J]. 韩春春,王继文,符自英,李亮. 农业生物技术学报. 2009(04)
[3]中草药复方合剂对肉仔鸡鸡肉鲜味影响的研究[J]. 王昊,边连全,黎伟,陈禹. 饲料博览(技术版). 2008(01)
[4]日粮能量水平对生长育肥猪肌内脂肪含量以及脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表达的影响[J]. 刘作华,杨飞云,孔路军,周晓容,辜玉红,王孝友. 畜牧兽医学报. 2007(09)
[5]动物脂肪酸合成酶（FAS）基因表达的调控[J]. 颜新春,汪以真,许梓荣. 动物营养学报. 2002(02)
[6]猪重组生长激素对不同杂交肥育猪脂肪代谢调控的研究[J]. 熊文中,杨凤,周安国. 畜牧兽医学报. 2001(01)
[7]蛋白质组研究技术及其进展[J]. 俞利荣,曾嵘,夏其昌. 生命的化学. 1998(06)
[8]蛋白质的结构和生物合成[J]. 梁祖霞. 生物学教学. 1983(02)
本文编号：3344795
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