蓝舌病病毒3型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定
发布时间：2021-08-18 05:41
蓝舌病（Bluetongue disease, BT）是由蓝舌病毒（Bluetongue virus, BTV）引起的非接触性虫媒传染病。绵羊、山羊、牛等家畜和野生反刍动物对该病毒易感,由于感染的血清型不同其临床表现也不尽相同,主要临床症状为高热、舌头变蓝和口腔粘膜水肿出血等。BTV主要分布在热带、亚热带和温带国家,与其节肢动物宿主的分布范围一致,该病毒主要通过库蠓等的叮咬进行传播。BTV属于呼肠孤病毒科环状病毒属,病毒粒子呈二十面体对称,无囊膜。该病毒的基因组由10个分节段的双链RNA组成,编码7种结构蛋白（VP1～VP7）和5种非结构蛋白（NS1～NS4和NS3a）。VP2和VP5蛋白构成了病毒的外层衣壳,其中VP2是主要型特异性抗原,对蓝舌病的血清型起决定性作用。本研究根据Genbank中已登录的血清3型蓝舌病病毒（BTV3） L2基因的OFR序列（登陆号：No.AJ585124）设计一对特异性引物,从感染BTV3的BHK-21细胞沉淀中提取RNA,然后进行RT-PCR扩增L2基因；将扩增后的L2基因分别克隆到原核表达载体pMal-c4X和真核表达载体pFastBacHTA上,获...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BTV3-L2基因RT-PCR扩增
长度 2880bp (图 2-1)。2.3.2重组质粒pMal-vp2的双酶切鉴定结果获得的重组质粒pMal-vp2经过EcoR I . Pst 1双酶切后，获得两条条带，大小分别为6600bp和2900bp,与预期长度符合（图2-2)。重组质粒的测序结果表明L2基因成功克隆到原核表达载体pM￡iI-c4X的及oR I、/VI酶切位点之间，并且L2基因序列与标准序列（No. AJ585124)完全一致。Ml 1 M5000 5000
以表达的pMal-c4X空载体为对照，HRP标记的抗MBP的MAb为-抗对纯化后的重组MBP-VP2进行western-blot分析，目的条张大小与预期相符（图2-3)，表明融合MBP-VP2蛋白已经成功表达并纯化。M 1■图2-3纯化重组原核VP2蛋白的westem-blot分析结果Fig.2-3 Westem-blot analysis of purifiedrecombinant VP2 expressed in E.coli.M: prestained protein Marker; 1: purifiedrecombinant VP2 protein2.4讨论有研究表明，BTV的血沿型与L2基因的变异有密切的关系，说明VP2蛋D是BTV血淸型的决定性抗原，|aj吋也可以诱导中和抗体的产生。因此，制备针对BTV3 VP2蛋llj的特异性印.克隆抗体可以为BTV3型特异性诊断方法的建立奠定基础。BTV3L2基因的OFR全长2880bp，其编码的￥?2班1'_1包含780个氨基酸残基，大小为112Kd。本实验采WpMAL-c4X原核表达载体成功地表达了VP2进内
【参考文献】：
期刊论文
[1]蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立[J]. 耿宏伟,秦永丽,李俊平,杨涛,孙恩成,刘霓红,白安斌,徐青元,王凌凤,赵晶,覃绍敏,林俊,郭怡璠,吴东来. 中国预防兽医学报. 2012(05)
[2]抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 魏鹏,孙恩成,刘霓红,杨涛,徐青元,秦永丽,赵晶,冯瑜菲,王文世,张翠云,吴东来. 中国预防兽医学报. 2012(05)
[3]蓝舌病研究综述[J]. 翁善钢. 广东畜牧兽医科技. 2012(01)
[4]抗蓝舌病病毒VP7和NS2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 秦永丽,孙恩成,耿宏伟,杨涛,刘霓红,赵晶,王凌凤,徐青元,蔡绪禹,李文京,吴东来. 中国预防兽医学报. 2011(10)
[5]蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[J]. 王凌凤,杨涛,孙恩成,耿宏伟,秦永丽,赵晶,蔡绪禹,刘霓红,李文京,吴东来. 中国预防兽医学报. 2011(06)
[6]呼肠孤病毒科的系统发育分析[J]. 高芳銮,范国成,谢荔岩,黄美英,吴祖建. 激光生物学报. 2008(04)
[7]环状病毒病研究进展[J]. 潘亮. 福建畜牧兽医. 2007(S1)
[8]蓝舌病的研究进展[J]. 刘景利,孙建宏,管雪婷,曾祥伟. 畜牧兽医科技信息. 2005(09)
[9]蓝舌病及其防制研究进展[J]. 孙好学,白建,庞全海. 畜禽业. 2005(03)
[10]动物蓝舌病毒L2基因克隆及序列分析比较[J]. 张以芳,朱建波,刘建平,向文彬,信爱国,张念祖,殷震. 中国兽医学报. 2002(06)
硕士论文
[1]蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[D]. 秦永丽.中国农业科学院 2012
[2]蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D]. 王凌凤.中国农业科学院 2011
[3]蓝舌病病毒VP7蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备[D]. 宋红梅.西北农林科技大学 2010
本文编号：3349309
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BTV3-L2基因RT-PCR扩增
长度 2880bp (图 2-1)。2.3.2重组质粒pMal-vp2的双酶切鉴定结果获得的重组质粒pMal-vp2经过EcoR I . Pst 1双酶切后，获得两条条带，大小分别为6600bp和2900bp,与预期长度符合（图2-2)。重组质粒的测序结果表明L2基因成功克隆到原核表达载体pM￡iI-c4X的及oR I、/VI酶切位点之间，并且L2基因序列与标准序列（No. AJ585124)完全一致。Ml 1 M5000 5000
以表达的pMal-c4X空载体为对照，HRP标记的抗MBP的MAb为-抗对纯化后的重组MBP-VP2进行western-blot分析，目的条张大小与预期相符（图2-3)，表明融合MBP-VP2蛋白已经成功表达并纯化。M 1■图2-3纯化重组原核VP2蛋白的westem-blot分析结果Fig.2-3 Westem-blot analysis of purifiedrecombinant VP2 expressed in E.coli.M: prestained protein Marker; 1: purifiedrecombinant VP2 protein2.4讨论有研究表明，BTV的血沿型与L2基因的变异有密切的关系，说明VP2蛋D是BTV血淸型的决定性抗原，|aj吋也可以诱导中和抗体的产生。因此，制备针对BTV3 VP2蛋llj的特异性印.克隆抗体可以为BTV3型特异性诊断方法的建立奠定基础。BTV3L2基因的OFR全长2880bp，其编码的￥?2班1'_1包含780个氨基酸残基，大小为112Kd。本实验采WpMAL-c4X原核表达载体成功地表达了VP2进内
【参考文献】：
期刊论文
[1]蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立[J]. 耿宏伟,秦永丽,李俊平,杨涛,孙恩成,刘霓红,白安斌,徐青元,王凌凤,赵晶,覃绍敏,林俊,郭怡璠,吴东来. 中国预防兽医学报. 2012(05)
[2]抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 魏鹏,孙恩成,刘霓红,杨涛,徐青元,秦永丽,赵晶,冯瑜菲,王文世,张翠云,吴东来. 中国预防兽医学报. 2012(05)
[3]蓝舌病研究综述[J]. 翁善钢. 广东畜牧兽医科技. 2012(01)
[4]抗蓝舌病病毒VP7和NS2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 秦永丽,孙恩成,耿宏伟,杨涛,刘霓红,赵晶,王凌凤,徐青元,蔡绪禹,李文京,吴东来. 中国预防兽医学报. 2011(10)
[5]蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[J]. 王凌凤,杨涛,孙恩成,耿宏伟,秦永丽,赵晶,蔡绪禹,刘霓红,李文京,吴东来. 中国预防兽医学报. 2011(06)
[6]呼肠孤病毒科的系统发育分析[J]. 高芳銮,范国成,谢荔岩,黄美英,吴祖建. 激光生物学报. 2008(04)
[7]环状病毒病研究进展[J]. 潘亮. 福建畜牧兽医. 2007(S1)
[8]蓝舌病的研究进展[J]. 刘景利,孙建宏,管雪婷,曾祥伟. 畜牧兽医科技信息. 2005(09)
[9]蓝舌病及其防制研究进展[J]. 孙好学,白建,庞全海. 畜禽业. 2005(03)
[10]动物蓝舌病毒L2基因克隆及序列分析比较[J]. 张以芳,朱建波,刘建平,向文彬,信爱国,张念祖,殷震. 中国兽医学报. 2002(06)
硕士论文
[1]蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[D]. 秦永丽.中国农业科学院 2012
[2]蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D]. 王凌凤.中国农业科学院 2011
[3]蓝舌病病毒VP7蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备[D]. 宋红梅.西北农林科技大学 2010
本文编号：3349309
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3349309.html
