重组绵羊FSH在CHO悬浮细胞中的表达及其初步应用
发布时间：2021-08-27 22:06
促卵泡激素FSH是由垂体前叶嗜碱性细胞合成并分泌的一种糖蛋白类促性腺激素,由α亚基和β亚基通过非共价键结合而形成,常用于增进动物的快速繁殖,诱导雌性动物超数排卵。兽用促卵泡激素FSH多数是采用从垂体中提取,人用FSH一般是采用尿源性的FSH,即从绝经期妇女尿液中提取,但是生产成本依旧较高,且纯度无法达到99%。如果进一步提高纯度,成本只会更加昂贵。因此本研究使用重组DNA技术对重组绵羊FSH进行分泌表达并对其进行应用研究。首先对重组绵羊促卵泡激素FSH序列进行设计,构建重组表达质粒pcDNA3.1-FSHβα。构建好的重组表达质粒通过电转染至CHO-K1细胞中,转染后利用G418筛选出单克隆细胞M-FSH-βα-B31A4,单克隆细胞表达重组绵羊FSH的含量达到350 ng/mL。使用5 L生物反应器对单克隆细胞进行培养,培养68 h收集细胞上清液。之后采用分子量为10 kD的膜包对细胞上清液超滤浓缩,得到531ng/mL的重组绵羊促卵泡激素FSHβα。重组绵羊促卵泡激素FSHβα制备完成后,采用多次皮下注射雌鼠的方法进行试验,注射一次后,间隔一天再次进行注射,72 h后对雌鼠进行眼球...
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
核酸同源性分析
Fig 1 Nucleic acid homology analysis氨基酸密码子优化前后同源性为100%。图2 氨基酸同源性分析Fig 2 Amino acid homology analysis经过密码子优化后，氨基酸与之前序列同源性为100%，则接着进行信号肽分
图 3 信号肽分析Fig 3 Signal PeptideAnalysis结果显示，该段氨基酸序列具有信号肽，从 S-score 值大致可以确定，信前 20 位，然后观察 S-score 较陡峭的位置和有较高位置的 Y-score，确定
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人促卵泡激素与来曲唑联合治疗多囊卵巢综合征的效果[J]. 曲丽君. 河南医学研究. 2019(04)
[2]重组促卵泡激素对波尔山羊超数排卵效果的影响[J]. 杨彦玲,操玉平. 中国草食动物科学. 2019(01)
[3]补肾调经汤治疗肾阴虚型多囊卵巢综合征疗效及对患者血清促卵泡激素的影响[J]. 周立,李淑荣. 陕西中医. 2018(11)
[4]性激素替代疗法应用于更年期妇女保健中的疗效[J]. 杨晓华. 中外女性健康研究. 2018(19)
[5]炔雌醇环丙孕酮与氧孕烯炔雌醇对多囊卵巢综合征高雄激素血症的治疗作用[J]. 黄秀秀. 实用妇科内分泌杂志(电子版). 2018(14)
[6]SNP位点rs6858698对慢性淋巴细胞白血病易感性的影响[J]. 武佳玉,刘松,王晓月. 基础医学与临床. 2018(05)
[7]重组人促卵泡激素联合氯米芬治疗多囊卵巢综合征的临床研究[J]. 李友云. 现代药物与临床. 2018(02)
[8]重组人促卵泡激素与重组促卵泡素β在控制性超促排卵中的疗效[J]. 吴茜雅,杨军,曾晓霞,吴淑卿. 广东医学. 2016(01)
[9]黄芩查耳酮异构酶基因的克隆和生物信息学分析[J]. 郭双双,程林,杨利民,刘翠晶,韩梅. 中草药. 2015(10)
[10]FSH研究进展[J]. 华荣茂,曾斌. 江西科技师范大学学报. 2014(06)
博士论文
[1]SDPR在乳腺癌发生发展中发挥的作用及机制[D]. 田垚.天津医科大学 2018
[2]Armored RNA技术在登革热病毒及白血病BCR-ABL1p210/p190融合基因检测中的应用研究[D]. 付煜.北京协和医学院 2018
硕士论文
[1]OsMKK1和OsMKK6互作蛋白的筛选与鉴定[D]. 胡浕.华中农业大学 2018
[2]水稻灌浆期耐热性关键候选基因的筛选及CRISPR载体构建[D]. 王志美.江西农业大学 2018
[3]肠道病毒-D68型3C/3D蛋白引起的细胞线粒体应激及其对病毒感染的影响[D]. 杨泽宁.北京协和医学院 2018
[4]绵羊HSP60基因在不同组织的定位表达及相关功能验证[D]. 祁磊.吉林农业大学 2018
[5]IGFBP4在软骨细胞分化过程中的作用研究[D]. 王腾飞.北京协和医学院 2018
[6]产NDM型碳青霉烯酶大肠埃希菌的耐药机制及流行病学研究[D]. 孙鹏飞.南京医科大学 2017
[7]绵羊卵泡发育中AMH、FSHR、LHR基因的表达特征分析[D]. 蒋香菊.石河子大学 2014
[8]肿瘤抑制蛋白DLG1与APC的结合机理研究[D]. 李华.上海交通大学 2012
[9]用于流感疫苗生产的MDCK细胞无血清单细胞悬浮培养体系的开发[D]. 黄锭.华东理工大学 2010
[10]绵羊同期发情技术研究[D]. 杨红卫.甘肃农业大学 2004
本文编号：3367181
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
核酸同源性分析
Fig 1 Nucleic acid homology analysis氨基酸密码子优化前后同源性为100%。图2 氨基酸同源性分析Fig 2 Amino acid homology analysis经过密码子优化后，氨基酸与之前序列同源性为100%，则接着进行信号肽分
图 3 信号肽分析Fig 3 Signal PeptideAnalysis结果显示，该段氨基酸序列具有信号肽，从 S-score 值大致可以确定，信前 20 位，然后观察 S-score 较陡峭的位置和有较高位置的 Y-score，确定
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人促卵泡激素与来曲唑联合治疗多囊卵巢综合征的效果[J]. 曲丽君. 河南医学研究. 2019(04)
[2]重组促卵泡激素对波尔山羊超数排卵效果的影响[J]. 杨彦玲,操玉平. 中国草食动物科学. 2019(01)
[3]补肾调经汤治疗肾阴虚型多囊卵巢综合征疗效及对患者血清促卵泡激素的影响[J]. 周立,李淑荣. 陕西中医. 2018(11)
[4]性激素替代疗法应用于更年期妇女保健中的疗效[J]. 杨晓华. 中外女性健康研究. 2018(19)
[5]炔雌醇环丙孕酮与氧孕烯炔雌醇对多囊卵巢综合征高雄激素血症的治疗作用[J]. 黄秀秀. 实用妇科内分泌杂志(电子版). 2018(14)
[6]SNP位点rs6858698对慢性淋巴细胞白血病易感性的影响[J]. 武佳玉,刘松,王晓月. 基础医学与临床. 2018(05)
[7]重组人促卵泡激素联合氯米芬治疗多囊卵巢综合征的临床研究[J]. 李友云. 现代药物与临床. 2018(02)
[8]重组人促卵泡激素与重组促卵泡素β在控制性超促排卵中的疗效[J]. 吴茜雅,杨军,曾晓霞,吴淑卿. 广东医学. 2016(01)
[9]黄芩查耳酮异构酶基因的克隆和生物信息学分析[J]. 郭双双,程林,杨利民,刘翠晶,韩梅. 中草药. 2015(10)
[10]FSH研究进展[J]. 华荣茂,曾斌. 江西科技师范大学学报. 2014(06)
博士论文
[1]SDPR在乳腺癌发生发展中发挥的作用及机制[D]. 田垚.天津医科大学 2018
[2]Armored RNA技术在登革热病毒及白血病BCR-ABL1p210/p190融合基因检测中的应用研究[D]. 付煜.北京协和医学院 2018
硕士论文
[1]OsMKK1和OsMKK6互作蛋白的筛选与鉴定[D]. 胡浕.华中农业大学 2018
[2]水稻灌浆期耐热性关键候选基因的筛选及CRISPR载体构建[D]. 王志美.江西农业大学 2018
[3]肠道病毒-D68型3C/3D蛋白引起的细胞线粒体应激及其对病毒感染的影响[D]. 杨泽宁.北京协和医学院 2018
[4]绵羊HSP60基因在不同组织的定位表达及相关功能验证[D]. 祁磊.吉林农业大学 2018
[5]IGFBP4在软骨细胞分化过程中的作用研究[D]. 王腾飞.北京协和医学院 2018
[6]产NDM型碳青霉烯酶大肠埃希菌的耐药机制及流行病学研究[D]. 孙鹏飞.南京医科大学 2017
[7]绵羊卵泡发育中AMH、FSHR、LHR基因的表达特征分析[D]. 蒋香菊.石河子大学 2014
[8]肿瘤抑制蛋白DLG1与APC的结合机理研究[D]. 李华.上海交通大学 2012
[9]用于流感疫苗生产的MDCK细胞无血清单细胞悬浮培养体系的开发[D]. 黄锭.华东理工大学 2010
[10]绵羊同期发情技术研究[D]. 杨红卫.甘肃农业大学 2004
本文编号：3367181
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