变异猪伪狂犬病病毒自然感染仔猪的病理组织学研究
发布时间：2021-08-29 14:33
为了解伪狂犬病病毒（PRV）变异株对自然感染仔猪的组织病理损伤,对自然感染发病仔猪进行病理剖检、细菌分离、病毒PCR鉴定、病毒分离培养、病毒粒子观察、基因序列分析及病理组织学观察,证实该发病仔猪为典型的PRV病毒变异株感染发病。病理剖检和病理组织学检查结果显示,发病仔猪脑、心脏、肝、脾、肺、肾等主要器官组织可见典型的猪伪狂犬病剖检病变和病理组织学变化。脑实质中小血管扩张充血,大量胶质细胞浸润,形成明显的血管套和噬神经元现象;肝索紊乱、肝细胞坏死;全身免疫器官淋巴细胞减少等。同时发现PRV在发病仔猪全身分布广泛,且组织中病原含量与组织病理损伤程度密切相关。结果表明,自然发病仔猪感染的PRV变异毒株属于强毒株,具有较强的致病性。
【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(10)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
发病仔猪的病理剖检Figure1AutopsylesionsofdiseasedpigletA、E：发病仔猪临床症状；B、C、D、F、G、H：分别为发病仔猪的肝、脾、肺、脑、肾和扁桃体；→：典型剖检病变发生处
10期郑琳等：变异猪伪狂犬病病毒自然感染仔猪的病理组织学研究第图7发病仔猪不同器官组织的病理切片观察（HE染色）Figure7Pathologicalsectionresultsofdifferentorgansindiseasedpiglet（HEstain）A、A′：脑组织；B、B′：心脏；C、C′：肝；D、D′：脾；E、E′：肺；F、F′：肾；G、G′：淋巴结；H、H′：扁桃体；I、I′：胸腺；“→”典型组织病变发生处。A，A′：Brains；B，B′：Hearts；C，C′：Livers；D，D′：Spleens；E，E′：Lungs；F，F′：Kidneys；G，G′：Lymphnodes；H，H′：Tonsils；I，I′：Thymus；“→”Loca-tionoftypicaltissuelesions.ABCA′B′C′GHIG′H′I′DEFD′E′F′200×200×200×200×200×100×400×400×100×200×100×200×200×200×200×200×100×100×1307
中国兽医科学第50卷图3PRVFJLY201709株感染Vero细胞产生的CPE情况（200×）Figure3CytopathogeniceffectsofVerocellsinfectedwithPRVFJLY201709strainA：对照组Vero细胞；B：病毒感染的Vero细胞。A：NormalVerocells；B：InfectedVerocells.图2发病仔猪组织样品CSFV、PRRSV、PCV-2和PRV的PCR或RT-PCR检测结果Figure2PCR/RT-PCRresultsofCSFV，PRRSV，PCV-2andPRVindiseasedpiglettissuesamplesM：DNA分子质量标准；1：阴性对照；2～5：PRV、CSFV、PRRSV和PCV2。M：DL2000DNAMarker；1：Negativecontrol；2—5：PRV，CSFV，PRRSVandPCV2.果为阳性，在400bp左右有一特异性条带，与预期结果相符。其余病原检测结果均为阴性（图2）。2.4病毒的分离鉴定2.4.1病毒的分离培养将PRV检测为阳性的发病仔猪脑组织匀浆液经0.22m滤器过滤除菌后，接种Vero细胞，36h后细胞开始出现圆缩、聚集，48h后出现典型的拉网CPE，有合胞体出现（图3B），对照组细胞形态正常（图3A）。利用gE特异性引物对培养物进行PCR鉴定，能够扩增到预期片段，表明能从病料中分离出PRV野毒株，将其命名为FJLY201709株。2.4.2病毒粒子的电镜观察将出现CPE的Vero细胞进行超薄切片电镜观察可见，细胞内分布有多个直径为100nm左右、外观呈球形带有囊膜的较大病毒粒子，核心电子致密度高，为典型的伪狂犬病病毒特征（图4）。2.4.3gE基因的序列分析通过PCR扩增获得了与预期大小相一致的约1755bp的DNA片段（图5）。将回收的PCR产物连接于pMD19-T载体中送Invitrogen
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪伪狂犬病病毒变异株（Fujian-LY）人工感染小鼠动物模型的建立[J]. 范克伟,何沙,林青青,郑琳,杨守深,刘建奎,林宏彬,宋洲洋,余佳,戴爱玲,杨小燕. 中国兽医学报. 2019(08)
[2]伪狂犬病病毒变异株Fujian-LY对生长育肥猪的致病性研究[J]. 范克伟,林青青,郑琳,刘建奎,杨守深,李晓华,戴爱玲,杨小燕,张小芸,焦瑞雪,何沙,陈冠果. 中国兽医科学. 2019(04)
[3]Pathogenicity of a currently circulating Chinese variant pseudorabies virus in pigs[J]. Qing-Yuan Yang,Zhe Sun,Fei-Fei Tan,Ling-Hua Guo,Yu-Zhou Wang,Juan Wang,Zhi-Yan Wang,Li-Lin Wang,Xiang-Dong Li,Yan Xiao,Ke-Gong Tian. World Journal of Virology. 2016(01)
[4]闽西地区猪伪狂犬病病毒变异株gE基因新变异序列鉴定[J]. 范克伟,杨小燕,杨守深,吴德峰,江丹丹,闫娜娜,戴爱玲. 中国兽医学报. 2015(12)
[5]猪伪狂犬病毒变异株（Fujian-LY）对免疫仔猪的致病性研究[J]. 范克伟,戴爱玲,吴德峰,方来杉,黄元华,黄思琼,杨小燕. 中国兽医学报. 2015(11)
[6]猪源伪狂犬病病毒福建龙岩分离株的鉴定及其TK基因和gE基因的分子特征[J]. 范克伟,戴爱玲,李晓华,吴德峰,江丹丹,闫娜娜,杨小燕. 中国兽医科学. 2015(10)
[7]PCV2-PRV-PRRSV-CSFV多重PCR检测方法的建立[J]. 左奕,王建永,袁万哲,孙继国. 中国兽医科学. 2015(08)
[8]貂源伪狂犬病病毒的分离鉴定及gE基因分子特征[J]. 芮萍,刘曜综,马增军,王秋悦,杨彩然,刘谢荣. 畜牧兽医学报. 2015(07)
[9]广西野生动物伪狂犬病毒感染情况调查及gE基因序列分析[J]. 覃绍敏,刘金凤,陈凤莲,陈月妃,莫亚生,李常挺,吴健敏. 中国预防兽医学报. 2015(05)
[10]虎源伪狂犬病毒的鉴定及gB基因分析[J]. 李元果,高晓龙,桑晓宇,王海军,张成林,王爱荣,于志君,任志广,郑学星,冯娜,王铁成,杨松涛,黄耕,高玉伟,夏咸柱,胡永浩. 中国病原生物学杂志. 2014(12)
本文编号：3370831
【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(10)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
发病仔猪的病理剖检Figure1AutopsylesionsofdiseasedpigletA、E：发病仔猪临床症状；B、C、D、F、G、H：分别为发病仔猪的肝、脾、肺、脑、肾和扁桃体；→：典型剖检病变发生处
10期郑琳等：变异猪伪狂犬病病毒自然感染仔猪的病理组织学研究第图7发病仔猪不同器官组织的病理切片观察（HE染色）Figure7Pathologicalsectionresultsofdifferentorgansindiseasedpiglet（HEstain）A、A′：脑组织；B、B′：心脏；C、C′：肝；D、D′：脾；E、E′：肺；F、F′：肾；G、G′：淋巴结；H、H′：扁桃体；I、I′：胸腺；“→”典型组织病变发生处。A，A′：Brains；B，B′：Hearts；C，C′：Livers；D，D′：Spleens；E，E′：Lungs；F，F′：Kidneys；G，G′：Lymphnodes；H，H′：Tonsils；I，I′：Thymus；“→”Loca-tionoftypicaltissuelesions.ABCA′B′C′GHIG′H′I′DEFD′E′F′200×200×200×200×200×100×400×400×100×200×100×200×200×200×200×200×100×100×1307
中国兽医科学第50卷图3PRVFJLY201709株感染Vero细胞产生的CPE情况（200×）Figure3CytopathogeniceffectsofVerocellsinfectedwithPRVFJLY201709strainA：对照组Vero细胞；B：病毒感染的Vero细胞。A：NormalVerocells；B：InfectedVerocells.图2发病仔猪组织样品CSFV、PRRSV、PCV-2和PRV的PCR或RT-PCR检测结果Figure2PCR/RT-PCRresultsofCSFV，PRRSV，PCV-2andPRVindiseasedpiglettissuesamplesM：DNA分子质量标准；1：阴性对照；2～5：PRV、CSFV、PRRSV和PCV2。M：DL2000DNAMarker；1：Negativecontrol；2—5：PRV，CSFV，PRRSVandPCV2.果为阳性，在400bp左右有一特异性条带，与预期结果相符。其余病原检测结果均为阴性（图2）。2.4病毒的分离鉴定2.4.1病毒的分离培养将PRV检测为阳性的发病仔猪脑组织匀浆液经0.22m滤器过滤除菌后，接种Vero细胞，36h后细胞开始出现圆缩、聚集，48h后出现典型的拉网CPE，有合胞体出现（图3B），对照组细胞形态正常（图3A）。利用gE特异性引物对培养物进行PCR鉴定，能够扩增到预期片段，表明能从病料中分离出PRV野毒株，将其命名为FJLY201709株。2.4.2病毒粒子的电镜观察将出现CPE的Vero细胞进行超薄切片电镜观察可见，细胞内分布有多个直径为100nm左右、外观呈球形带有囊膜的较大病毒粒子，核心电子致密度高，为典型的伪狂犬病病毒特征（图4）。2.4.3gE基因的序列分析通过PCR扩增获得了与预期大小相一致的约1755bp的DNA片段（图5）。将回收的PCR产物连接于pMD19-T载体中送Invitrogen
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪伪狂犬病病毒变异株（Fujian-LY）人工感染小鼠动物模型的建立[J]. 范克伟,何沙,林青青,郑琳,杨守深,刘建奎,林宏彬,宋洲洋,余佳,戴爱玲,杨小燕. 中国兽医学报. 2019(08)
[2]伪狂犬病病毒变异株Fujian-LY对生长育肥猪的致病性研究[J]. 范克伟,林青青,郑琳,刘建奎,杨守深,李晓华,戴爱玲,杨小燕,张小芸,焦瑞雪,何沙,陈冠果. 中国兽医科学. 2019(04)
[3]Pathogenicity of a currently circulating Chinese variant pseudorabies virus in pigs[J]. Qing-Yuan Yang,Zhe Sun,Fei-Fei Tan,Ling-Hua Guo,Yu-Zhou Wang,Juan Wang,Zhi-Yan Wang,Li-Lin Wang,Xiang-Dong Li,Yan Xiao,Ke-Gong Tian. World Journal of Virology. 2016(01)
[4]闽西地区猪伪狂犬病病毒变异株gE基因新变异序列鉴定[J]. 范克伟,杨小燕,杨守深,吴德峰,江丹丹,闫娜娜,戴爱玲. 中国兽医学报. 2015(12)
[5]猪伪狂犬病毒变异株（Fujian-LY）对免疫仔猪的致病性研究[J]. 范克伟,戴爱玲,吴德峰,方来杉,黄元华,黄思琼,杨小燕. 中国兽医学报. 2015(11)
[6]猪源伪狂犬病病毒福建龙岩分离株的鉴定及其TK基因和gE基因的分子特征[J]. 范克伟,戴爱玲,李晓华,吴德峰,江丹丹,闫娜娜,杨小燕. 中国兽医科学. 2015(10)
[7]PCV2-PRV-PRRSV-CSFV多重PCR检测方法的建立[J]. 左奕,王建永,袁万哲,孙继国. 中国兽医科学. 2015(08)
[8]貂源伪狂犬病病毒的分离鉴定及gE基因分子特征[J]. 芮萍,刘曜综,马增军,王秋悦,杨彩然,刘谢荣. 畜牧兽医学报. 2015(07)
[9]广西野生动物伪狂犬病毒感染情况调查及gE基因序列分析[J]. 覃绍敏,刘金凤,陈凤莲,陈月妃,莫亚生,李常挺,吴健敏. 中国预防兽医学报. 2015(05)
[10]虎源伪狂犬病毒的鉴定及gB基因分析[J]. 李元果,高晓龙,桑晓宇,王海军,张成林,王爱荣,于志君,任志广,郑学星,冯娜,王铁成,杨松涛,黄耕,高玉伟,夏咸柱,胡永浩. 中国病原生物学杂志. 2014(12)
本文编号：3370831
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