USP5靶向IRF3负向调控抗病毒天然免疫应答及其机制研究
发布时间：2021-08-29 16:21
天然免疫是宿主抵抗病毒入侵的第一道防线,病毒核酸可以被模式识别受体（pattern recognition receptors,PRRs）识别,活化转录因子IRF3,IRF3被激活后发生磷酸化和二聚化后入核,进而形成有活性的转录复合体,启动Ⅰ型干扰素（Type Ⅰ Interferon,IFN-I）的基因转录,继而诱导大量IFN-I依赖的抗病毒蛋白,从而起到抗病毒作用。但同时IFN-I的过量产生会导致许多自身免疫性疾病及自身炎症性疾病的发生,所以IFN-I的表达及下游信号的活化必须受到精确调控。过去十年来的研究已充分证明翻译后修饰,尤其是泛素化修饰,在激活和调节IFN-I信号转导中起关键作用。而去泛素化酶（deubiquitinases,DUB）是与泛素化相关的一类蛋白酶,它能够逆转底物蛋白质的泛素化修饰,从而调节细胞功能。在抗病毒天然免疫中相较于E3泛素连接酶介导的泛素化修饰,去泛素化酶的相关研究仍然较少,很多参与调控抗病毒免疫的DUB分子还未被发现。在本课题中我们试图找到一些能够参与调控抗病毒天然免疫的DUB分子,为感染性疾病的诊治提供新的靶点。通过比对GEO数据库中VSV病毒感染...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．?ＵＳＰ５在ＲＮＡ病毒感染后ｍＲＮＡ表达水平下调
为研宄ＲＮＡ病毒感染是否会下调ＵＳＰ５的蛋白水平的表达。我们选择了?Ａ５４９和??ＩＢＭＭ细胞作为验证细胞，来检测ＶＳＶ病毒感染时ＵＳＰ５的蛋白表达是否受到影响。我们??发现在感染ＶＳＶ后，Ａ５４９细胞和ＩＢＭＭ细胞中的ＵＳＰ５蛋白表达水平发生下调（图３）。??ＩＢＭＭ?ＶＳＶ?Ａ５４９?ＶＳＶ??０?２?４?６?８?（ｈ）?０?４?８?（ｈ）??ＵＳＰ５?一一一＾—一?ＵＳＰ５???ａ－Ｔｕｂｕｌｉｎ?ａ－Ｔｕｂｕｌｉｎ「響鑛―??图３．?ＵＳＰ５在ＲＮＡ病毒感染后蛋白表达水平下调。Ａ５４９细胞和ＩＢＭＭ细胞分别感染ＶＳＶ?（ＭＯＩ??０．１），ＷＢ检测ＵＳＰ５的蛋白表达水平。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＵＳＰ５?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｗｉｔｈ?ＲＮＡ?ｖｉｒｕｓ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．?Ａ５４９?ａｎｄ?ＩＢＭＭ?ｗｅｒｅ??ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＶＳＶ?（ＭＯＩ?０．１），?ａｎｄ?ＷＢ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＵＳＰ５．??本节中我们分析了?ＶＳＶ和ＺＩＫＡ病毒感染的ＤＵＢ表达谱，得到了许多和抗病毒免疫??相关的ＤＵＢ分子。我们发现一个ＤＵＢ分子ＵＳＰ５在病毒感染细胞中表达丰度很高，并且??在病毒感染后表达水平发生显著下调，ＲＴ－ｑＰＣＲ以及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ验证了在ＲＮＡ病毒ＳｅＶ，??ＶＳＶ和ＷＳＮ感染后的Ａ５４９
表达了?ＵＳＰ５和对照质粒，然后感染低浓度ＳｅＶ－ｅＧＦＰ和ＶＳＶ－ｅＧＦＰ，利用荧光显微镜观察??并拍摄病毒感染８ｈ后的焚光照片，发现在ＳｅＶ－ｅＧＦＰ病毒感染时过表达ＵＳＰ５的ＨＥＫ２９３Ｔ??细胞中的荧光信号强于转染对照质粒的ＨＥＫ２９３Ｔ细胞（图４，?Ａ），在ＶＳＶ－ｅＧＦＰ病毒感??染时，结果相同（图４，?Ａ）。同时利用流式细胞仪分析，在３ｘｌ０４个细胞中将表达ｅＧＦＰ细??胞的作为阳性细胞，这群阳性细胞所占总细胞的百分比为阳性率，比较ＳｅＶ－ｅＧＦＰ和ＶＳＶ－??ｅＧＦＰ?感染时，转染?ＵＳＰ５?与对照质粒对阳性率的影响，发现在?ＳｅＶ－ｅＧＦＰ?感染时，?ＵＳＰ５?过??表达的ＨＥＫ２９３Ｔ细胞ｅＧＦＰ阳性率高于转染对照质粒的ＨＥＫ２９３Ｔ细胞，感染峰向右侧偏??移，在ＶＳＶ－ｅＧＦＰ病毒感染时，结果相同（图４，?Ｂ）。之后在ＨＥＫ２９３Ｔ细胞上瞬时高表达??了?ＵＳＰ５后分别感染ＳｅＶ、ＶＳＶ和ＷＳＮ，?ＲＴ－ｑＰＣＲ检测病毒载量。结果表明病毒感染后??高表达ＵＳＰ５的细胞中病毒的载量明显高于对照组（图４，?Ｃ），证明了过表达ＵＳＰ５促进??病毒的复制。??Ａ?ＥＶ?ＵＳＰ５?ＥＶ?ＵＳＰ５??ＳｅＶ－ｅＧＦＰ?ＶＳＶ－ｅＧＦＰ??ｑ?物嫌?ｕｎｔｒｅａｔｅｄ????ＥＶ??ＵＳＰ５?—ｖｉｒｕｓ??＞ＧＦＰ?ｓｕｂｓｅｌ?ｅＧＦＰ??一?１１．５?ｒＪ?丨丨?１９．３??ｃ?？？?？？?Ｖ?？＊?？？?ｙ?Ｊ??ｇ?ＳｅＶ－ｅＧＦＰ??ｕ?？？?｜?Ｉ?｜．…’■??ｅＧＦＰ?ｓｕｂｓｅｔ＂?ｅＧＦＰ?ｓｕｂｉｅｉ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]去泛素化酶在病毒感染中的调控作用[J]. 夏思墨,刘翔,杨正东,徐胜. 中国免疫学杂志. 2019(06)
[2]Japanese Encephalitis Virus NS1’ Protein Antagonizes Interferon Beta Production[J]. Dengyuan Zhou,Fan Jia,Qiuyan Li,Luping Zhang,Zheng Chen,Zikai Zhao,Min Cui,Yunfeng Song,Huanchun Chen,Shengbo Cao,Jing Ye. Virologica Sinica. 2018(06)
[3]天然免疫DNA模式识别受体的抗感染研究进展[J]. 周荣云,何珊,朱美芹,朱建中. 中国动物传染病学报. 2018(05)
[4]去泛素化酶USP3在细胞中的功能作用及其研究进展[J]. 盛旭楠,马洪昌,李江林,彭光旭,叶茂. 基因组学与应用生物学. 2018(07)
[5]干扰素基因刺激蛋白信号通路与感染性及自身免疫性疾病的相关性研究进展[J]. 王容,黄国锦. 广西医学. 2018(05)
[6]USP3在DNA损伤修复及抗感染免疫中的研究进展[J]. 李则明,唐博,何松青. 临床医药文献电子杂志. 2018(04)
[7]干扰素刺激基因的抗病毒机制[J]. 白思宇,杨倩,仇华吉. 微生物学报. 2018(03)
[8]病毒感染激活TLRs和RLRs介导的IFN信号通路研究进展[J]. 常秋燕,周小凯,马鹏,马晓霞,冯玉萍. 动物医学进展. 2017(07)
[9]RLRs家族中RIG-I和MDA-5的研究进展[J]. 翟景波,吕昌龙. 微生物学免疫学进展. 2017(01)
[10]A20 inhibits lipopolysaccharide-induced inflammation in enterocytes[J]. Cui-Fang Zheng,Jie-Ru Shi,Ying Huang,Sheng-Nan Wang. World Journal of Gastrointestinal Pharmacology and Therapeutics. 2016(04)
博士论文
[1]USP21负调控STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路的激活功能及其机制的研究[D]. 陈云飞.华东师范大学 2014
[2]IRF3的SUMO化和泛素化修饰调节病毒诱导I型干扰素产生的机制[D]. 冉勇.武汉大学 2013
[3]细胞抗病毒天然免疫信号转导的调控机制[D]. 李颖.武汉大学 2011
[4]OTUB1和OTUB2对细胞抗病毒信号转导的调控机制[D]. 李姝.武汉大学 2010
硕士论文
[1]去泛素化酶复合体USP1-UAF1在抗病毒固有免疫反应中的作用及分子机制[D]. 余仲夏.山东大学 2017
[2]USP18对干扰素α和干扰素λ抗病毒信号通路的影响及意义[D]. 朱战涛.河北医科大学 2014
[3]泛素特异性蛋白酶25调节Ⅰ型干扰素信号通路的分子机制[D]. 钟会娟.华中农业大学 2013
本文编号：3370983
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．?ＵＳＰ５在ＲＮＡ病毒感染后ｍＲＮＡ表达水平下调
为研宄ＲＮＡ病毒感染是否会下调ＵＳＰ５的蛋白水平的表达。我们选择了?Ａ５４９和??ＩＢＭＭ细胞作为验证细胞，来检测ＶＳＶ病毒感染时ＵＳＰ５的蛋白表达是否受到影响。我们??发现在感染ＶＳＶ后，Ａ５４９细胞和ＩＢＭＭ细胞中的ＵＳＰ５蛋白表达水平发生下调（图３）。??ＩＢＭＭ?ＶＳＶ?Ａ５４９?ＶＳＶ??０?２?４?６?８?（ｈ）?０?４?８?（ｈ）??ＵＳＰ５?一一一＾—一?ＵＳＰ５???ａ－Ｔｕｂｕｌｉｎ?ａ－Ｔｕｂｕｌｉｎ「響鑛―??图３．?ＵＳＰ５在ＲＮＡ病毒感染后蛋白表达水平下调。Ａ５４９细胞和ＩＢＭＭ细胞分别感染ＶＳＶ?（ＭＯＩ??０．１），ＷＢ检测ＵＳＰ５的蛋白表达水平。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＵＳＰ５?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｗｉｔｈ?ＲＮＡ?ｖｉｒｕｓ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．?Ａ５４９?ａｎｄ?ＩＢＭＭ?ｗｅｒｅ??ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＶＳＶ?（ＭＯＩ?０．１），?ａｎｄ?ＷＢ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＵＳＰ５．??本节中我们分析了?ＶＳＶ和ＺＩＫＡ病毒感染的ＤＵＢ表达谱，得到了许多和抗病毒免疫??相关的ＤＵＢ分子。我们发现一个ＤＵＢ分子ＵＳＰ５在病毒感染细胞中表达丰度很高，并且??在病毒感染后表达水平发生显著下调，ＲＴ－ｑＰＣＲ以及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ验证了在ＲＮＡ病毒ＳｅＶ，??ＶＳＶ和ＷＳＮ感染后的Ａ５４９
表达了?ＵＳＰ５和对照质粒，然后感染低浓度ＳｅＶ－ｅＧＦＰ和ＶＳＶ－ｅＧＦＰ，利用荧光显微镜观察??并拍摄病毒感染８ｈ后的焚光照片，发现在ＳｅＶ－ｅＧＦＰ病毒感染时过表达ＵＳＰ５的ＨＥＫ２９３Ｔ??细胞中的荧光信号强于转染对照质粒的ＨＥＫ２９３Ｔ细胞（图４，?Ａ），在ＶＳＶ－ｅＧＦＰ病毒感??染时，结果相同（图４，?Ａ）。同时利用流式细胞仪分析，在３ｘｌ０４个细胞中将表达ｅＧＦＰ细??胞的作为阳性细胞，这群阳性细胞所占总细胞的百分比为阳性率，比较ＳｅＶ－ｅＧＦＰ和ＶＳＶ－??ｅＧＦＰ?感染时，转染?ＵＳＰ５?与对照质粒对阳性率的影响，发现在?ＳｅＶ－ｅＧＦＰ?感染时，?ＵＳＰ５?过??表达的ＨＥＫ２９３Ｔ细胞ｅＧＦＰ阳性率高于转染对照质粒的ＨＥＫ２９３Ｔ细胞，感染峰向右侧偏??移，在ＶＳＶ－ｅＧＦＰ病毒感染时，结果相同（图４，?Ｂ）。之后在ＨＥＫ２９３Ｔ细胞上瞬时高表达??了?ＵＳＰ５后分别感染ＳｅＶ、ＶＳＶ和ＷＳＮ，?ＲＴ－ｑＰＣＲ检测病毒载量。结果表明病毒感染后??高表达ＵＳＰ５的细胞中病毒的载量明显高于对照组（图４，?Ｃ），证明了过表达ＵＳＰ５促进??病毒的复制。??Ａ?ＥＶ?ＵＳＰ５?ＥＶ?ＵＳＰ５??ＳｅＶ－ｅＧＦＰ?ＶＳＶ－ｅＧＦＰ??ｑ?物嫌?ｕｎｔｒｅａｔｅｄ????ＥＶ??ＵＳＰ５?—ｖｉｒｕｓ??＞ＧＦＰ?ｓｕｂｓｅｌ?ｅＧＦＰ??一?１１．５?ｒＪ?丨丨?１９．３??ｃ?？？?？？?Ｖ?？＊?？？?ｙ?Ｊ??ｇ?ＳｅＶ－ｅＧＦＰ??ｕ?？？?｜?Ｉ?｜．…’■??ｅＧＦＰ?ｓｕｂｓｅｔ＂?ｅＧＦＰ?ｓｕｂｉｅｉ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]去泛素化酶在病毒感染中的调控作用[J]. 夏思墨,刘翔,杨正东,徐胜. 中国免疫学杂志. 2019(06)
[2]Japanese Encephalitis Virus NS1’ Protein Antagonizes Interferon Beta Production[J]. Dengyuan Zhou,Fan Jia,Qiuyan Li,Luping Zhang,Zheng Chen,Zikai Zhao,Min Cui,Yunfeng Song,Huanchun Chen,Shengbo Cao,Jing Ye. Virologica Sinica. 2018(06)
[3]天然免疫DNA模式识别受体的抗感染研究进展[J]. 周荣云,何珊,朱美芹,朱建中. 中国动物传染病学报. 2018(05)
[4]去泛素化酶USP3在细胞中的功能作用及其研究进展[J]. 盛旭楠,马洪昌,李江林,彭光旭,叶茂. 基因组学与应用生物学. 2018(07)
[5]干扰素基因刺激蛋白信号通路与感染性及自身免疫性疾病的相关性研究进展[J]. 王容,黄国锦. 广西医学. 2018(05)
[6]USP3在DNA损伤修复及抗感染免疫中的研究进展[J]. 李则明,唐博,何松青. 临床医药文献电子杂志. 2018(04)
[7]干扰素刺激基因的抗病毒机制[J]. 白思宇,杨倩,仇华吉. 微生物学报. 2018(03)
[8]病毒感染激活TLRs和RLRs介导的IFN信号通路研究进展[J]. 常秋燕,周小凯,马鹏,马晓霞,冯玉萍. 动物医学进展. 2017(07)
[9]RLRs家族中RIG-I和MDA-5的研究进展[J]. 翟景波,吕昌龙. 微生物学免疫学进展. 2017(01)
[10]A20 inhibits lipopolysaccharide-induced inflammation in enterocytes[J]. Cui-Fang Zheng,Jie-Ru Shi,Ying Huang,Sheng-Nan Wang. World Journal of Gastrointestinal Pharmacology and Therapeutics. 2016(04)
博士论文
[1]USP21负调控STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路的激活功能及其机制的研究[D]. 陈云飞.华东师范大学 2014
[2]IRF3的SUMO化和泛素化修饰调节病毒诱导I型干扰素产生的机制[D]. 冉勇.武汉大学 2013
[3]细胞抗病毒天然免疫信号转导的调控机制[D]. 李颖.武汉大学 2011
[4]OTUB1和OTUB2对细胞抗病毒信号转导的调控机制[D]. 李姝.武汉大学 2010
硕士论文
[1]去泛素化酶复合体USP1-UAF1在抗病毒固有免疫反应中的作用及分子机制[D]. 余仲夏.山东大学 2017
[2]USP18对干扰素α和干扰素λ抗病毒信号通路的影响及意义[D]. 朱战涛.河北医科大学 2014
[3]泛素特异性蛋白酶25调节Ⅰ型干扰素信号通路的分子机制[D]. 钟会娟.华中农业大学 2013
本文编号：3370983
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