H3N2型流感病毒感染MDCK细胞应答蛋白的筛选及验证
发布时间：2021-08-30 02:41
流行性感冒（简称流感）是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染疾病,传播迅速且极易造成大规模爆发与流行,而接种疫苗是预防流感病毒传播的主要措施。近年来随着全球流感防控能力建设的加快以及对流感疫苗产品质量需求的提高,国外已有基于不同类型细胞基质的流感疫苗相继获批上市,而国内的流感疫苗还仍然完全依赖于鸡胚进行生产,目前MDCK细胞基质流感疫苗是国内疫苗研发的主要方向,但在细胞基质流感疫苗研发中有关病毒感染细胞机制的研究较少。本研究以MDCK细胞与H3N2型流感病毒株（NYMCX-223A）为研究对象,应用蛋白质组学、免疫荧光染色、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分析筛选出了MDCK细胞在感染H3N2型流感病毒株过程中的差异表达蛋白,为深入了解MDCK细胞与A型流感病毒的互作机制奠定了基础,获得以下研究结果:1.通过iTRAQ定量蛋白质组学测定未感染和以MOI=1的H3N2型流感病毒感染12h的MDCK细胞中的蛋白质,共鉴定出374种差异表达蛋白质,其中表达量上调的差异表达蛋白质有51种,表达量下调的差异表达蛋白质有323种。2.通过对iTRAQ定量蛋白质组学数据进行统计学、GO富集与KEGG富...
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A型流感病毒结构简图
4合，使流感病毒吸附于宿主细胞表面。唾液酸受体分为α-2,3型和α-2,6型两种半乳糖苷受体[48]，α-2,3型半乳糖苷受体与人源流感病毒HA结合，主要存在于人类上呼吸道；α-2,6型半乳糖苷受体与禽流感病毒HA结合，广泛存在于人类下呼吸道及禽类胃肠道[49]。A型流感病毒的HA蛋白易发生突变，从而导致流感病毒与唾液酸受体的结合方式也随之发生改变，也有研究表明一些A型流感病毒可同时与α-2,3型和α-2,6型两种唾液酸半乳糖苷受体结合[50]。（FromZhangJiantao,etal.2019）图1-2流感病毒复制周期示意图Fig.1-2Replicationcycleofaninfluenzavirus流感病毒吸附于宿主细胞表面后，经内吞作用侵入宿主细胞，然后被网格蛋白包裹形成初级内体。初级内体在向细胞核靠近过程中被酸化形成次级内体，而次级内体中的低pH使流感病毒HA蛋白构象发生改变，导致流感病毒包膜与内体膜融合，从而使流感病毒在细胞质中完成脱壳。在流感病毒脱壳过程中，离子通道蛋白M2被激活并使流感病毒内部酸化，流感病毒RNP复合物与基质蛋白M1分离后被转运至细胞核中进行流感病毒RNA的转录与复制[51]。流感病毒RNP复合物在进入细胞核后，通过RNA聚合酶复合体加工转录形成流感病毒mRNA，其过程大致为PB2识别宿主细胞mRNA帽子结构并与之结
101.3流感病毒感染激活的细胞信号转导通路细胞信号转导通路是指细胞外的信号分子经细胞膜传递信息至细胞内发挥效应的一系列酶促反应通路，大量研究表明病毒在宿主细胞中的复制与增殖都依赖于细胞信号转导通路，病毒在感染细胞后将刺激信号传递至细胞核内，启动遗传物质复制和蛋白质合成功能，通过合成与病毒相关的蛋白以此调控病毒复制。流感病毒感染细胞改变了许多涉及细胞重要生理功能的信号转导通路，目前已确定流感病毒感染细胞可激活PI3K/Akt、NF-κB、PKC/PKR、TLR/RIG-1和MAPK等五种细胞信号转导通路[70]，如图1-3所示。这些信号转导通路影响流感病毒的侵入、复制、增殖及凋亡等流感病毒生命周期过程，同时还参与宿主细胞抗病毒免疫应答过程[71-78]。（FromGaurPratibha,etal.2011）图1-3流感病毒感染细胞激活的信号通路Fig.1-3HostcellmachinerygetsactivatedduringinfluenzainfectionandleadstotriggerSignalingpathways.1.3.1PI3K/Akt通路PI3K是磷脂酰肌醇-3-激酶的简称，广泛存在于各种细胞中，其功能主要为
【参考文献】：
期刊论文
[1]Risk assessment on the epidemics of human infection with a novel avian influenza A （H7N9） virus in Jiangsu Province, China[J]. Wendong Liu,Yefei Zhu,Xian Qi,Ke Xu,Aihua Ge,Hong Ji,Jing Ai,Changjun Bao,Fenyang Tang,Minghao Zhou. The Journal of Biomedical Research. 2013(03)
[2]Phylogenetic Analysis of the Non-structural （NS） Gene of Influenza A Viruses Isolated in Kazakhstan in 2002-2009[J]. Andrey Bogoyavlenskiy,Vladimir Berezin,Alexey Prilipov,Ilya Korotetskiy,Irina Zaitseva,Aydyn Kydyrmanov,Kobey Karamedin,Nailya Ishmukhametova,Saule Asanova,Marat Sayatov,Kainar Zhumatov. Virologica Sinica. 2011(06)
[3]Structure and Function of the NS1 Protein of Influenza A Virus[J]. Dongzi LIN~1 Jingfang LAN~2 Zhizhen ZHANG~1* 1 Department of Biochemistry and Molecular Biology,Guangdong Medical College,Zhanjiang 524023,China;2 Department of Clinical Laboratory,Hejin People’s Hospital,Hejin 043300,China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(03)
本文编号：3371897
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A型流感病毒结构简图
4合，使流感病毒吸附于宿主细胞表面。唾液酸受体分为α-2,3型和α-2,6型两种半乳糖苷受体[48]，α-2,3型半乳糖苷受体与人源流感病毒HA结合，主要存在于人类上呼吸道；α-2,6型半乳糖苷受体与禽流感病毒HA结合，广泛存在于人类下呼吸道及禽类胃肠道[49]。A型流感病毒的HA蛋白易发生突变，从而导致流感病毒与唾液酸受体的结合方式也随之发生改变，也有研究表明一些A型流感病毒可同时与α-2,3型和α-2,6型两种唾液酸半乳糖苷受体结合[50]。（FromZhangJiantao,etal.2019）图1-2流感病毒复制周期示意图Fig.1-2Replicationcycleofaninfluenzavirus流感病毒吸附于宿主细胞表面后，经内吞作用侵入宿主细胞，然后被网格蛋白包裹形成初级内体。初级内体在向细胞核靠近过程中被酸化形成次级内体，而次级内体中的低pH使流感病毒HA蛋白构象发生改变，导致流感病毒包膜与内体膜融合，从而使流感病毒在细胞质中完成脱壳。在流感病毒脱壳过程中，离子通道蛋白M2被激活并使流感病毒内部酸化，流感病毒RNP复合物与基质蛋白M1分离后被转运至细胞核中进行流感病毒RNA的转录与复制[51]。流感病毒RNP复合物在进入细胞核后，通过RNA聚合酶复合体加工转录形成流感病毒mRNA，其过程大致为PB2识别宿主细胞mRNA帽子结构并与之结
101.3流感病毒感染激活的细胞信号转导通路细胞信号转导通路是指细胞外的信号分子经细胞膜传递信息至细胞内发挥效应的一系列酶促反应通路，大量研究表明病毒在宿主细胞中的复制与增殖都依赖于细胞信号转导通路，病毒在感染细胞后将刺激信号传递至细胞核内，启动遗传物质复制和蛋白质合成功能，通过合成与病毒相关的蛋白以此调控病毒复制。流感病毒感染细胞改变了许多涉及细胞重要生理功能的信号转导通路，目前已确定流感病毒感染细胞可激活PI3K/Akt、NF-κB、PKC/PKR、TLR/RIG-1和MAPK等五种细胞信号转导通路[70]，如图1-3所示。这些信号转导通路影响流感病毒的侵入、复制、增殖及凋亡等流感病毒生命周期过程，同时还参与宿主细胞抗病毒免疫应答过程[71-78]。（FromGaurPratibha,etal.2011）图1-3流感病毒感染细胞激活的信号通路Fig.1-3HostcellmachinerygetsactivatedduringinfluenzainfectionandleadstotriggerSignalingpathways.1.3.1PI3K/Akt通路PI3K是磷脂酰肌醇-3-激酶的简称，广泛存在于各种细胞中，其功能主要为
【参考文献】：
期刊论文
[1]Risk assessment on the epidemics of human infection with a novel avian influenza A （H7N9） virus in Jiangsu Province, China[J]. Wendong Liu,Yefei Zhu,Xian Qi,Ke Xu,Aihua Ge,Hong Ji,Jing Ai,Changjun Bao,Fenyang Tang,Minghao Zhou. The Journal of Biomedical Research. 2013(03)
[2]Phylogenetic Analysis of the Non-structural （NS） Gene of Influenza A Viruses Isolated in Kazakhstan in 2002-2009[J]. Andrey Bogoyavlenskiy,Vladimir Berezin,Alexey Prilipov,Ilya Korotetskiy,Irina Zaitseva,Aydyn Kydyrmanov,Kobey Karamedin,Nailya Ishmukhametova,Saule Asanova,Marat Sayatov,Kainar Zhumatov. Virologica Sinica. 2011(06)
[3]Structure and Function of the NS1 Protein of Influenza A Virus[J]. Dongzi LIN~1 Jingfang LAN~2 Zhizhen ZHANG~1* 1 Department of Biochemistry and Molecular Biology,Guangdong Medical College,Zhanjiang 524023,China;2 Department of Clinical Laboratory,Hejin People’s Hospital,Hejin 043300,China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(03)
本文编号：3371897
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