修饰性hIL-2的大规模表达、纯化及动物安全试验研究

发布时间：2021-09-01 23:00

　　白细胞介素-2（interleukin-2, IL-2）是一种免疫增强剂,在机体抗感染、抗肿瘤等方面发挥重要作用。但IL-2具有毒副作用,临床应用效果受到一定影响。科学家一直致力于通过其结构的改变,减少副作用。本实验室苗利光博士等研制出一种修饰性人白细胞介素2（mhIL-2）,通过修饰IL-2的氨基酸序列,使修饰后的IL-2失去与CD25亚基的结合能力,显著提升了IL-2免疫增强作用。本试验利用BSM盐培养基,对含有IL-2基因的GS115毕赤酵母菌工程菌进行大规模发酵表达研究。发现pH值4.8、甲醇浓度3.5%、温度27℃时发酵效果最好,经过72h诱导表达,可在发酵上清中得到高剂量的mhIL-2,经SDS-PAGE和hIL-2ELISA方法检测,mhIL-2含量占上清中总蛋白的27%,其含量为0.84mg/mL。采用AKTA蛋白纯化仪,利用离子交换层析和凝胶过滤层析方法,对mhIL-2大规模发酵表达产物进行分离纯化研究,依次经过乙酸钠-乙酸缓冲体系离子交换法和乙酸钠-氯化镁缓冲液凝胶过滤脱盐,SDS-PAGE和凝胶成像系统分析发现mhIL-2的纯度为95%。通过CTLL-2细胞株和M... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同发酵时间表达产物SDS-PAGE分析

第3种缓冲液凝胶过滤结果

7纯化样品SDS-PAGE电泳Fig3.7SDS-PAGEofpurifiedsample

【参考文献】：
期刊论文
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[2]白细胞介素-2及其应用的研究进展[J]. 李爽.  畜牧兽医科技信息. 2013(02)
[3]毕赤酵母高效表达策略概述[J]. 陆永超,蒋琳.  微生物学免疫学进展. 2013(01)
[4]甲醇浓度对毕赤酵母表达重组人复合α干扰素分离纯化得率的影响[J]. 吴丹,储炬,王永红,庄英萍,张嗣良.  生物工程学报. 2011(12)
[5]毕赤酵母表达系统的实际应用研究[J]. 刘春凤.  厦门科技. 2011(03)
[6]细胞因子在疫苗中的免疫增强作用[J]. 罗满林,唐明森,鲁俊鹏.  中国兽药杂志. 2010(04)
[7]蛋白质分离纯化策略[J]. 陈华友,张春霞,马晓珂,齐向辉.  安徽农业科学. 2009(36)
[8]巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略[J]. 胡世界,罗素兰,张吉贞,长孙东亭.  生物技术. 2007(06)
[9]白细胞介素-2受体及其功能研究进展[J]. 王健,王瑜,叶松.  中国现代医学杂志. 2006(02)
[10]细胞因子诱导杀伤细胞联合白介素-2治疗肾细胞癌的疗效观察[J]. 雷开键,杜一平,贾钰铭,熊永祥,刘兴英,魏彪,裴玲,彭生才.  遵义医学院学报. 2005(01)

博士论文
[1]毕赤酵母表达系统及其应用[D]. 郭雨刚.中国科学技术大学 2012

硕士论文
[1]CD25结合位点修饰性hIL-2在毕赤酵母中的表达及活性鉴定[D]. 王松.中国农业科学院 2012
[2]不同饲养方式下奶牛血液生化指标测定与分析[D]. 宋平.东北农业大学 2007



本文编号：3377807