乳杆菌重组S-层蛋白的纯化及各型FMDV表位嵌入效果的鉴定
发布时间：2021-09-16 22:13
口蹄疫Foot-and-Mouth Disease, FMD);是由口蹄疫病毒Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)引起的一种偶蹄动物的急性、热性、高度传染性疾病,一旦暴发之后给畜牧业带来巨大的经济损失。目前疫苗接种是控制FMD的最重要措施之一,常用的疫苗是全病毒的灭活疫苗,灭活疫苗虽然在预防和控制FMD起着重要作用,但在疫苗应用当中显出很多不足之处,如纯化病毒颗粒难度大,储存病毒颗粒条件苛刻,疫苗接种后免疫效果不稳定等。目前,我国流行的FMD主要以A、O和Asia Ⅰ；型交替出现,而且FMDV各型之间几乎无交叉免疫保护力,所以单价疫苗在免疫实践中难以成效。本研究对已经构建的含有抗原基因SLP和SLP-MultiVP1的原核表达载体pGEX-SLP和pGEX-SLP-MultiVPl进行IPTG诱导表达,对获得含有GST标签蛋白的GST-SLP和GST-SLP-MultiVP1合蛋白,利用（?）ierce（?） GST Spin Purification Kit:亲和层析和氯化锂沉淀法进行纯化并将纯化结果进行比较。采用各型FMDV如A、O和Asia Ⅰ型...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：42 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GST-SLP融合蛋白的表达以及它的表达形式分析结果
乳杆菌重组S-层蛋白的纯化及各型FMDV表位嵌入的实效性鉴定GST-SLP-MuItiVPI融合蛋白的表达及其表达形式用SDS-PAGE分析结果可见，重组菌样经O.lmM/LIPTG,诱导培养3hkDa处出现了可疑蛋白条带（如图2所示），而未诱导的对照样则未条带。理论上GST标签蛋白分子量约为26kDa，目的蛋白SLP-MultiVkDa，二者融合大小应为80kDa。因此实际表达结果与预期融合蛋白导表达的菌样，既定条件进行超声破碎菌体后，经SDS-PAGE分析上清还是沉淀中均有目的条带分布，表明融合蛋白以部分可溶性蛋是大部分以包涵体的形式表达（如图2所示）。
按2.2.1和2.2.2方法进行大量诱导表达目的蛋白后，收集菌体沉淀，经2.2:5方法获得的纯化的蛋白样品进行SDS-PAGE分析（如图3所示）。结果表明：在71kDa (泳道1)和80kDa (泳道2)处显示出有一条优势蛋白条带。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乳源短乳杆菌M8 S-层蛋白的提纯及其生物学特征分析[J]. 肖荣,范郁冰,张丽丽,李宗军. 食品科学. 2012(07)
[2]乳酸杆菌S-层蛋白对鼠伤寒沙门氏菌黏附及入侵Caco-2细胞的拮抗作用[J]. 李鹏成,叶小兰,王志胜,庾庆华,杨倩. 微生物学报. 2010(09)
[3]几种乳酸菌S-层蛋白的普查以及slp基因的克隆与序列分析[J]. 双杰,包秋华,永胜,王艳霞,张和平,格日勒图. 中国乳品工业. 2010(08)
[4]口蹄疫诊断技术的研究进展[J]. 刘明,徐娜,李志勇,柳纪省. 生物技术通报. 2010(05)
[5]蛋白质分离纯化策略[J]. 陈华友,张春霞,马晓珂,齐向辉. 安徽农业科学. 2009(36)
[6]蛋白质分离纯化方法研究进展[J]. 王子佳,李红梅,弓爱君,曹艳秋,苑海涛. 化学与生物工程. 2009(08)
[7]口蹄疫基因工程疫苗研究进展[J]. 杨生海,殷宏,张杰,刘永生,陈豪泰,马丽娜,马艳平,丁耀忠. 江西农业学报. 2009(04)
[8]口蹄疫灭活疫苗研究进展[J]. 张淑刚,张永光. 动物医学进展. 2008(12)
[9]大肠杆菌中重组蛋白可溶性表达的研究进展及展望[J]. 余波,程安春,汪铭书. 黑龙江畜牧兽医. 2008(10)
[10]Asia Ⅰ口蹄疫vp2蛋白单克隆抗体的制备及单抗竞争ELISA方法的建立[J]. 向敏,张克山,卢顺,蔡利军,罗勇,张建民,何华,王勤刚,吴斌. 生物工程学报. 2008(09)
硕士论文
[1]多型FMDV的VP1表位基因在S-层蛋白嵌入型亚单位疫苗载体的构建及其初步鉴定[D]. 王敏.内蒙古农业大学 2013
[2]短小乳杆菌S-层蛋白质的原核表达及其体外粘附性的初步鉴定[D]. 王彩凤.内蒙古农业大学 2013
[3]L.brevis M8 S-层蛋白的黏附性及其引起Caco-2细胞蛋白质差异表达研究[D]. 范郁冰.湖南农业大学 2012
[4]瑞士乳杆菌S-层蛋白基因的克隆与表达[D]. 杨秀华.湖南农业大学 2010
本文编号：3397385
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：42 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GST-SLP融合蛋白的表达以及它的表达形式分析结果
乳杆菌重组S-层蛋白的纯化及各型FMDV表位嵌入的实效性鉴定GST-SLP-MuItiVPI融合蛋白的表达及其表达形式用SDS-PAGE分析结果可见，重组菌样经O.lmM/LIPTG,诱导培养3hkDa处出现了可疑蛋白条带（如图2所示），而未诱导的对照样则未条带。理论上GST标签蛋白分子量约为26kDa，目的蛋白SLP-MultiVkDa，二者融合大小应为80kDa。因此实际表达结果与预期融合蛋白导表达的菌样，既定条件进行超声破碎菌体后，经SDS-PAGE分析上清还是沉淀中均有目的条带分布，表明融合蛋白以部分可溶性蛋是大部分以包涵体的形式表达（如图2所示）。
按2.2.1和2.2.2方法进行大量诱导表达目的蛋白后，收集菌体沉淀，经2.2:5方法获得的纯化的蛋白样品进行SDS-PAGE分析（如图3所示）。结果表明：在71kDa (泳道1)和80kDa (泳道2)处显示出有一条优势蛋白条带。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乳源短乳杆菌M8 S-层蛋白的提纯及其生物学特征分析[J]. 肖荣,范郁冰,张丽丽,李宗军. 食品科学. 2012(07)
[2]乳酸杆菌S-层蛋白对鼠伤寒沙门氏菌黏附及入侵Caco-2细胞的拮抗作用[J]. 李鹏成,叶小兰,王志胜,庾庆华,杨倩. 微生物学报. 2010(09)
[3]几种乳酸菌S-层蛋白的普查以及slp基因的克隆与序列分析[J]. 双杰,包秋华,永胜,王艳霞,张和平,格日勒图. 中国乳品工业. 2010(08)
[4]口蹄疫诊断技术的研究进展[J]. 刘明,徐娜,李志勇,柳纪省. 生物技术通报. 2010(05)
[5]蛋白质分离纯化策略[J]. 陈华友,张春霞,马晓珂,齐向辉. 安徽农业科学. 2009(36)
[6]蛋白质分离纯化方法研究进展[J]. 王子佳,李红梅,弓爱君,曹艳秋,苑海涛. 化学与生物工程. 2009(08)
[7]口蹄疫基因工程疫苗研究进展[J]. 杨生海,殷宏,张杰,刘永生,陈豪泰,马丽娜,马艳平,丁耀忠. 江西农业学报. 2009(04)
[8]口蹄疫灭活疫苗研究进展[J]. 张淑刚,张永光. 动物医学进展. 2008(12)
[9]大肠杆菌中重组蛋白可溶性表达的研究进展及展望[J]. 余波,程安春,汪铭书. 黑龙江畜牧兽医. 2008(10)
[10]Asia Ⅰ口蹄疫vp2蛋白单克隆抗体的制备及单抗竞争ELISA方法的建立[J]. 向敏,张克山,卢顺,蔡利军,罗勇,张建民,何华,王勤刚,吴斌. 生物工程学报. 2008(09)
硕士论文
[1]多型FMDV的VP1表位基因在S-层蛋白嵌入型亚单位疫苗载体的构建及其初步鉴定[D]. 王敏.内蒙古农业大学 2013
[2]短小乳杆菌S-层蛋白质的原核表达及其体外粘附性的初步鉴定[D]. 王彩凤.内蒙古农业大学 2013
[3]L.brevis M8 S-层蛋白的黏附性及其引起Caco-2细胞蛋白质差异表达研究[D]. 范郁冰.湖南农业大学 2012
[4]瑞士乳杆菌S-层蛋白基因的克隆与表达[D]. 杨秀华.湖南农业大学 2010
本文编号：3397385
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