17-β雌二醇调控绵羊输卵管上皮细胞β-防御素1基因表达过程中NF-κB信号通路的研究
发布时间：2021-09-19 01:43
动物在自然界生存中会受到各种病菌侵染的威胁,因此动物在长期进化的过程中形成的先天性免疫系统可有效的对抗病原菌的侵染。防御素是一类富含半胱氨酸并广泛分布于各种动物组织和细胞的内源性阳离子抗菌肽（AMPs）,是先天性免疫系统的重要组成部分。由于防御素具有广谱的细菌和病毒抗性,可有效对抗病原菌的侵染,但其所具有的细胞毒性会对细胞生长不利,因此对防御素表达调控的研究有着重要的意义。之前的研究表明在绵羊发情期间,其血液雌激素变化同绵羊生殖器官内SBD1表达呈正相关,说明雌激素可能参与绵羊生殖器官内SBD1的表达调控。进一步研究表明SBD1mRNA在绵羊输卵管黏膜层上皮细胞游离面的胞质内表达,而固有层、肌层、结缔组织中无表达,因此可进行体外雌激素对绵羊输卵管上皮细胞内SBD1表达调控机制的研究,以阐明雌激素对绵羊输卵管上皮细胞中SBD1表达的调控机制。通过RT-qPCR方法检测不同剂量17-β雌二醇在不同时间段对SBD1表达的影响,证实了SBD1表达量在细胞添加10-8ME2后6h左右达到最高。通过RT-qPCR方法检测细胞添加10-8M E2后0至10.5h后细胞内SBD1表达量变化,结果发现添...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
插图和附表清单
缩略语表
1 引言
1.1 防御素的研究进展
1.1.1 防御素蛋白结构
1.1.2 防御素生物学活性
1.1.3 防御素的分类及分布
1.1.4 17-β雌二醇与绵羊β防御素表达关系
1.2 NF-κB信号通路研究进展
1.2.1 NF-κB信号通路介绍
1.2.2 NF-κB/Rel和IκB家族蛋白组成和功能
1.2.3 NF-κB信号通路激活途径
1.2.4 NF-κB信号通路的调节
1.2.5 NF-κB信号通路的终止
1.2.6 染色质免疫共沉淀技术
1.3 本研究的目的及意义
1.4 技术路线
2 实验一 17-β雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞SBD1表达的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 仪器设备
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验方法
2.2 实验结果
2.2.1 输卵管上皮细胞传代培养形态
2.2.2 输卵管上皮细胞总RNA检测结果
2.2.3 输卵管上皮细胞不同基因RT-qPCR扩增产物电泳结果
2.2.4 输卵管上皮细胞不同基因RT-qPCR扩增效率、扩增、熔解和熔解峰曲线
2.2.5 输卵管上皮细胞不同基因测序结果
2.2.6 E_2对绵羊输卵管上皮细胞SBD1表达的影响
2.2.7 E_2对绵羊输卵管上皮细胞Bcl-2和Bax表达的影响
2.3 讨论
2.4 小结
3 实验二 17-β雌二醇调控绵羊输卵管上皮细胞SBD1基因的信号转导机制
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.1.3 实验试剂
3.1.4 实验试剂的配置
3.1.5 实验方法
3.2 实验结果
3.2.1 17-β雌二醇调控SBD1表达过程中GPR30和雌激素受体的作用
3.2.2 17-β雌二醇调控SBD1表达过程中PKA、PKC和NF-κ B信号通路的的作用
3.3 讨论
3.3.1 细胞受体的种类和功能
3.3.2 17-β雌二醇诱导SBD1的表达通过GPR30和雌激素受体所介导
3.3.3 17-β雌二醇诱导SBD1表达的非基因组途径需要通过PKA、PKC和NF-κ B信号通路
3.4 小结
4 实验三 NF-κ B信号通路在17-β雌二醇调控绵羊输卵管上皮细胞SBD1基因表达中的作用
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 仪器设备
4.1.3 实验试剂与试剂配制
4.1.4 实验方法
4.2 实验结果
4.2.1 添加17-β雌二醇后细胞内NF-κ B信号通路中I-κBα蛋白变化
4.2.2 添加17-β雌二醇后细胞内NF-κ B信号通路中p-I-κ B α蛋白变化
4.2.3 RT-qPCR方法检测NF-κ B方法的建立
4.2.4 添加17-β雌二醇后细胞内NF-κ B表达量变化
4.2.5 添加17-β雌二醇后细胞质内NF-κB信号通路中p65蛋白变化
4.2.6 添加17-β雌二醇后细胞核内NF-κ B信号通路中p65蛋白变化
4.2.7 染色质免疫共沉淀实验步骤质量控制检验
4.2.8 RT-qPCR方法检测SBD1启动子基因方法的建立
4.2.9 添加17-β雌二醇后细胞核内NF-κB信号通路中p65蛋白结合SBD1启动子基因的变化
4.3 讨论
4.3.1 NF-κ B信号通路I-κ Bα蛋白发生泛素化
4.3.2 NF-κ B信号通路蛋白的磷酸化与脱磷酸化
4.3.3 p65蛋白发生核位移并参与SBD1基因的转录
4.3.4 NF-κB信号通路的终止
4.4 小结
5 结论
致谢
参考文献
作者简介
本文编号：3400756
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
插图和附表清单
缩略语表
1 引言
1.1 防御素的研究进展
1.1.1 防御素蛋白结构
1.1.2 防御素生物学活性
1.1.3 防御素的分类及分布
1.1.4 17-β雌二醇与绵羊β防御素表达关系
1.2 NF-κB信号通路研究进展
1.2.1 NF-κB信号通路介绍
1.2.2 NF-κB/Rel和IκB家族蛋白组成和功能
1.2.3 NF-κB信号通路激活途径
1.2.4 NF-κB信号通路的调节
1.2.5 NF-κB信号通路的终止
1.2.6 染色质免疫共沉淀技术
1.3 本研究的目的及意义
1.4 技术路线
2 实验一 17-β雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞SBD1表达的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 仪器设备
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验方法
2.2 实验结果
2.2.1 输卵管上皮细胞传代培养形态
2.2.2 输卵管上皮细胞总RNA检测结果
2.2.3 输卵管上皮细胞不同基因RT-qPCR扩增产物电泳结果
2.2.4 输卵管上皮细胞不同基因RT-qPCR扩增效率、扩增、熔解和熔解峰曲线
2.2.5 输卵管上皮细胞不同基因测序结果
2.2.6 E_2对绵羊输卵管上皮细胞SBD1表达的影响
2.2.7 E_2对绵羊输卵管上皮细胞Bcl-2和Bax表达的影响
2.3 讨论
2.4 小结
3 实验二 17-β雌二醇调控绵羊输卵管上皮细胞SBD1基因的信号转导机制
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.1.3 实验试剂
3.1.4 实验试剂的配置
3.1.5 实验方法
3.2 实验结果
3.2.1 17-β雌二醇调控SBD1表达过程中GPR30和雌激素受体的作用
3.2.2 17-β雌二醇调控SBD1表达过程中PKA、PKC和NF-κ B信号通路的的作用
3.3 讨论
3.3.1 细胞受体的种类和功能
3.3.2 17-β雌二醇诱导SBD1的表达通过GPR30和雌激素受体所介导
3.3.3 17-β雌二醇诱导SBD1表达的非基因组途径需要通过PKA、PKC和NF-κ B信号通路
3.4 小结
4 实验三 NF-κ B信号通路在17-β雌二醇调控绵羊输卵管上皮细胞SBD1基因表达中的作用
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 仪器设备
4.1.3 实验试剂与试剂配制
4.1.4 实验方法
4.2 实验结果
4.2.1 添加17-β雌二醇后细胞内NF-κ B信号通路中I-κBα蛋白变化
4.2.2 添加17-β雌二醇后细胞内NF-κ B信号通路中p-I-κ B α蛋白变化
4.2.3 RT-qPCR方法检测NF-κ B方法的建立
4.2.4 添加17-β雌二醇后细胞内NF-κ B表达量变化
4.2.5 添加17-β雌二醇后细胞质内NF-κB信号通路中p65蛋白变化
4.2.6 添加17-β雌二醇后细胞核内NF-κ B信号通路中p65蛋白变化
4.2.7 染色质免疫共沉淀实验步骤质量控制检验
4.2.8 RT-qPCR方法检测SBD1启动子基因方法的建立
4.2.9 添加17-β雌二醇后细胞核内NF-κB信号通路中p65蛋白结合SBD1启动子基因的变化
4.3 讨论
4.3.1 NF-κ B信号通路I-κ Bα蛋白发生泛素化
4.3.2 NF-κ B信号通路蛋白的磷酸化与脱磷酸化
4.3.3 p65蛋白发生核位移并参与SBD1基因的转录
4.3.4 NF-κB信号通路的终止
4.4 小结
5 结论
致谢
参考文献
作者简介
本文编号：3400756
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3400756.html
