LPIN1基因对水牛乳腺上皮细胞甘油三酯和脂肪酸合成的影响

发布时间：2021-09-28 15:08

　　本试验旨在通过构建腺病毒pDC316-LPIN1-eGFP载体并包装出相应的脂素腺病毒颗粒（Ad-LPIN1）,探索LPIN1基因对水牛乳腺上皮细胞甘油酯和脂肪酸合成的影响。将Ad-LPIN1腺病毒颗粒感染水牛乳腺上皮细胞,通过实时荧光定量PCR、免疫荧光染色（immunofluorescence,IF）检测LPIN1基因和lipin1蛋白的表达情况;通过油红O染色和甘油三酯测定甘油三酯;通过实时荧光定量PCR检测LIPN1基因对甘油三酯和脂肪酸合成相关基因表达的影响。本试验成功构建pDC316-LPIN1-eGFP载体并获得高质量的Ad-LPIN1腺病毒颗粒。Ad-LPIN1腺病毒颗粒感染水牛乳腺上皮细胞（MOI=50）后LPIN1基因mRNA相对上调>5 000倍,差异极显著（P<0.01）,lipin1蛋白表达量增多且主要在细胞核中表达。油红O染色结果显示,过表达LPIN1基因后细胞中的脂滴明显减少。甘油三酯测定结果显示,过表达LPIN1基因后细胞中甘油三酯含量下降,差异极显著（P<0.01）。实时荧光定量PCR检测表明,LPIN1基因过表达会使过氧化物酶体增殖... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(10)北大核心

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

pDC316-LPIN1-eGFP腺病毒载体的构建及其腺病毒的包装和感染

油红O染色后,Ad-LPIN1试验组中脂滴较少,而Ad-eGFP对照组中细胞核周围环绕着红色脂滴,且细胞呈多角形(图3A)。检测细胞中甘油三酯的含量,Ad-LPIN1试验组较Ad-eGFP对照组下降了43.63%,差异极显著(P<0.01);而细胞上清中甘油三酯的检测,Ad-LPIN1试验组较Ad-eGFP对照组略有下降,差异不显著(P>0.05)(图3B)。实时荧光定量PCR检测结果说明,相对Ad-eGFP对照组,Ad-LPIN1上调PPARα、PPARγ、SREBP1基因的表达,分别上调至2.295倍(P<0.01)、1.155倍(P<0.05)、1.304倍(P<0.01);Ad-LPIN1下调SCD、FASN、ACSL1、ACACA基因的表达,分别下调至83.17%、51.30%、44.24%和41.18%(P<0.01,图3C)。图3 Ad-LPIN1对水牛乳腺上皮细胞甘油三酯和脂肪酸合成的影响

Ad-LPIN1对水牛乳腺上皮细胞甘油三酯和脂肪酸合成的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]水牛原代体细胞慢病毒感染体系的建立[J]. 段安琴,陆杏蓉,马小娅,梁莎莎,庞春英,梁贤威,邓廷贤.  中国畜牧兽医. 2019(10)
[2]水牛乳资源及其理化特性研究进展[J]. 谢秉锵,瓦云超,伍云,黄嘉隷,顾瑞霞.  中国乳品工业. 2018(11)
[3]水牛LPIN1基因克隆及序列分析[J]. 段安琴,庞春英,邓廷贤,陆杏蓉,马小娅,梁莎莎,梁贤威.  中国畜牧兽医. 2018(10)
[4]水牛乳汁中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定[J]. 段安琴,庞春英,朱鹏,邓廷贤,陆杏蓉,马小娅,梁莎莎,梁贤威.  中国畜牧兽医. 2017(11)
[5]腺病毒载体转染水牛不同原代体细胞的效果比较[J]. 段安琴,庞春英,朱鹏,陆杏蓉,邓廷贤,梁贤威.  中国畜牧兽医. 2016(10)

博士论文
[1]Lipinl参与的细胞代谢调控作用研究[D]. 王鉴.华东理工大学 2018

硕士论文
[1]SREBP1基因在水牛乳腺上皮细胞中的功能研究[D]. 陈秋明.广西大学 2016



本文编号：3412142