miR-100-5p与FGF21对羊驼黑色素细胞色素生成的调控
发布时间：2021-10-11 23:23
近年来的研究证实,miRNAs在哺乳动物毛色生成过程中发挥着重要作用。Targetscan7.1、miRDB和miRBase等生物信息学分析发现miR-100-5p与FGF21存在靶结合位点。目前,关于miR-100-5p与FGF21调控羊驼黑色素细胞中黑色素生成的研究尚未报道。为了探索miR-100-5p与FGF21对羊驼黑色素细胞色素生成的调控作用,本实验如下:构建pmirGLO-FGF21 3’UTR载体并进行双荧光检测,FGF21真核表达载体、FGF21-siRNA、miR-100-5p真核表达载体分别转染至羊驼黑色素细胞,检测转染后羊驼黑色素细胞中黑色素含量的变化,检测相关毛色基因FGF21、P-ERK、MITF、TYR、TYRP2在mRNA及蛋白水平的变化。实验结果如下:（1）羊驼黑色素细胞中转染FGF21真核表达载体,以深入研究FGF21对黑色素生成的影响。黑色素含量测定结果显示:FGF21转染后,黑色素含量显著下降。qRT-PCR结果显示:FGF21转染后,MITF、TYR、TYRP2及ERK1/2的mRNA相对表达量显著下降。免疫印迹结果分析显示:FGF21转染后,M...
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１?ＦＧＦ２１?ＰＣＲ扩增产物??－
３．３?ＦＧＦ２１真核表达载体构建及验证??羊驼ＦＧＦ２１基因与ＰＭＳＣＶ表达载体连接后，初步进行菌液ＰＣＲ验证连接是否成??功。菌液ＰＣＲ获得单一的明亮条带，片段大小约６３０?ｂｐ?（图３－３）。华大基因测序结果??显示ｐＭＳＣＶ表达载体上含有基因ＦＧＦ２１的ＣＤＳ区，即ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１重组质粒构建??成功。??２０００??２００??ＵＫ）?Ｉ??图３－３?ｐＭＳＣ－ＦＧＦ２１表达载体菌液ＰＣＲ验证??Ｆｉｇ．３－３?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｌｉｑｕｉｄ?ＰＣＲ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ??３．４?ＦＧＦ２１和ＦＧＦ２１－ｓｉＲＮＡ转染羊驼黑色素细胞的效率??荧光倒置显微镜下观察转染后细胞的形态，发现羊驼黑色素细胞中有大量的绿色荧??光蛋白表达，表明ｐＭＳＣＶ空载组和ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１实验组、ＮＣ对照组和ＦＧＦ２１－ｓｉＲＮＡ??实验组成功转染至细胞内。ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ结果显示ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１转染组中??ＦＧＦ２１的ｍＲＮＡ和蛋白表达量均显著提高（尸＜０．０１）（图３．４?Ａ），而ＦＧＦ２卜ｓｉＲＮＡ转??染中ＦＧＦ２１的ｍＲＮＡ和蛋白表达量均显著下降（Ｐ＜０．０１?）（图３．４?Ｂ）。??－２１?－??
图３－２ＦＧＦ２１克隆载体双酶切验证??Ｆｉｇ．３－２?Ｄｕｂｌｅ?ｅｎｚｙｍｅ－ｄｉｇｅｓｔｅｄ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＦＧＦ２１?ｃｌｏｎｉｎｇ?ｖｅｃｔｏｒ??３．３?ＦＧＦ２１真核表达载体构建及验证??羊驼ＦＧＦ２１基因与ＰＭＳＣＶ表达载体连接后，初步进行菌液ＰＣＲ验证连接是否成??功。菌液ＰＣＲ获得单一的明亮条带，片段大小约６３０?ｂｐ?（图３－３）。华大基因测序结果??显示ｐＭＳＣＶ表达载体上含有基因ＦＧＦ２１的ＣＤＳ区，即ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１重组质粒构建??成功。??２０００??２００??ＵＫ）?Ｉ??图３－３?ｐＭＳＣ－ＦＧＦ２１表达载体菌液ＰＣＲ验证??Ｆｉｇ．３－３?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｌｉｑｕｉｄ?ＰＣＲ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ??３．４?ＦＧＦ２１和ＦＧＦ２１－ｓｉＲＮＡ转染羊驼黑色素细胞的效率??荧光倒置显微镜下观察转染后细胞的形态，发现羊驼黑色素细胞中有大量的绿色荧??光蛋白表达，表明ｐＭＳＣＶ空载组和ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１实验组、ＮＣ对照组和ＦＧＦ２１－ｓｉＲＮＡ??实验组成功转染至细胞内。ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ结果显示ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１转染组中??ＦＧＦ２１的ｍＲＮＡ和蛋白表达量均显著提高（尸＜０．０１）（图３．４?Ａ），而ＦＧＦ２卜ｓｉＲＮＡ转??染中ＦＧＦ２１的ｍＲＮＡ和蛋白表达量均显著下降（Ｐ＜０．０１?）（图３．４?Ｂ）。??－２１?－??
【参考文献】：
期刊论文
[1]刺蒺藜对小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响[J]. 杨柳,路建伟,安靓,姜萱. 南方医科大学学报. 2006(12)
博士论文
[1]不同毛色羊驼皮肤microRNAs的全基因组表达谱分析和功能研究[D]. 田雪.山西农业大学 2013
硕士论文
[1]瓯江彩鲤“全红”与“粉玉”群体基因组扫描分析红、白体色的遗传机制以及鲤鱼FGF基因家族研究[D]. 蒋立坤.上海海洋大学 2016
本文编号：3431436
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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３．３?ＦＧＦ２１真核表达载体构建及验证??羊驼ＦＧＦ２１基因与ＰＭＳＣＶ表达载体连接后，初步进行菌液ＰＣＲ验证连接是否成??功。菌液ＰＣＲ获得单一的明亮条带，片段大小约６３０?ｂｐ?（图３－３）。华大基因测序结果??显示ｐＭＳＣＶ表达载体上含有基因ＦＧＦ２１的ＣＤＳ区，即ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１重组质粒构建??成功。??２０００??２００??ＵＫ）?Ｉ??图３－３?ｐＭＳＣ－ＦＧＦ２１表达载体菌液ＰＣＲ验证??Ｆｉｇ．３－３?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｌｉｑｕｉｄ?ＰＣＲ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ??３．４?ＦＧＦ２１和ＦＧＦ２１－ｓｉＲＮＡ转染羊驼黑色素细胞的效率??荧光倒置显微镜下观察转染后细胞的形态，发现羊驼黑色素细胞中有大量的绿色荧??光蛋白表达，表明ｐＭＳＣＶ空载组和ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１实验组、ＮＣ对照组和ＦＧＦ２１－ｓｉＲＮＡ??实验组成功转染至细胞内。ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ结果显示ｐＭＳＣＶ－ＦＧＦ２１转染组中??ＦＧＦ２１的ｍＲＮＡ和蛋白表达量均显著提高（尸＜０．０１）（图３．４?Ａ），而ＦＧＦ２卜ｓｉＲＮＡ转??染中ＦＧＦ２１的ｍＲＮＡ和蛋白表达量均显著下降（Ｐ＜０．０１?）（图３．４?Ｂ）。??－２１?－??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]刺蒺藜对小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响[J]. 杨柳,路建伟,安靓,姜萱. 南方医科大学学报. 2006(12)
博士论文
[1]不同毛色羊驼皮肤microRNAs的全基因组表达谱分析和功能研究[D]. 田雪.山西农业大学 2013
硕士论文
[1]瓯江彩鲤“全红”与“粉玉”群体基因组扫描分析红、白体色的遗传机制以及鲤鱼FGF基因家族研究[D]. 蒋立坤.上海海洋大学 2016
本文编号：3431436
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