PiggyBac转座子介导的脂肪代谢相关基因的转基因功能研究
发布时间：2021-10-12 00:36
牛肉做为世界消费量第二的肉类食品得到越来越多消费者的青睐。培育出肉质好、营养高的肉牛品种，是育种工作者努力的方向。目前，转基因技术是肉牛改良的重要手段之一，寻找安全、高效的转基因载体及改良作用明显的目的基因成为转基因研究的重要课题。PiggyBac（PB）转座子在转基因昆虫、小鼠等的研究中充分体现了其优势，但在转基因牛中的研究还不多。脂肪酸结合蛋白3（Fatty acid binding protein3，FABP3）是影响肌内脂肪（Intramuscular fat，IMF）沉积的候选基因，fat-1基因编码的ω-3脂肪酸脱氢酶能促进ω-3多不饱和脂肪酸（Polyunsaturated fattyacids，PUFAs）的合成，对人类健康有重要作用。本研究探索了PB转座子在牛基因组中的转座特点，并在小鼠水平对FABP3和Bfat-1（牛源化fat-1）基因进行转基因研究，为生产转基因牛探索新方法、寻找新基因提供了理论依据。本研究共得到如下结果：1．构建了PB[CMV-EGFP]、pcDNA-PBase二元转座体系，利用细胞核电转染技术转染牛耳组织成纤维细胞，发现在转座酶（PBase）...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RNAi的作用机制Fig.1.1ThemechanismofRNAi
启动FokⅠ的“分子剪刀”活性，在结合位点产生双链断裂，继而启动细胞的修复机制。细胞的修复机制包括两种类型：一是存在供体模板时，启动同源重组修复途径，将外源基因定点插入到靶基因内，或置换靶基因的特定序列，实现基因的敲入（图1.2A）；二是不存在供体模板时，启动非同源重组末端连接修复途径，在基因内引入了碱基突变，导致基因功能的缺失，实现基因的敲除（图1.2B）。图1.2 锌指核酸酶介导的基因打靶Fig. 1.2 Zinc-finger nucleases mediated gene targeting利用ZFN技术进行基因的定点敲除，已经在果蝇(Bibikova et al., 2002)、斑马鱼(Doyon et al.,2008)、大鼠(Geurts et al., 2009)及小鼠(Carbery et al., 2010)等试验动物上获得了成功，广泛应用于
中国农业科学院博士学位论文 第一章 文献综述6采用“复制-粘贴”机制进行转座（图1.4A），即原始的转座子DNA不变，转录出RNA作为中间体，RNA在转座子编码的逆转录酶的催化下逆转录成DNA，并在转座子编码的整合酶的作用下插入到基因组中。DNA型转座子使用“剪切-粘贴”的转座机制(图1.4B)，即在转座酶的作用下，转座子从原位置切除并整合到基因组中新的位置（刘琳等，2011）。图1.4 转座子的转座机制a：逆转录转座子使用 复制-粘贴 的转座机制。b：DNA转座子使用 剪切-粘贴 的转座机制。Fig.1.4 Transposition mechanism of different transposonsa: The copy-paste transposition mechanism of retrot ransposons. b: The copy-paste transposition mechanism of DNA transposon.自 McClintock (1950)在玉米中发现第一个转座子以来，转座子被发现广泛存在于大多数的微生物、动物和植物的基因组中
本文编号：3431549
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RNAi的作用机制Fig.1.1ThemechanismofRNAi
启动FokⅠ的“分子剪刀”活性，在结合位点产生双链断裂，继而启动细胞的修复机制。细胞的修复机制包括两种类型：一是存在供体模板时，启动同源重组修复途径，将外源基因定点插入到靶基因内，或置换靶基因的特定序列，实现基因的敲入（图1.2A）；二是不存在供体模板时，启动非同源重组末端连接修复途径，在基因内引入了碱基突变，导致基因功能的缺失，实现基因的敲除（图1.2B）。图1.2 锌指核酸酶介导的基因打靶Fig. 1.2 Zinc-finger nucleases mediated gene targeting利用ZFN技术进行基因的定点敲除，已经在果蝇(Bibikova et al., 2002)、斑马鱼(Doyon et al.,2008)、大鼠(Geurts et al., 2009)及小鼠(Carbery et al., 2010)等试验动物上获得了成功，广泛应用于
中国农业科学院博士学位论文 第一章 文献综述6采用“复制-粘贴”机制进行转座（图1.4A），即原始的转座子DNA不变，转录出RNA作为中间体，RNA在转座子编码的逆转录酶的催化下逆转录成DNA，并在转座子编码的整合酶的作用下插入到基因组中。DNA型转座子使用“剪切-粘贴”的转座机制(图1.4B)，即在转座酶的作用下，转座子从原位置切除并整合到基因组中新的位置（刘琳等，2011）。图1.4 转座子的转座机制a：逆转录转座子使用 复制-粘贴 的转座机制。b：DNA转座子使用 剪切-粘贴 的转座机制。Fig.1.4 Transposition mechanism of different transposonsa: The copy-paste transposition mechanism of retrot ransposons. b: The copy-paste transposition mechanism of DNA transposon.自 McClintock (1950)在玉米中发现第一个转座子以来，转座子被发现广泛存在于大多数的微生物、动物和植物的基因组中
本文编号：3431549
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