鸡源沙门氏菌API20E和PCR检测

发布时间：2021-10-28 05:50

　　本研究从秦皇岛、北京和辽宁等鸡场采集病料,经过分离培养、纯培养及形态学观察,获得10个分离菌株,以金黄色葡萄球菌（ATCC25923）为参考菌株,采用API20E和PCR两种方法对其鉴定。API20E检测结果表明：有7株为沙门氏菌,3株为非沙门氏菌；沙门氏菌16S rRNA;基因序列PCR扩增、序列分析表明：3株非沙门氏菌和金黄色葡萄球菌参考菌株未扩出,而7株沙门氏菌扩出预期的条带,进一步对其序列与NCBI上登陆的各种沙门氏菌分析表明,它们属于肠道沙门氏菌。说明API20E和PCR方法都适用于沙门氏菌的快速鉴定,且两种方法结合可增加鉴定结果的准确性。 

【文章来源】：山西农业大学山西省

【文章页数】：36 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
目录
摘要
文献综述
    1 微生物与生化沙门氏菌的检测法
        1.1 标准的沙门氏菌检测法(GB 4789.4-2010)
            1.1.1 疏水网格滤膜法(hydrophobic grid-membrane filter,HGMF)
            1.1.2 显色培养基法
            1.1.3 添加物质法
        1.2 自动微生物鉴定系统检测沙门氏菌
        1.3 4-甲基伞形酮辛酯(MUCAP)试剂检测方法
        1.4 沙门氏菌污染肉的快速检验
    2 免疫学沙门氏菌的检测法
        2.1 免疫荧光技术(Immuno-fluorescence technique)
        2.2 酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)
        2.3 自动酶标免疫测仪
        2.4 乳胶凝集法(latex agglutination test)
        2.5 免疫扩散法(immunodiffusion method)
        2.6 免疫磁珠法(MACS)
        2.7 免疫沉淀反应(Immunoprecipitation)
        2.8 葡萄球菌A蛋白协凝试验法(Staphylococcal Protein A简称SPA)
    3 分子生物学检测法
        3.1 PCR技术
            3.1.1 Real-time PCR
            3.1.2 Multiplex PCR技术
            3.1.3 Nested PCR
            3.1.4 RT-PCR
        3.2 基因芯片(DNA chip)
        3.3 环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)
        3.4 核酸分子杂交
    4 其他检测方法
        4.1 噬菌体裂解法
        4.2 电阻抗法
        4.3 生物传感器检测法(Biosensor)
前言
1 材料
    1.1 菌株来源
    1.2 主要试剂
    1.3 主要仪器
2 方法
    2.1 API20E试剂条鉴定
    2.2 PCR检测
        2.2.1 细菌模版DNA的提取
        2.2.2 细菌模版DNA的凝胶电泳检测
        2.2.3 PCR引物设计
        2.2.4 PCR
3 结果
    3.1 API 20E生化鉴定结果
    3.2 基因组DNA提取结果
    3.3 16S rRNA扩增结果
    3.4 供试菌株16S rRNA核酸序列的遗传距离与同源性比较
    3.5 供试菌株16S rRNA核酸序列同源性分析
4 分析与讨论
参考文献
Abstract
附件1
    BJ090504-1
    LN091007-1
    HQ030710-1
    LT080910-1
    HQ010915-1
    HQ020508-1
    HQ030906-1
致谢



本文编号：3462365