鸭疫里默氏杆菌RseP阳性和阴性菌株的比较
发布时间：2021-10-28 06:00
鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,R.anatipestifer）可侵害鸭、鹅、火鸡、鸡、野鸡等多种动物,主要侵害2-8周龄鸭,是危害水禽养殖业的主要病原之一。鸭疫里默氏杆菌存在大肠杆菌RseP基因相似的核苷酸序列,编码金属蛋白酶。大肠杆菌RseP蛋白酶通过裂解抗σE蛋白（RseA）,参与细胞膜应激反应,在细菌抗应激中具有重要作用。本文在PCR检测R.anatipestifer的RseP基因的基础上,对基因检测阴性和阳性菌株的菌体蛋白中RseP蛋白、生长、利用金属离子、致病性、对不利因素的抗性等进行测定,比较菌株间的差异性,为进一步研究RseP基因的功能奠定基础。主要研究内容及结果如下:1鸭疫里默氏杆菌RseP的检测以OmpA基因特异性PCR检测,确定为鸭疫里默氏杆菌的22株细菌为研究对象,利用PCR特异性扩增RseP基因片段进行分类,结果显示,RA20、RA22、RA24、RA25、RA26、RA27、RA28、RA29、RA30、RA31、RA33、RA38、RA39、RA40、RA41、RA47和RA48株等17株细菌为Rse...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR扩增RseP片段Fig.1TheresultofPCRamplificationofRsePgene
西南大学兽医硕士学位论文22pET-32a，琼脂糖电泳回收目的DNA片段（267bp）和线性化pET-32a（大约5800bp）（图4）。将目的DNA片段与线性化pET-32a连结、转化，获得阳性克拢阳性克隆用质粒pET-32a的鉴定引物pET-32a-F1/pET-R进行PCR扩增，结果如图（图5），与预期大小967bp一致。将构建的重组表达质粒pET-32a-RseP转入E.coliBL21(DE)，经IPTG诱导，能表达重组蛋白（图6）。重组蛋白以胞内可溶性形式存在（图7）。AB图2.PCR扩增OmpA片段Fig.2TheresultofPCRamplificationofOmpAgeneM：MarkerDL2000（100，250，500，750，1000，2000bp）；A：1~8：RA34、RA35、RA36、RA37、RA42、RA43、RA44和RA25号菌扩增物；B：1-4：RA19和RA46的RseP扩增产物；5-8：RA19和RA46的OmpA扩增产物；C：1-17：RA20、RA22、RA24、RA45、RA26、RA27、RA28、RA29、RA30、RA31、RA33、RA38、RA39、RA40、RA41、RA47和RA48的OmpA扩增产物M：DNAMarkerDL2000；A:1~8：ThePCRproductofOmpAgeneinRA34,RA35,RA36,RA37,RA42,RA43,RA44,RA45;B.1~4:ThePCRproductofRsePgeneinRA19andRA46;5~8:ThePCRproductofOmpAgeneinRA19andRA46;C:1~17：ThePCRproductofRsePgeneinRA20,RA22,RA24,RA26,RA25,RA27,RA28,RA29,RA30,RA31,RA33,RA38,RA39,RA40,RA41,RA47,RA48
第3章鸭疫里默氏杆菌RseP阳性和阴性菌株的比较23图3.琼脂糖电泳检测RseP基因的PCR扩增产物Fig.3TheresultofPCRamplificationofRsePgene1：RseP基因的PCR扩增产物；M：DNAMarkerDL100001：ThePCRproductofRsePgene；M：DNAMarkerDL10000ABC图4.重组质粒pMD19-RseP的双酶切鉴定Fig.4IdentificationofpMD19-RsePdigestedbyrestrictionM：DNAMarkerDL2000；1~2：pMD19-RseP双酶切产物；3~4：pET-32a双酶切产物M：DNAMarkerDL2000；1~2：TheproductsofpMD19-RsePdigestedbyBamHΙ、HindIII；3~4：TheproductsofpET-32adigestedbyBamHΙ、HindIII
本文编号：3462375
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
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PCR扩增RseP片段Fig.1TheresultofPCRamplificationofRsePgene
西南大学兽医硕士学位论文22pET-32a，琼脂糖电泳回收目的DNA片段（267bp）和线性化pET-32a（大约5800bp）（图4）。将目的DNA片段与线性化pET-32a连结、转化，获得阳性克拢阳性克隆用质粒pET-32a的鉴定引物pET-32a-F1/pET-R进行PCR扩增，结果如图（图5），与预期大小967bp一致。将构建的重组表达质粒pET-32a-RseP转入E.coliBL21(DE)，经IPTG诱导，能表达重组蛋白（图6）。重组蛋白以胞内可溶性形式存在（图7）。AB图2.PCR扩增OmpA片段Fig.2TheresultofPCRamplificationofOmpAgeneM：MarkerDL2000（100，250，500，750，1000，2000bp）；A：1~8：RA34、RA35、RA36、RA37、RA42、RA43、RA44和RA25号菌扩增物；B：1-4：RA19和RA46的RseP扩增产物；5-8：RA19和RA46的OmpA扩增产物；C：1-17：RA20、RA22、RA24、RA45、RA26、RA27、RA28、RA29、RA30、RA31、RA33、RA38、RA39、RA40、RA41、RA47和RA48的OmpA扩增产物M：DNAMarkerDL2000；A:1~8：ThePCRproductofOmpAgeneinRA34,RA35,RA36,RA37,RA42,RA43,RA44,RA45;B.1~4:ThePCRproductofRsePgeneinRA19andRA46;5~8:ThePCRproductofOmpAgeneinRA19andRA46;C:1~17：ThePCRproductofRsePgeneinRA20,RA22,RA24,RA26,RA25,RA27,RA28,RA29,RA30,RA31,RA33,RA38,RA39,RA40,RA41,RA47,RA48
第3章鸭疫里默氏杆菌RseP阳性和阴性菌株的比较23图3.琼脂糖电泳检测RseP基因的PCR扩增产物Fig.3TheresultofPCRamplificationofRsePgene1：RseP基因的PCR扩增产物；M：DNAMarkerDL100001：ThePCRproductofRsePgene；M：DNAMarkerDL10000ABC图4.重组质粒pMD19-RseP的双酶切鉴定Fig.4IdentificationofpMD19-RsePdigestedbyrestrictionM：DNAMarkerDL2000；1~2：pMD19-RseP双酶切产物；3~4：pET-32a双酶切产物M：DNAMarkerDL2000；1~2：TheproductsofpMD19-RsePdigestedbyBamHΙ、HindIII；3~4：TheproductsofpET-32adigestedbyBamHΙ、HindIII
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